马玉萍
- 作品数：7 被引量：8H指数：2
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- 相关领域：农业科学生物学哲学宗教文化科学更多>>
- 猪CD163重组蛋白及其抗体的制备和功能鉴定
- 猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS)是由属于套式病毒目动脉炎病毒科属的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive...
- 马玉萍
- 关键词：PRRSV免疫血清单克隆抗体阻断作用
- 文献传递
- PRRSV GP5蛋白新型细胞受体:Ⅱ型非肌肉肌球蛋白A亚型重链
- 目的 前期我们利用鼠抗PRRSV GP5蛋白抗体免疫小鼠制备的单克隆抗独特型抗体(Mab2-5G2)能够与Marc-145及猪肺泡巨噬细胞(PAM)结合,并且通过免疫沉淀得到一个分子量约为230kDa的可溶性蛋白.经过氨...
- 高继明肖一红王向鹏孔宁穆阳王承宝肖书奇赵钦马玉萍刘宁宁吕军华Julian A.HISCOX周恩民
- 非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A羧基端蛋白的真核表达及在猪繁殖与呼吸综合征病毒感染Marc-145细胞中的作用被引量：2
- 2012年
- 前期研究结果证明抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白的抗独特型抗体特异性结合Marc-145细胞上的非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A(Nonmuscle myosin heavy chainⅡ-A,NMHCⅡ-A)蛋白,其结合位点位于NMHCⅡ-A的羧基端。本研究通过真核表达NMHCⅡ-A的羧基端(PRA)蛋白,验证其对PRRSV感染Marc-145细胞的作用。通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达PRA蛋白。Western blot和间接免疫荧光鉴定PRA蛋白的表达及其与Marc-145细胞的结合。通过病毒中和试验、荧光聚焦中和试验和荧光定量PCR检测PRA蛋白对PRRSV感染Marc-145细胞的作用。Western blot和间接免疫荧光结果表明,PRA蛋白在真核细胞中得到成功表达,其最高表达量为接种1个MOI杆状病毒后96h时。PRA蛋白特异性结合Marc-145细胞,使PRRSV感染Marc-145细胞延迟24h并且感染效率降低60%。真核表达的NMHCⅡ-A羧基端蛋白能特异性结合Marc-145细胞并有效降低PRRSV的感染。这些结果为进一步阐明NMHCⅡ-A在PRRSV感染细胞过程中的作用提供了新的依据。
- 吕军华刘宁宁赵钦马玉萍张冲王向鹏胡守彬赵菲菲吴海珍肖一红周恩民
- 关键词：杆状病毒
- 职业院校学生心理健康状况研究——以西部5所职业院校为例
- 近年来，随着我国经济的快速发展、综合国力的提升和经济结构的调整，对技能型人才的剐需，导致高等职业教育快速的发展。职业院校学生是高等教育中一个比较特殊群体，他们正处于青少年时期，年龄大概在17岁至23岁之间，心理和生理都尚...
- 马玉萍
- 关键词：职业院校学生心理健康高等职业教育
- 文献传递
- PRRSV细胞受体CD163 SRCR5-SRCR6多克隆抗体的制备被引量：2
- 2014年
- 【目的】制备鼠抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）细胞受体CD163 SRCR5-SRCR6多克隆抗体。【方法】提取PAM细胞总RNA，通过RT-PCR方法获得CD163 SRCR5-SRCR6（第1 417～2 136 bp，共720个bp）基因，将其克隆到pET-28a（＋）载体上，构建重组表达载体pET-28a（＋）-CD163，经酶切、PCR鉴定和测序验证后转化大肠杆菌，在BL21（DE3）中诱导重组目的蛋白表达，然后用Ni-NTA方法纯化目的蛋白，免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体，通过间接ELISA和IFA方法检测多克隆抗体效价，并初步鉴定多克隆抗体血清结合细胞及阻断PRRSV感染细胞的活性。【结果】克隆了720 bp的CD163 SRCR5-SRCR6基因，成功构建了pET-28a（＋）-CD163重组表达载体；SDS-PAGE结果表明，CD163 SRCR5-SRCR6重组蛋白被成功诱导并以包涵体形式表达；Western blot结果表明，重组蛋白具有良好的免疫原性，间接ELISA方法测得免疫Balb/c小鼠制备的抗CD163 SRCR5-SRCR6重组蛋白的多克隆抗体效价可达105；IFA试验结果显示，制备的抗CD163 SRCR5-SRCR6重组蛋白的多克隆抗体可与Marc-145细胞结合，且在1∶20、1∶40倍稀释时，能部分阻断高致病性PRRSV SD16毒株感染Marc145细胞。【结论】用大肠杆菌原核表达系统成功诱导表达了CD163 SRCR5-SRCR 6重组蛋白，用重组蛋白免疫小鼠获得了高效价多克隆抗体，其可以结合细胞并阻断PRRSV感染细胞。
- 马玉萍孔宁王向鹏高继明赵钦王承宝周恩民
- 关键词：PRRSV多克隆抗体
- PRRSV细胞受体CD163的真核表达及鉴定
- 为了进一步研究PRRSV与细胞受体之间的相互作用机理,本研究通过RT-PCR方法从PAM细胞中获得了CD163全长基因,成功构建pFastBac HTB真核表达载体,阳性质粒转化DH10Bac感受态得到重组杆粒,经PCR...
- 马玉萍王向鹏赵钦王承宝周恩民
- 关键词：PRRSVSF9细胞真核表达
- 文献传递
- 猪MSTN基因双筛选标记打靶载体的构建及其功能鉴定被引量：3
- 2012年
- 【目的】利用正负筛选策略,构建猪肌肉生长抑素(Myostatin,MSTN)基因的双筛选标记打靶载体。【方法】以猪胎儿成纤维细胞DNA为模板,PCR扩增MSTN基因同源长、短臂;采用PCR和Overlap PCR扩增打靶载体正筛选标记嘌呤霉素和绿色荧光蛋白基因及负筛选标记单纯疱疹病毒胸苷激酶基因。以pUC57载体为骨架载体,在其多克隆位点连接一段包括Frt序列在内的酶切位点的多克隆位点序列,在2个Frt序列之间连接正筛选标记嘌呤霉素基因和绿色荧光蛋白基因,在Frt序列两侧分别连接5.7和1.9kb的MSTN基因同源长、短臂;在同源短臂后连接负筛选标记单纯疱疹病毒胸苷激酶基因,将目的片段与载体定向连接克隆。用脂质体法将打靶载体转染猪肾细胞(PK15细胞),用嘌呤霉素和丙氧鸟苷进行正负筛选,验证正负筛选标记基因的功能。【结果】成功克隆了猪MSTN基因同源长、短臂及正筛选嘌呤霉素和绿色荧光蛋白基因及负筛选单纯疱疹病毒胸苷激酶基因,构建了猪MSTN基因双筛选标记打靶载体,打靶载体长14kb。在打靶载体转染的PK15细胞中,正负筛选标记基因均有生物学活性。【结论】成功构建了猪MSTN基因双筛选标记打靶载体。
- 王向鹏肖一红刘园园杜永坤马玉萍周恩民
- 关键词：同源重组基因打靶
