刘明杰
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
- 供职机构：南京师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：江苏高校优势学科建设工程项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 通过原位易错PCR一步构建基因突变文库被引量：3
- 2014年
- 主要介绍一种通过原位易错PCR构建随机突变文库的新技术。本实验室最近发表的一项国际专利中,利用来源于海栖热孢菌的极耐热性DNA连接酶,在传统PCR循环中加入一个连接步骤,即变性—退火—延伸—连接的四步循环法PCR,从而实现环状质粒的PCR指数扩增(PPCP)。原位易错PCR中所用引物为一段线性双链DNA,它含有与模板质粒不同的筛选标记,产物转化宿主菌后,模板质粒在筛选平板上被直接剔除。筛选到的阳性突变子可用作模板直接进入突变文库的再次构建,通过筛选获得二级或多级累加的正突变。利用这种方法构建了一个木聚糖酶基因和一个纤维素酶基因的随机突变文库,并筛选出具有正向突变的蛋白,证明以PPCP为基础的原位易错PCR技术,为基因定向进化提供了一种快速有效的随机突变文库构建的新方法。
- 王未未张永昌刘明杰邵蔚蓝
- 关键词：定向进化
- 极耐热性β-葡萄糖苷酶的高效表达及其在生产栀子蓝色素中的应用
- 天然栀子蓝色素的转化是在β-葡萄糖苷酶的作用下将栀子苷的糖苷键水解后再与氨基酸聚合而成,β-葡萄糖苷酶在转化过程中起着至关重要的作用。本实验使用一种新型热激载体pHsh克隆了来源于嗜热菌属的海栖热袍菌β一葡萄糖苷酶基因。...
- 刘明杰
- 关键词：栀子苷天然蓝色素色价
- 文献传递
- 极耐热性β-葡萄糖苷酶基因克隆、超量表达及其在天然蓝色素工业化生产中的应用被引量：2
- 2013年
- 从嗜热菌属的海栖热袍菌(Thermotoga maritima MSB8 ATCC43589)中扩增出编码极耐热性β-葡萄糖苷酶基因A,连接到新型热激载体pHsh上,得到重组质粒pHsh-bglA-WT和pHsh-bglA-M,并在大肠杆菌中实现了高水平可溶性表达,比酶活分别为25.7 U/mg和107.1 U/mg。通过热处理和DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析两步纯化方法处理后,经SDS-PAGE检测条带单一,比酶活达到1 746.2 U/mg,纯化倍数16.2,得率为17.5%。β-葡萄糖苷酶在以栀子苷和甘氨酸为原料的情况下,按照8.8∶1.4的比例,80℃条件下反应3 h,获得大量可食天然蓝色素,得到的天然蓝色素的色价E(1%)为426。
- 张慧邱日永刘明杰王未未邵蔚蓝
- 关键词：Β-葡萄糖苷酶可溶性表达栀子苷天然蓝色素色价
