王未未
- 作品数：5 被引量：14H指数：2
- 供职机构：南京师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏高校优势学科建设工程项目国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 海栖热袍菌电转化技术的研究
- 2011年
- [目的]对海栖热袍菌电转化技术进行研究。[方法]采用不同参数即不同的方型电脉冲参数、指数衰退型电脉冲参数和高电压电击参数对海栖热袍菌感受态细胞进行电转化,得到的转化子进行PCR验证。[结果]试验中发现以150 V的低压方形电脉冲,室温厌氧条件下电击25 ms、1次,有利于T.maritima MS8的转化,但这种以整合质粒进行的转化效率极低。[结论]为提高T.maritima MS8的基因转化效率奠定了基础。
- 彭静静蒋钰瑶周庆王未未邵蔚蓝
- 关键词：海栖热袍菌电转化
- 通过原位易错PCR一步构建基因突变文库被引量：3
- 2014年
- 主要介绍一种通过原位易错PCR构建随机突变文库的新技术。本实验室最近发表的一项国际专利中,利用来源于海栖热孢菌的极耐热性DNA连接酶,在传统PCR循环中加入一个连接步骤,即变性—退火—延伸—连接的四步循环法PCR,从而实现环状质粒的PCR指数扩增(PPCP)。原位易错PCR中所用引物为一段线性双链DNA,它含有与模板质粒不同的筛选标记,产物转化宿主菌后,模板质粒在筛选平板上被直接剔除。筛选到的阳性突变子可用作模板直接进入突变文库的再次构建,通过筛选获得二级或多级累加的正突变。利用这种方法构建了一个木聚糖酶基因和一个纤维素酶基因的随机突变文库,并筛选出具有正向突变的蛋白,证明以PPCP为基础的原位易错PCR技术,为基因定向进化提供了一种快速有效的随机突变文库构建的新方法。
- 王未未张永昌刘明杰邵蔚蓝
- 关键词：定向进化
- 新型大肠杆菌高效表达载体pHsh的构建与应用被引量：9
- 2012年
- 在现代生物学和生物技术研究中,通过基因的重组表达获得目标蛋白是一种应用最广泛的方法。因其培养简单、操作方便、遗传背景清楚、克隆表达系统成熟完善,大肠杆菌表达系统通常是人们表达重组蛋白的首选,而表达载体在重组蛋白的生产中起决定作用。pHsh及其衍生质粒是近年发展起来的新型大肠杆菌表达载体,其调控外源基因表达的原理不同于所有其他表达系统,并且具有表达水平高、成本低廉等特点。介绍大肠杆菌表达系统的组成和常用表达载体,并对由pHsh系列载体组成的Hsh表达体系的构建策略、表达调控机制及其使用方法进行综述。Hsh表达体系的建立和发展有望从一个不同的角度帮助解决基因的重组表达中常见的表达水平低、诱导剂成本高、包涵体形成等问题。
- 蒋钰瑶何嘉荣王未未梅艳珍
- 关键词：大肠杆菌
- 极耐热性阿魏酸酯酶的鉴定及其异源高效表达技术的研究
- 阿魏酸酯酶[E.C.3.1.1.73,Ferulic acid esterases, FAE （又称Feruloyl esterase）]作为一种羧酸酯水解酶,其广泛的应用价值逐渐被人们所关注。阿魏酸酯酶可以水解阿魏酸与...
- 王未未
- 关键词：海栖热袍菌重组菌
- 文献传递
- 极耐热性β-葡萄糖苷酶基因克隆、超量表达及其在天然蓝色素工业化生产中的应用被引量：2
- 2013年
- 从嗜热菌属的海栖热袍菌(Thermotoga maritima MSB8 ATCC43589)中扩增出编码极耐热性β-葡萄糖苷酶基因A,连接到新型热激载体pHsh上,得到重组质粒pHsh-bglA-WT和pHsh-bglA-M,并在大肠杆菌中实现了高水平可溶性表达,比酶活分别为25.7 U/mg和107.1 U/mg。通过热处理和DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析两步纯化方法处理后,经SDS-PAGE检测条带单一,比酶活达到1 746.2 U/mg,纯化倍数16.2,得率为17.5%。β-葡萄糖苷酶在以栀子苷和甘氨酸为原料的情况下,按照8.8∶1.4的比例,80℃条件下反应3 h,获得大量可食天然蓝色素,得到的天然蓝色素的色价E(1%)为426。
- 张慧邱日永刘明杰王未未邵蔚蓝
- 关键词：Β-葡萄糖苷酶可溶性表达栀子苷天然蓝色素色价
