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重叠延伸PCR法合成EV71 VP1-LTB融合基因及其原核表达被引量：2: 2011年; 目的用重叠延伸PCR(overlap extension PCR)法获得人肠道病毒71型vp1与大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚单位(ltb)的融合基因,构建EV71 VP1-LTB融合表达质粒并在原核系统表达。方法设计14对引物通过重叠延伸PCR技术合成vp1基因,以ETEC(44815)质粒DNA为模板,PCR扩增ltb基因,将vp1基因与ltb基因连接并测序,连接产物插入原核表达质粒pBEX,构建重组质粒pBEX-VP1-LTB,转化E.coliB1221(DE3)进行表达,SDS-PAGE及W estern blotting分析其表达。电转法将重组质粒转入双歧杆菌。结果合成的vp1基因全长891 bp,测序结果与预期相符,重组表达质粒pBEX-VP1-LTB经PCR及双酶切鉴定,表明构建正确;目的蛋白在E.coliBL21(DE3)中获得了表达,Western bloting分析结果表明该蛋白具有与EV71 VP1抗体的反应原性;电转法成功将重组质粒转入双歧杆菌。结论应用重叠延伸PCR技术成功构建了EV71 VP1-LTB融合表达质粒,并在E.coliBL21(DE3)中获得有生物学功能的VP1表达产物,重组质粒双歧杆菌转化及VP1-LTB融合蛋白的表达研究,为研制EV71分子内佐剂疫苗打下了基础。; 李江马永平李世彬贺志良姜柯安; 关键词：重叠延伸PCR

糖尿病肾病进展的探讨: 目的:分析确诊为糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy，DN)并伴大量蛋白尿的84例住院患者的临床资料，探讨对该类患者进入透析时间有影响的因素。　　方法:分析于重庆医科大学附属第二医院肾内科住院确诊为糖尿病...; 李江; 关键词：糖尿病肾病透析时间肌酐水平血尿酸肾小球滤过率

人轮状病毒vp4全基因原核穿梭表达质粒的构建及鉴定被引量：8: 2011年; 目的构建人轮状病毒(Rotavirus,RV)vp4全基因原核穿梭表达质粒,经大肠杆菌表达验证后转化入双歧杆菌。方法从pMD19-T simple-vp4质粒中扩增RV vp4全基因,克隆至pBEX载体中,构建重组表达质粒pBEX-vp4,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,电转化法将重组质粒转化入双歧杆菌,提取质粒,进行PCR及双酶切鉴定。结果重组表达质粒pBEX-vp4经酶切、PCR和测序证明构建正确;在大肠杆菌BL21(DE3)中可表达相对分子质量约87 000的重组VP4蛋白,表达量较低,以包涵体形式表达,可与羊抗人轮状病毒多克隆抗体特异性结合;经PCR及双酶切鉴定,重组质粒pBEX-vp4已成功转入双歧杆菌中。结论重组表达质粒pBEX-vp4可在大肠杆菌中表达RV VP4蛋白,并可经电转化法有效地将重组表达质粒转化入双歧杆菌,为下一步在双歧杆菌中进行表达及研制基于双歧杆菌表达系统的RV重组亚单位口服活疫苗奠定了基础。; 李世彬李江贺志良姜柯安张璐渝刘革力马永平; 关键词：轮状病毒疫苗 VP4 双歧杆菌

产肠毒素大肠杆菌基因工程疫苗在SD大鼠中的免疫原性被引量：3: 2010年; 目的观察产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic E.coli,ETEC)基因工程疫苗在SD大鼠中的免疫原性。方法将含ETEC抗原成分热不稳定肠毒素B亚单位(Heat-labile enterotoxin Bsubunit,LTB)的双歧杆菌疫苗给SD大鼠灌胃4次,同时设对照组,以PBS平行灌胃。采用ELISA法检测大鼠粪便上清液IgA及血清IgG抗体水平;免疫组化法检测大鼠空肠中sIgA抗体的表达;肠绊试验检测肠毒素的活性。结果免疫疫苗的SD大鼠粪便上清液中产生了IgA抗体,血清中产生了特异性的IgG抗体,肠道内产生了特异性分泌型sIgA抗体;免疫组化结果显示,随着免疫次数的增加,抗体分泌量明显增加;双歧杆菌疫苗免疫的大鼠能够抵抗LT抗原的侵袭,而对照组大鼠则出现明显的肠道积液现象。结论构建的双歧杆菌疫苗具有良好的免疫效果,可保护SD大鼠免受ETEC的感染。; 王荣荣郝亚宁马永平李江李世彬; 关键词：产肠毒素大肠杆菌双歧杆菌基因工程疫苗免疫原性

双歧杆菌对SD大鼠空肠黏膜分泌型免疫球蛋白A的影响被引量：4: 2009年; 目的研究双歧杆菌的免疫佐剂效应。方法将SD大鼠随机分成3组,即卵清白蛋白(OVA)组,双歧杆菌+OVA组和PBS空白对照组。各组给予免疫后,收集长约3cm的空肠,通过免疫组织化学技术和Qwin图像处理系统,对空肠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)的定位进行系统分析,研究同时注射OVA和双歧杆菌后对SD大鼠在不同时期空肠中sIgA阳性细胞分泌的影响。结果在免疫后的SD大鼠的空肠内均产生了特异性的分泌型抗体sIgA,其中双歧杆菌+OVA组显著高于其他2组(P<0.05)。结论双歧杆菌经胃肠道黏膜免疫可诱导有效的免疫佐剂效应。; 郝亚宁王荣荣马永平李江李世斌刘革力; 关键词：双歧杆菌分泌型免疫球蛋白A 免疫佐剂

EV71病毒抗原蛋白VP1基因重组载体疫苗研究: 肠道病毒71型(EV71)是导致手足口病的主要病原体之一,常引起多种与神经系统相关的严重疾病。Vp1是EV71病毒主要的抗原基因,其编码的外衣壳蛋白在感染宿主细胞时起重要作用。因此,我们选择vp1作为研制EV71疫苗的目...; 李江; 关键词：病毒抗原蛋白 VP1基因表达质粒 WESTERN-BLOT

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李江