简中友
- 作品数：23 被引量：137H指数：7
- 供职机构：辽宁出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家质检总局科技计划项目江苏省高校高新技术产业发展项目更多>>
- 相关领域：农业科学环境科学与工程经济管理更多>>
- 检测猪传染性胃肠炎病毒RT-PCR方法的建立被引量：7
- 2006年
- [目的]建立对猪传染性胃肠炎病毒的RT-PCR检测方法,为该病的诊断和流行病学调查提供可靠的和敏感的手段。[方法]根据Genbank收录的TGEV-Miller毒株S蛋白的基因序列,设计合成一对引物,在优化RT-PCR反应条件的基础上,建立了检测TGEV的RT-PCR方法。[结果]两条引物扩增目的片段长度为1262bp。经测序分析,与Miller毒株的同源性为99.1%。[结论]该RT-PCR方法灵敏,可靠,具有很强的临床检测意义,可用于TGEV的快速诊断和流行病学调查。
- 贾贇胡传伟简中友袁文泽
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒RT-PCR酶切鉴定猪轮状病毒猪流行性腹泻病毒
- 检测犬瘟热病毒抗体的重组N蛋白-ELISA方法的建立及应用被引量：4
- 2008年
- 将已构建成功的重组质粒pET-N转化入Rosetta2(DE3)菌株中,在IPTG诱导下获得重组N蛋白。用镍离子亲和层析方法对表达产物进行纯化,对纯化效果及纯化产物的特异性进行SDS-PAGE电泳及Western blot检测。以纯化的重组N蛋白作为包被抗原,对各种反应条件进行了优化,建立了检测CDV抗体的间接ELISA方法。用此方法检测了270份血清样品,并与法国Synbiotics公司ELISA试剂盒检测结果相比较,符合率达92.4%。为应用血清学方法对犬科动物进行犬瘟热流行病学的调查奠定了基础。
- 简中友贾赟王全凯徐立秋胡传伟李叶李振荣
- 关键词：重组质粒重组N蛋白间接ELISA
- 猪繁殖和呼吸综合征病毒分离与鉴定被引量：37
- 1997年
- 在对国内某地区７个患病猪群流行病学调查的基础上，用Ｍａｒｃ１４５细胞培养从４个猪群流产胎儿分离到３株导致细胞病变的病毒———Ｊ１、Ｊ２和Ｊ３株。它们对氯仿和热（５６℃，１ｈ）、甲醛、酸、碱均敏感。病毒粒子呈球状，直径３０～８０ｎｍ，负染后病毒粒子大小８０～１００ｎｍ，在Ｍａｒｃ１４５细胞质内增殖，５溴２′脱氧尿核苷（ＢＵＤＲ）对其无抑制作用。结合血清学试验，鉴定３个毒株均为猪繁殖和呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ），可能为美洲型ＰＲＲＳＶ。
- 姜平简中友马志永蔡家利蔡宝祥
- 关键词：猪病PRRS
- 猪繁殖和呼吸综合征（PRRS）血清流行病学调查初报被引量：11
- 1996年
- 用美国Ｈｅｒｄｃｈｅｋ猪繁殖和呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳ）ＥＬＩＳＡ抗体检测试剂盒对来自华北地区和华东地区８个ＰＲＲＳ可疑猪场共４７份血清进行检测。结果是：华北地区６个猪场，华东地区２个猪场ＰＲＲＳＶ抗体阳性检出率分别为５／６和０／２。８个猪场流产母猪、新生弱仔猪，有呼吸症状的育成猪及种公猪阳性检出率分别为１４／２０，５／１６，４／１０和１／１。表明ＰＲＲＳ在我国已经存在。
- 简中友马志永姜平张振兴蔡宝祥
- 关键词：PRRS抗体血清流行病学
- ELISA 检测猪繁殖呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体方法的建立及血清流行病学调查被引量：12
- 1997年
- 反复差速离心法提纯病毒，经ＴｒｉｔｏｎＸ－１００处理后作抗原，建立了检测血清中ＰＲＲＳＶ抗体的ＥＬＩＳＡ方法。该法不与猪瘟、伪狂犬病、乙脑、细小病毒及布氏杆菌等病阳性血清反应，与美国ＩＤＥＸＸＰＲＲＳＶ抗体检测试剂盒同时对１００份样品进行检测比较，二者符合率达９８％，说明具有很好的特异性和敏感性。
- 简中友姜平马志勇蔡家利蔡宝祥张振兴
- 关键词：繁殖酶联免疫吸附猪病流行病学
- 猪传染性胃肠炎病毒SYBR GreenⅠ模式实时定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用被引量：2
- 2009年
- 登录GenBank下载猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的N基因序列,依据保守区设计一对特异性引物,采用SYBR GreenⅠ随机结合渗入法,建立检测猪传染性胃肠炎病毒的实时定量RT-PCR检测方法,成功构建了检测TGEV的标准DNA模板,循环阈值(Ct)与标准DNA模板在1.0×10-1.0×107拷贝/μl浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.9985。该方法用于检测TGEV具有很高的特异性,其敏感性与常规PCR相比可以提高100倍,可以用于猪传染性胃肠炎病毒的快速检测。用建立的检测方法对82份临床样品进行了检测,和普通PCR检测结果100%相符。
- 贾赟孙颖杰袁文泽徐立秋李艳武张瑞简中友苏永生
- 关键词：SYBR猪传染性胃肠炎病毒实时定量PCR
- 犬瘟热病毒N蛋白体外表达与诊断技术应用研究
- 犬瘟热(Canine distemper CD)系由副粘病毒科麻疹病毒属的犬瘟热病毒引起犬科、鼬科等多种食肉动物的一种急性、热性、高度接触性的传染病，分布范围广，易感动物种类多，发病率和死亡率高。
自发现以来，...
- 简中友
- 关键词：犬瘟热N基因M基因
- 餐饮垃圾堆肥中蜡样芽孢杆菌的灭活规律
- 2012年
- 目的:通过建立处理含有蜡样芽孢杆菌食物垃圾的堆肥,考察堆肥发酵过程中致病芽孢杆菌的灭活情况,评价利用堆肥技术处理含致病芽孢杆菌餐饮垃圾的安全性和可行性。方法:运用牛粪和秸秆建造静态堆肥体系。检测堆制过程中堆体的温度、pH值、含水量;制作混有蜡样芽孢杆菌的食物垃圾样本,在不同堆制时间取样,检测该微生物数量。结果:建造堆体的第2天,温度已超过55℃,并能持续6天;堆体湿度维持在59%~69%,pH值范围在8.5~9.0。平板计数与验证实验显示,堆肥温度下与堆料混合的蜡样芽孢杆菌在第12天被灭活,并且在第40天温度下降后依然检测不到。堆肥中仅承受热压力组蜡样芽孢杆菌在第18日依然存在。结论:本研究结果说明所建立的处理含有蜡样芽孢杆菌的静态堆肥系统能够有效杀灭病原微生物,热压力及堆肥内微生物的及堆料性质共同起到灭活作用。
- 曹际娟王金玲简中友王爽金礼吉
- 关键词：餐饮垃圾堆肥蜡样芽孢杆菌
- 犬瘟热病毒核衣壳蛋白N基因的真核表达及鉴定被引量：2
- 2008年
- 根据GenBank发表的犬瘟热病毒N基因全序列,设计合成了1对特异扩增CDVN基因的引物。以山东泰安分离的CDV-FOX-TA株细胞毒中提取病毒RNA来制模板,利用RT-PCR扩增出了1.6kb的N基因,将其克隆到pIREShyg载体上,构建了pIRES-N真核表达载体。然后通过磷酸钙共沉淀法转染CHO-K1细胞,通过潮霉素筛选得到阳性克隆,间接免疫荧光实验(IFA)鉴定N基因在CHO细胞中的表达,并用RT-PCR方法从转录水平证实N基因在CHO-K1细胞中的表达,最终建立了CHO/CDV-N细胞株,为犬瘟热病毒的血清学检测和基因疫苗的研制奠定了基础。
- 简中友贾赟王全凯徐立秋吴斌肇慧君李振荣
- 关键词：犬瘟热病毒N基因潮霉素CHO-K1细胞
- 狐源犬瘟热病毒CDV-FOX-TA株核蛋白基因的原核表达及鉴定
- 2008年
- 应用RT-PCR技术扩增出犬瘟热病毒(CDV)核衣壳(N)蛋白基因抗原性好的高保守基因片段,将其TA克隆至pMD18-T载体中,再利用酶切、连接的方法将测序正确的N基因目的片段亚克隆到原核表达载体pET24b中6×HisTag编码基因的上游,并将该重组质粒转化大肠杆菌Rosetta2(DE3)株,经IPTG诱导,N基因融合蛋白获得了高效表达。SDS-PAGE分析和Western blot分析的结果显示,表达产物的分子质量为15kDa,与CDV标准阳性血清呈阳性反应,间接ELISA结果也表明重组表达产物具有良好的抗原性,能够有效区分CDV标准阳性与阴性血清,表明大肠杆菌表达的CDVN蛋白在免疫原性上具有与天然N蛋白同样的特性,可作为检测CDV的间接ELISA包被抗原。
- 简中友贾赟王全凯胡传伟肇慧君李叶
- 关键词：犬瘟热病毒核蛋白原核表达
