王怡
- 作品数：6 被引量：20H指数：3
- 供职机构：温州医学院药学院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金吉林省科技发展计划基金高等学校科技创新工程重大项目更多>>
- 相关领域：生物学文化科学医药卫生更多>>
- 一种新穿膜肽的构建、表达及其活性检测被引量：10
- 2007年
- 通过对穿膜肽TAT-PTD构效关系的分析和结构改造,构建能有效进入血脑屏障且低毒的新穿膜肽。该研究用分子克隆技术构建出表达型载体pET28a-T1-GFP,重组质粒在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中表达融合蛋白His-T1-GFP,经组氨酸亲和层析纯化后,用荧光显微镜和免疫组化的方法来检测His-T1-GFP在活体动物小白鼠体内的跨膜递送作用。经测序证实成功构建了表达型载体pET28a-T1-GFP,融合蛋白His-T1-GFP在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中表达率为20%。经组氨酸亲和纯化,得到纯度达85%的融合蛋白。SDS-PAGE和Western Blotting显示纯化蛋白为His-T1-GFP,动物实验表明融合蛋白His-T1-GFP能够有效跨过血脑屏障,主要分布在大脑皮层和海马回。该研究成功地构建了一种新的穿膜肽-T1,为其携带有生物活性的大分子物质到达脑部进行蛋白治疗奠定了基础。
- 王怡蔡绍晖姜丽娟李校堃
- 关键词：穿膜肽绿色荧光蛋白血脑屏障
- 产学研循环互动创新人才培养模式的研究与实践——以温州医学院药学教育为例被引量：3
- 2013年
- 产学研结合教育是高等教育改革与发展的方向,是提升学生创新能力和实践能力的重要途径,是推动我国经济建设和可持续发展的战略性举措。我们前期积极吸收国内外先进教学经验,充分发挥温州医学院现有条件,初步建立了一套产学研循环互动的教学模式,即以教学实验区为载体、产学研循环互动的教学体系,尝试将产学研相结合的思想贯彻到药学人才培养的全过程,探讨了产学研合作教育对药学人才创新能力培养的有效性。
- 王怡梁广叶发青李校堃
- 新穿膜肽蛋白His-T1-GFP的跨膜效率和细胞毒性研究
- 目的研究新穿膜肽蛋白 His-T1-GFP 对不同细胞的跨膜效率和细胞毒性．方法用荧光显微镜来观察 His-T1-CFP 和 His-Tat-GFP 跨膜进入不同细胞的情况;使用酶标仪检测细胞荧光强度,研究其跨膜的动力学...
- 王怡肖健林海环杨静李校堃
- 关键词：穿膜肽细胞毒性
- 文献传递
- 新穿膜融合蛋白His-T1-绿色荧光蛋白的跨膜效率及其对细胞存活的影响被引量：1
- 2008年
- 目的研究穿膜融合蛋白His-T1-绿色荧光蛋白（GFP）的跨膜效率及其对细胞存活的影响。方法以浓度为500mg·L^-1的His-T1-GFP与人鼻咽癌CNE2或大鼠肾小管上皮NRK52E细胞孵育6h，应用荧光显微镜观察His-T1-GFP跨膜进入细胞的情况。应用多功能酶标仪检测细胞荧光强度，研究His-T1-GFP跨膜的动力学因素：以浓度为500mg·L-1的His-T1-GFP与CNE2或NRK52E细胞孵育10min至24h，观察孵育时间对穿膜作用的影响；以浓度为25mg·L^-1至1．0g·L^-1的His-T1-GFP与两种细胞孵育6h，观察蛋白浓度对跨膜效率的影响；以浓度为500mg·L^-1的His-T1-GFP与两种细胞分别在4℃和37℃的条件下孵育6h，观察温度对蛋白跨膜效率的影响。用细胞乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒和MTr法来评价5．0g·L^-1浓度的His-T1-GFP对细胞存活的影响。结果在一定浓度范围内，His-T1-GFP能够有效穿透CNE2和NRK52E细胞膜，且对NRK52E细胞的跨膜效率明显高于His-TAT-GFP。His-T1-GFP在10min内就能有效跨膜进入细胞，并且在6h内进入细胞的量与时间成正相关。在一定浓度范围（25mg·L^-1-1．0g·L^-1）内，该蛋白进入细胞的量与自身浓度成正相关，而在4℃时该蛋白仍具有跨膜能力。当其终浓度高达5．0g·L^-1时，对CNE2和NRK52E两种细胞几乎无毒性作用。结论His-T1-GFP蛋白是一种跨膜效率高且低毒的穿膜融合蛋白。
- 王怡林海环杨静姜丽娟李校堃
- 关键词：穿膜肽融合蛋白细胞膜通透性细胞毒性
- 重组人酸性成纤维细胞生长因子-穿膜肽融合蛋白的克隆表达、纯化及活性检测被引量：1
- 2010年
- 目的:高效表达并纯化具有生物学活性的重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)-穿膜肽(tat)融合蛋白,为进一步开发基因工程药物提供实验依据。方法:通过双酶切方法,从质粒pMD18-T-aFGF-tat中获得aFGF-tat基因片段,并将aFGF-tat融合基因与原核表达载体pET3c连接后转化到大肠杆菌BL21(DE3)宿主细胞中,通过IPTG诱导获得可溶性表达,将融合蛋白经CM离子交换层析与肝素亲和层析纯化,MTT法检测aFGF-tat融合蛋白对NIH3T3细胞的促增殖作用。结果:经酶切和基因测序证实获得的重组人aFGF-tat基因序列与GenBank报道的完全一致,构建的pET3c-aFGF-tat表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达aFGF-tat融合蛋白,蛋白表达量在15%以上,经SDS-PAGE证实其相对分子质量与理论预期值相符,经CM离子交换层析与肝素亲和层析纯化后蛋白纯度高于95%,Western blotting分析表达产物与人aFGF多克隆抗体具有特异结合能力,并能够促进NIH3T3细胞增殖。结论:成功表达重组人aFGF-tat融合蛋白工程菌,获得aFGF-tat纯蛋白,并证实aFGF-tat融合蛋白具有促细胞增殖活性。
- 张睿王晓杰王怡田海山焦悦高丽昌李婷婷李校堃
- 关键词：酸性成纤维细胞生长因子穿膜肽纯化活性检测
