李世彬
- 作品数：5 被引量：14H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人轮状病毒vp4全基因原核穿梭表达质粒的构建及鉴定被引量：8
- 2011年
- 目的构建人轮状病毒(Rotavirus,RV)vp4全基因原核穿梭表达质粒,经大肠杆菌表达验证后转化入双歧杆菌。方法从pMD19-T simple-vp4质粒中扩增RV vp4全基因,克隆至pBEX载体中,构建重组表达质粒pBEX-vp4,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,电转化法将重组质粒转化入双歧杆菌,提取质粒,进行PCR及双酶切鉴定。结果重组表达质粒pBEX-vp4经酶切、PCR和测序证明构建正确;在大肠杆菌BL21(DE3)中可表达相对分子质量约87 000的重组VP4蛋白,表达量较低,以包涵体形式表达,可与羊抗人轮状病毒多克隆抗体特异性结合;经PCR及双酶切鉴定,重组质粒pBEX-vp4已成功转入双歧杆菌中。结论重组表达质粒pBEX-vp4可在大肠杆菌中表达RV VP4蛋白,并可经电转化法有效地将重组表达质粒转化入双歧杆菌,为下一步在双歧杆菌中进行表达及研制基于双歧杆菌表达系统的RV重组亚单位口服活疫苗奠定了基础。
- 李世彬李江贺志良姜柯安张璐渝刘革力马永平
- 关键词：轮状病毒疫苗VP4双歧杆菌
- 产肠毒素大肠杆菌基因工程疫苗在SD大鼠中的免疫原性被引量：3
- 2010年
- 目的观察产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic E.coli,ETEC)基因工程疫苗在SD大鼠中的免疫原性。方法将含ETEC抗原成分热不稳定肠毒素B亚单位(Heat-labile enterotoxin Bsubunit,LTB)的双歧杆菌疫苗给SD大鼠灌胃4次,同时设对照组,以PBS平行灌胃。采用ELISA法检测大鼠粪便上清液IgA及血清IgG抗体水平;免疫组化法检测大鼠空肠中sIgA抗体的表达;肠绊试验检测肠毒素的活性。结果免疫疫苗的SD大鼠粪便上清液中产生了IgA抗体,血清中产生了特异性的IgG抗体,肠道内产生了特异性分泌型sIgA抗体;免疫组化结果显示,随着免疫次数的增加,抗体分泌量明显增加;双歧杆菌疫苗免疫的大鼠能够抵抗LT抗原的侵袭,而对照组大鼠则出现明显的肠道积液现象。结论构建的双歧杆菌疫苗具有良好的免疫效果,可保护SD大鼠免受ETEC的感染。
- 王荣荣郝亚宁马永平李江李世彬
- 关键词：产肠毒素大肠杆菌双歧杆菌基因工程疫苗免疫原性
- 重叠延伸PCR法合成EV71 VP1-LTB融合基因及其原核表达被引量：2
- 2011年
- 目的用重叠延伸PCR(overlap extension PCR)法获得人肠道病毒71型vp1与大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚单位(ltb)的融合基因,构建EV71 VP1-LTB融合表达质粒并在原核系统表达。方法设计14对引物通过重叠延伸PCR技术合成vp1基因,以ETEC(44815)质粒DNA为模板,PCR扩增ltb基因,将vp1基因与ltb基因连接并测序,连接产物插入原核表达质粒pBEX,构建重组质粒pBEX-VP1-LTB,转化E.coliB1221(DE3)进行表达,SDS-PAGE及W estern blotting分析其表达。电转法将重组质粒转入双歧杆菌。结果合成的vp1基因全长891 bp,测序结果与预期相符,重组表达质粒pBEX-VP1-LTB经PCR及双酶切鉴定,表明构建正确;目的蛋白在E.coliBL21(DE3)中获得了表达,Western bloting分析结果表明该蛋白具有与EV71 VP1抗体的反应原性;电转法成功将重组质粒转入双歧杆菌。结论应用重叠延伸PCR技术成功构建了EV71 VP1-LTB融合表达质粒,并在E.coliBL21(DE3)中获得有生物学功能的VP1表达产物,重组质粒双歧杆菌转化及VP1-LTB融合蛋白的表达研究,为研制EV71分子内佐剂疫苗打下了基础。
- 李江马永平李世彬贺志良姜柯安
- 关键词：重叠延伸PCR
- 常见腹泻性消化道传染病口服疫苗的研究进展被引量：1
- 2011年
- 常见腹泻性消化道传染病通常由细菌、病毒等病原体引起,一般通过水源和食物经消化道传播,引起暴发性流行,尤其易引起婴幼儿发病和死亡。本文对常见细菌性和病毒性致腹泻消化道传染病口服疫苗的研究进展作一综述。
- 李世彬综述马永平审校
- 关键词：口服疫苗腹泻传染病
- 基于双歧杆菌表达系统的人轮状病毒口服重组活疫苗研究
- 轮状病毒是引起婴幼儿腹泻的首要病毒性病原体,全球每年超过一亿儿童感染该病毒并导致近百万例的死亡。Vp4是轮状病毒主要的抗原基因之一,其产物外衣壳蛋白在感染宿主细胞时起重要作用。因此,我们选择vp4作为研制相关疫苗的目标基...
- 李世彬
- 关键词：双歧杆菌人轮状病毒口服WESTERN-BLOTVP4VP4基因
