徐立秋
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 供职机构：沈阳农业大学畜牧兽医学院更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学理学更多>>
- 猪传染性胃肠炎病毒SYBR GreenⅠ模式实时定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用被引量：2
- 2009年
- 登录GenBank下载猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的N基因序列,依据保守区设计一对特异性引物,采用SYBR GreenⅠ随机结合渗入法,建立检测猪传染性胃肠炎病毒的实时定量RT-PCR检测方法,成功构建了检测TGEV的标准DNA模板,循环阈值(Ct)与标准DNA模板在1.0×10-1.0×107拷贝/μl浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.9985。该方法用于检测TGEV具有很高的特异性,其敏感性与常规PCR相比可以提高100倍,可以用于猪传染性胃肠炎病毒的快速检测。用建立的检测方法对82份临床样品进行了检测,和普通PCR检测结果100%相符。
- 贾赟孙颖杰袁文泽徐立秋李艳武张瑞简中友苏永生
- 关键词：SYBR猪传染性胃肠炎病毒实时定量PCR
- 犬瘟热病毒核衣壳蛋白N基因的真核表达及鉴定被引量：2
- 2008年
- 根据GenBank发表的犬瘟热病毒N基因全序列,设计合成了1对特异扩增CDVN基因的引物。以山东泰安分离的CDV-FOX-TA株细胞毒中提取病毒RNA来制模板,利用RT-PCR扩增出了1.6kb的N基因,将其克隆到pIREShyg载体上,构建了pIRES-N真核表达载体。然后通过磷酸钙共沉淀法转染CHO-K1细胞,通过潮霉素筛选得到阳性克隆,间接免疫荧光实验(IFA)鉴定N基因在CHO细胞中的表达,并用RT-PCR方法从转录水平证实N基因在CHO-K1细胞中的表达,最终建立了CHO/CDV-N细胞株,为犬瘟热病毒的血清学检测和基因疫苗的研制奠定了基础。
- 简中友贾赟王全凯徐立秋吴斌肇慧君李振荣
- 关键词：犬瘟热病毒N基因潮霉素CHO-K1细胞
- 实时荧光定量法检测新城疫疫苗株和野毒株前处理方法比较
- 2009年
- 从缓冲液处理、倍比稀释、反复冻融等几个方面来对检验样品进行前处理,以期寻找更优的前处理方法,为进出口鸡肉产品中新城疫病毒的检测提供可靠参考。采用pH7.2的磷酸盐缓冲溶液(PBS),加入双抗的PBS、0.9%生理盐水、Hank's液等不同的缓冲液对样品进行前处理,结果表明,pH7.2的PBS效果最好;对鸡拭子进行倍比稀释,结果表明,当稀释度达到1:128时,检测结果为阴性;反复冻融对检测结果影响不大。
- 高玉峰刘杰李宪臻李振荣徐立秋
- 关键词：新城疫病毒前处理
- 检测犬瘟热病毒抗体的重组N蛋白-ELISA方法的建立及应用被引量：4
- 2008年
- 将已构建成功的重组质粒pET-N转化入Rosetta2(DE3)菌株中,在IPTG诱导下获得重组N蛋白。用镍离子亲和层析方法对表达产物进行纯化,对纯化效果及纯化产物的特异性进行SDS-PAGE电泳及Western blot检测。以纯化的重组N蛋白作为包被抗原,对各种反应条件进行了优化,建立了检测CDV抗体的间接ELISA方法。用此方法检测了270份血清样品,并与法国Synbiotics公司ELISA试剂盒检测结果相比较,符合率达92.4%。为应用血清学方法对犬科动物进行犬瘟热流行病学的调查奠定了基础。
- 简中友贾赟王全凯徐立秋胡传伟李叶李振荣
- 关键词：重组质粒重组N蛋白间接ELISA
