杜永坤
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 供职机构：西北农林科技大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- PRRSV GP5蛋白内影像单克隆抗独特型抗体Mab2-5G2对其免疫调控
- 本实验的目的是以Balb/c小鼠为模型，探究Mab2-SG2对PRRSV GPS蛋白的免疫反应的调控作用，以期为研究PRRSV感染引起的免疫机理提供参考。研究表明，PRRSV GP5内影像单克隆抗独特型抗体Mab2-5G...
- 杜永坤穆杨薛碧云张茂东姬鹏超马超周恩民
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒结构蛋白免疫调控
- 文献传递
- 猪MSTN基因双筛选标记打靶载体的构建及其功能鉴定被引量：4
- 2012年
- 【目的】利用正负筛选策略,构建猪肌肉生长抑素(Myostatin,MSTN)基因的双筛选标记打靶载体。【方法】以猪胎儿成纤维细胞DNA为模板,PCR扩增MSTN基因同源长、短臂;采用PCR和Overlap PCR扩增打靶载体正筛选标记嘌呤霉素和绿色荧光蛋白基因及负筛选标记单纯疱疹病毒胸苷激酶基因。以pUC57载体为骨架载体,在其多克隆位点连接一段包括Frt序列在内的酶切位点的多克隆位点序列,在2个Frt序列之间连接正筛选标记嘌呤霉素基因和绿色荧光蛋白基因,在Frt序列两侧分别连接5.7和1.9kb的MSTN基因同源长、短臂;在同源短臂后连接负筛选标记单纯疱疹病毒胸苷激酶基因,将目的片段与载体定向连接克隆。用脂质体法将打靶载体转染猪肾细胞(PK15细胞),用嘌呤霉素和丙氧鸟苷进行正负筛选,验证正负筛选标记基因的功能。【结果】成功克隆了猪MSTN基因同源长、短臂及正筛选嘌呤霉素和绿色荧光蛋白基因及负筛选单纯疱疹病毒胸苷激酶基因,构建了猪MSTN基因双筛选标记打靶载体,打靶载体长14kb。在打靶载体转染的PK15细胞中,正负筛选标记基因均有生物学活性。【结论】成功构建了猪MSTN基因双筛选标记打靶载体。
- 王向鹏肖一红刘园园杜永坤马玉萍周恩民
- 关键词：同源重组基因打靶
