王艳华
- 作品数：20 被引量：78H指数：6
- 供职机构：宁夏医科大学基础医学院更多>>
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- miR-125b甲基化在同型半胱氨酸促进血管平滑肌细胞增殖中的作用被引量：7
- 2015年
- 目的探讨同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)促进血管平滑肌细胞增殖中miR-125b甲基化的作用。方法原代培养人脐静脉平滑肌细胞(VSMCs),并分为空白对照组(0μmol·L-1Hcy),不同浓度Hcy干预组(50、100、200及500μmol·L-1Hcy),以荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-125b的表达变化;利用miR-125b前体和抑制剂转染VSMCs后MTT法检测细胞增殖活性;生物信息学分析miR-125b启动子区Cp G岛分布情况,巢式降落式甲基特异性PCR(nt-MSP)法检测miR-125b甲基化状态的变化;并利用DNA甲基化酶抑制剂5-氮杂胞苷(AZC)干预细胞后再次检测miR-125b的表达。结果与对照组相比,100,200及500μmol·L-1Hcy可使miR-125b的表达水平降低,差异有显著性(P<0.01);miR-125b前体可以抑制VSMCs增殖,而miR-125b抑制剂可以促进VSMCs增殖(P<0.01);以miR-125b基因上游3 700 bp作为研究对象,生物信息学分析发现miR-125b启动子区含有一个长度为792bp(1881-2672区域)的CpG岛,且在Hcy干预下miR-125b的甲基化水平增强(P<0.01);而用AZC干预后,发现miR-125b表达上调,差异有显著性(P<0.05)。结论 Hcy可能通过下调miR-125b表达从而促进VSMCs增殖,可能通过上调miR-125b基因甲基化水平从而下调miR-125b表达。
- 刘现梅曹成建田珏赵丽孔繁琪周龙霞陈久凯王艳华杨晓玲贾月霞姜怡邓
- 关键词：同型半胱氨酸DNA甲基化血管平滑肌细胞动脉粥样硬化
- ABCA1、ACAT1 DNA甲基化在Hcy致THP-1单核源性泡沫细胞胆固醇流出中作用研究被引量：9
- 2014年
- 目的探讨ABCA1、ACAT1 DNA甲基化在同型半胱氨酸(Hcy)致THP-1单核源性泡沫细胞胆固醇流出中的作用。方法复制泡沫细胞模型,用50、100、200、500μmol·L-1Hcy和100μmol·L-1Hcy+叶酸+维生素B12(100+F+V)干预,并设对照组(0μmol·L-1Hcy)。油红O染色观察泡沫细胞形成,巢式降落式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)检测ABCA1、ACAT1 DNA甲基化水平,并分析两者比值变化;ELISA-like法检测DNA甲基转移酶(DNMTs)活性;化学比色法分析细胞内胆固醇含量。结果成功复制了泡沫细胞模型;给予不同浓度Hcy刺激后,ABCA1 DNA甲基化改变呈上升趋势,ACAT1 DNA甲基化改变呈下降趋势,给予100+F+V干预后可逆转上述变化,其中ABCA1 DNA甲基化改变更明显;同时,不同浓度Hcy可使泡沫细胞内DNMTs活性和胆固醇含量增加。结论 ABCA1和ACAT1 DNA甲基化的改变参与了Hcy致THP-1单核源性泡沫细胞胆固醇流出,DNMTs可能起关键调控作用。
- 杨安宁王磊周龙霞赵丽王艳华蔡欣曹成建杨程陈久凯马文斌姜怡邓
- 关键词：酰基辅酶ADNA甲基化胆固醇流出
- DNA甲基转移酶1在一氧化氮合酶抑制剂诱导的滋养细胞自噬中的作用被引量：4
- 2019年
- 目的探讨DNA甲基转移酶1(DNMT1)在一氧化氮合酶抑制剂L-NAME诱导的胎盘滋养细胞自噬中的作用。方法 L-NAME干预滋养细胞后,Western blot检测LC3BⅡ/Ⅰ和p62的表达;qRT-PCR和Western blot检测DNMT1的表达水平;另外,干扰和过表达DNMT1后,检测LC3BⅡ/Ⅰ和p62的表达水平。结果与对照组比较,L-NAME组LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表达增加,而p62表达显著降低(P <0.05);且DNMT1表达降低(P <0.05)。另外,干扰DNMT1后,LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表达升高,而p62降低(P <0.05);相反,过表达DNMT1后,LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表达降低,而p62表达增加。结论 DNMT1能够抑制L-NAME诱导的胎盘滋养细胞发生自噬。
- 马晓莉吴凯张辉王艳华柴丽芬杨晓玲姜怡邓张慧萍
- 关键词：DNA甲基转移酶1N-硝基-L-精氨酸甲酯子痫前期滋养细胞自噬
- MMP-9/TIMP-1在HHcy致ApoE^(-/-)小鼠肾脏损伤中的作用机制被引量：6
- 2015年
- 目的探讨高同型半胱氨酸血症(HHcy)导致Apo E-/-小鼠肾脏损伤的作用机制,为HHcy所致肾脏疾病的预防和治疗提供理论和实验依据,为肾病患者的疾病监测提供新的指标。方法将5周龄雄性纯合子Apo E-/-小鼠随机分组:Apo E-/-对照组饲以普通饮食,Apo E-/-高蛋氨酸组饲以高蛋氨酸饮食,Apo E-/-干预组饲以加叶酸和维生素B12的高蛋氨酸饮食,5周龄SPF级C57BL/6J雄鼠饲以普通饮食作为正常对照组,喂养14周后,生化分析仪测定血清同型半胱氨酸(Hcy)、肌酐及尿素浓度,透射电镜和PAS染色检测小鼠肾脏损伤情况,荧光定量PCR检测肾脏基质金属蛋白酶9(MMP-9)和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)m RNA表达水平,并以免疫组织化学染色法分析肾脏MMP-9蛋白表达,ELISA检测TIMP-1蛋白表达。结果与正常对照组相比,Apo E-/-高蛋氨酸组血清Hcy、肌酐及尿素浓度分别升高了3.66倍、1.1倍和1.6倍(P<0.01);透射电镜和PAS染色结果显示,Apo E-/-高蛋氨酸组较正常对照组肾脏损伤明显,荧光定量PCR结果显示MMP-9及TIMP-1 m RNA表达则分别升高了5.25倍和1.38倍(P<0.01);免疫组织化学结果显示Apo E-/-高蛋氨酸组MMP-9表达较正常对照组明显升高(P<0.01);ELISA结果显示Apo E-/-高蛋氨酸组TIMP-1蛋白表达比正常对照组明显升高(P<0.01)。与Apo E-/-高蛋氨酸组相比,Apo E-/-干预组血清Hcy浓度下降,且肌酐和尿素浓度均降低(P<0.01);透射电镜和PAS染色结果显示,Apo E-/-干预组肾脏损伤较Apo E-/-高蛋氨酸组减轻。血清Hcy浓度与其肌酐及尿素浓度呈正相关(r2=0.4344,P<0.0001;r2=0.4478,P<0.0001),与MMP-9/TIMP-1比值也呈正相关(r2=0.39309,P<0.001),且小鼠肾脏MMP-9/TIMP-1比值与肌酐及尿素浓度也成正相关(r2=0.1464,P<0.05;r2=0.3027,P<0.01)。结论 HHcy可能是经MMP-9/TIMP-1比例上调致细胞外基质降解,继而导致肾脏损伤。
- 孔繁琪马胜超张辉和杨杨赵丽孙炜炜曹成建王艳华田珏杨晓玲姜怡邓
- 关键词：高同型半胱氨酸血症基质金属蛋白酶9肾脏损伤
- OX40/OX40L共刺激信号在血管平滑肌细胞增殖中的作用被引量：1
- 2014年
- 目的观察OX40/OX40L对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响。方法原代培养人脐静脉血管平滑肌细胞,设计OX40L小分子干扰片段,转染VSMCs。实验分3组院OX40LRNA干扰组(SiOX40L)、NC组和空白对照组( Con)。将SiOX40L和NC用脂质体2000转染入VSMCs,提取细胞的总RNA,逆转录成cDNA,用real-timePCR的方法检测VSMCs中OX40L和OX40的mRNA表达,用免疫组织化学方法检测VSMCs中的OX40L的蛋白表达,并用MTT法检测OX40L对VSMCs增殖的影响。结果 SiOX40L组OX40L和OX40的mRNA表达显著减少,且该组血管平滑肌细胞增殖明显增强。结论 OX40/OX40L系统可能参与了VSMCs的增殖。
- 杨晓玲曹成建杨安宁马胜超王磊王艳华徐华姜怡邓
- 关键词：OX40LOX40血管平滑肌细胞
- 组蛋白去乙酰化酶2在衰老心肌细胞自噬水平降低中的作用被引量：1
- 2020年
- 目的探讨组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)在D-半乳糖(D-galactose)诱导的衰老心肌细胞自噬水平降低中的作用。方法使用D-galactose刺激大鼠心肌细胞H9c2衰老后,β-半乳糖苷酶染色验证模型是否成功;透射电镜观察未给予D-galactose对照(control)组与给予D-galactose组的自噬情况;Western Blot检测LC3B及p62的蛋白表达;分别采用qRT-PCR与Western Blot检测control组与D-galactose组HDAC2的mRNA与蛋白表达;同时,D-galactose组干扰HDAC2的表达后,Western Blot检测HDAC2的自身表达及LC3B与p62的蛋白表达,免疫荧光染色观察LC3B的定位及表达;最后,Western Blot检测control组与D-galactose组H3K14ac的蛋白表达;D-galactose组干扰HDAC2的表达后,Western Blot检测H3K14ac的蛋白表达。结果成功复制了衰老心肌细胞模型;经过D-galactose干预后,细胞内的自噬结构较未干预组明显减少;Western Blot结果显示,LC3BⅡ/Ⅰ水平降低,p62表达升高;qRT-PCR与Western Blot结果均证实D-galactose组与control组相比HDAC2的mRNA和蛋白水平明显降低;干扰HDAC2的表达后,Western Blot结果显示干扰HDAC2后的D-galactose组(Ad-shHDAC2)与未干扰HDAC2的D-galactose组(AdshNC)相比,LC3BⅡ/Ⅰ水平降低,p62表达升高,免疫荧光染色结果显示Ad-shHDAC2与Ad-shNC相比LC3B荧光强度要低;Western Blot结果显示,D-galactose组H3K14ac水平与control组相比明显升高;干扰HDAC2的表达后,Western Blot结果显示Ad-shHDAC2组与Ad-shNC组相比,H3K14ac表达进一步增加。结论 D-galactose能够诱导衰老心肌细胞自噬水平降低,且HDAC2的表达降低介导H3K14高乙酰化水平可能是衰老心肌细胞自噬水平降低的重要机制之一。
- 王睿王艳华柴丽芬吴琪瑞吴凯吴凯杨勇杨晓玲姜怡邓
- 关键词：心肌细胞衰老自噬
- ASPP2调控GRP78在L-NAME诱导胎盘滋养细胞凋亡中的作用被引量：4
- 2019年
- 目的探讨p53凋亡刺激蛋白2(apoptosis stimulating protein 2 of p53,ASPP2)调控葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)在N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-nitroarginine methyl ester,L-NAME)诱导胎盘滋养细胞凋亡中的作用,为临床研究妊娠期高血压疾病提供理论依据。方法体外培养HTR-8/SVneo人胎盘滋养细胞,分为对照组(0μmol·L^(-1)L-NAME)和L-NAME组(100μmol·L^(-1)LNAME),干预48 h后,分别采用Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术和吖啶橙/溴化乙锭染色,检测胎盘滋养细胞凋亡水平的变化;运用Western blot检测caspase-12、GRP78和ASPP2的蛋白变化; ASPP2干扰腺病毒感染人胎盘滋养细胞后,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ASPP2的mRNA表达水平,Western blot检测GRP78的蛋白表达水平;给予100μmol·L^(-1) L-NAME干预48 h后,Western blot和免疫荧光分别检测caspase-12和GRP78的蛋白表达。结果与对照组相比,L-NAME组胎盘滋养细胞凋亡水平明显增加(P <0. 05);吖啶橙染色显示,与对照组相比,L-NAME组细胞多数呈现鲜亮的橙色,晚期凋亡细胞数明显增加;同时caspase-12、GRP78和ASPP2蛋白的表达明显增加(P <0. 05,P <0. 01);干扰ASPP2后,caspase-12和GRP78蛋白表达明显降低(P <0. 05)。结论下调ASPP2可降低GRP78的表达,进而抑制L-NAME诱导的胎盘滋养细胞凋亡。
- 谢琳张辉丁宁王艳华吴凯吴凯王青青刘昆张慧萍张慧萍
- 关键词：葡萄糖调节蛋白78N-硝基-L-精氨酸甲酯胎盘滋养细胞细胞凋亡
- 高同型半胱氨酸血症通过内质网应激抑制ApoE敲除鼠肾脏CFTR的表达被引量：1
- 2015年
- 目的探讨高同型半胱氨酸血症通过内质网应激抑制载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)鼠肾脏囊性纤维化跨膜转导调节因子(CFTR)的表达。方法实验分组:正常对照组(n=6):选择健康5周龄雄鼠(SPF级C57BL/6J),饲以正常饮食。另选5周龄雄性纯合子Apo E-/-鼠(SPF级近交系c57BL/6)18只,随机分为3组,每组6只:Apo E-/-对照组、高蛋氨酸组、干预组,分别给予正常饮食、高蛋氨酸饮食、高蛋氨酸饮食加0.006%叶酸及0.0004%维生素B12。喂养14周后眼球取血,分离血清,用酶联免疫吸附法检测血清同型半胱氨酸水平;实时定量荧光PCR检测小鼠肾脏CFTR、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、活化转录因子6(ATF6)、蛋白激酶样内质网激酶(PERK)、C/EPB同源蛋白(CHOP)mRNA的表达以及免疫组织化学法检测小鼠肾脏CFTR蛋白的表达。结果Apo E-/-对照组、高蛋氨酸组及干预组中血清同型半胱氨酸水平均增加,其中以高蛋氨酸组增加最显著(P<0.01)。实时定量荧光PCR结果显示,高蛋氨酸组CFTR mRNA的表达较正常对照组和Apo E-/-对照组显著降低(P<0.01,P<0.05),干预组CFTR mRNA的表达较高蛋氨酸组显著增加(P<0.01);免疫组织化学法检测CFTR蛋白的表达与其mRNA的表达变化一致。高蛋氨酸组GRP78、ATF6、PERK、CHOP mRNA的表达较正常对照组和Apo E-/-对照组显著增加(P<0.01),干预组GRP78、ATF6、PERK、CHOP mRNA的表达较高蛋氨酸组显著降低(P<0.01)。小鼠肾脏GRP78、ATF6、PERK、CHOP mRNA表达与CFTR mRNA表达的相关系数分别为:r=-0.7192,P<0.01;r=-0.5501,P<0.01;r=-0.7772,P<0.01;r=-0.6785,P<0.01。结论高同型半胱氨酸血症可能通过内质网应激抑制Apo E敲除鼠肾脏CFTR的表达。
- 马文斌张辉赵丽周龙霞陈久凯王艳华杨晓玲田珏张鸣号徐华姜怡邓
- 关键词：高同型半胱氨酸血症内质网应激
- circRNA RBM39与miR-5088-5p在缺氧诱导的滋养细胞自噬中的作用被引量：8
- 2020年
- 目的探讨circRNA RBM39与miR-5088-5p在缺氧诱导的胎盘滋养细胞自噬中的作用。方法体外培养人胎盘滋养细胞株(HTR8-S/Vneo),分为正常组和缺氧组。采用Western blot检测各组细胞自噬标志蛋白LC3B和p62的表达水平;运用qRT-PCR检测circRNA RBM39的表达水平;同时,检测circRNA RBM39在HTR8-S/Vneo细胞胞浆/胞核中的表达水平,分析其表达位置;通过TargetScan生物信息学分析circRNA RBM39可竞争结合的miRNAs;而后qRT-PCR检测miR-5088-5p的表达;分别将circRNA RBM39和miR-5088-5p的表达水平与LC3B和p62的表达水平进行相关性分析。结果与正常组相比,缺氧组LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表达增加(P<0.001),而p62蛋白表达降低(P<0.001);另外,circRNA RBM39在缺氧组中表达上调(P<0.05),并且主要在胞浆中分布;生物信息学发现circRNA RBM39可竞争性结合miR-5088-5p,而且miR-5088-5p在缺氧组中表达下调(P<0.05);最后,通过相关性分析发现circRNA RBM39与自噬水平呈正相关(P<0.01),miR-5088-5p与自噬水平呈负相关(P<0.01)。结论circRNA RBM39及miR-5088-5p与滋养细胞自噬密切相关,而circRNA RBM39可能通过竞争性结合miR-5088-5p在调节缺氧诱导的滋养细胞自噬中发挥重要作用。
- 吴琪瑞王艳华柴丽芬张辉李淑霞刘林英石青吴凯张慧萍
- 关键词：缺氧滋养细胞自噬MIRNAS
- G9a在L-NAME诱导胎盘滋养细胞自噬中的作用被引量：1
- 2020年
- 目的探讨组蛋白甲基转移酶G9a在胎盘滋养细胞自噬中的作用。方法体外培养人胎盘滋养细胞,加入100μmol/L N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)干预48 h后,Western blot检测自噬相关蛋白LC3II/I,p62以及G9a的蛋白表达,感染自噬流双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3双标腺病毒)观察自噬流的改变,了解L-NAME对滋养细胞自噬的影响及G9a的表达改变;在细胞中转染G9a过表达腺病毒及干扰质粒,Western blot和qRT-PCR对G9a自身表达进行验证,同时给予100μmol/L L-NAME后,Western blot检测自噬相关蛋白LC3II/I和p62的蛋白表达,阐明G9a在L-NAME介导的滋养细胞自噬中的作用。结果与对照组比较,L-NAME组LC3II/I增加1.4倍,p62表达降低40%,G9a表达降低38%,差异均有统计学意义(P<0.05);且观察到滋养细胞内自噬体及自噬溶酶体均增多,自噬增强。过表达G9a后自噬相关蛋白LC3II/I表达降低降22%,p62表达升高2.12倍,差异有统计学意义(P<0.05);干扰G9a后,p62表达降低62%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论G9a可抑制L-NAME诱导的胎盘滋养细胞自噬的发生。
- 高源张辉谢琳谢琳马晓莉王艳华杨晓玲丁宁丁宁
- 关键词：自噬滋养细胞
