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林海环
作品数:
2
被引量:1
H指数:1
供职机构:
温州医学院药学院
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发文基金:
浙江省自然科学基金
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
李校堃
温州医学院药学院
杨静
温州医学院药学院
王怡
温州医学院药学院
姜丽娟
温州医学院药学院
肖健
温州医学院药学院
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中国药理学与...
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1篇
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新穿膜融合蛋白His-T1-绿色荧光蛋白的跨膜效率及其对细胞存活的影响
被引量:1
2008年
目的研究穿膜融合蛋白His-T1-绿色荧光蛋白(GFP)的跨膜效率及其对细胞存活的影响。方法以浓度为500mg·L^-1的His-T1-GFP与人鼻咽癌CNE2或大鼠肾小管上皮NRK52E细胞孵育6h,应用荧光显微镜观察His-T1-GFP跨膜进入细胞的情况。应用多功能酶标仪检测细胞荧光强度,研究His-T1-GFP跨膜的动力学因素:以浓度为500mg·L-1的His-T1-GFP与CNE2或NRK52E细胞孵育10min至24h,观察孵育时间对穿膜作用的影响;以浓度为25mg·L^-1至1.0g·L^-1的His-T1-GFP与两种细胞孵育6h,观察蛋白浓度对跨膜效率的影响;以浓度为500mg·L^-1的His-T1-GFP与两种细胞分别在4℃和37℃的条件下孵育6h,观察温度对蛋白跨膜效率的影响。用细胞乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒和MTr法来评价5.0g·L^-1浓度的His-T1-GFP对细胞存活的影响。结果在一定浓度范围内,His-T1-GFP能够有效穿透CNE2和NRK52E细胞膜,且对NRK52E细胞的跨膜效率明显高于His-TAT-GFP。His-T1-GFP在10min内就能有效跨膜进入细胞,并且在6h内进入细胞的量与时间成正相关。在一定浓度范围(25mg·L^-1-1.0g·L^-1)内,该蛋白进入细胞的量与自身浓度成正相关,而在4℃时该蛋白仍具有跨膜能力。当其终浓度高达5.0g·L^-1时,对CNE2和NRK52E两种细胞几乎无毒性作用。结论His-T1-GFP蛋白是一种跨膜效率高且低毒的穿膜融合蛋白。
王怡
林海环
杨静
姜丽娟
李校堃
关键词:
穿膜肽
融合蛋白
细胞膜通透性
细胞毒性
新穿膜肽蛋白His-T1-GFP的跨膜效率和细胞毒性研究
目的研究新穿膜肽蛋白 His-T1-GFP 对不同细胞的跨膜效率和细胞毒性.方法用荧光显微镜来观察 His-T1-CFP 和 His-Tat-GFP 跨膜进入不同细胞的情况;使用酶标仪检测细胞荧光强度,研究其跨膜的动力学...
王怡
肖健
林海环
杨静
李校堃
关键词:
穿膜肽
细胞毒性
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