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黄国锦: 作品数：11 被引量：20H指数：3; 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家杰出青年科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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嵌合蛋白sTNFRⅡ-IgG Fc纯化与生物学活性研究被引量：2: 2004年; 目的　建立嵌合蛋白sTNFR IgGFc的纯化工艺 ,并对该蛋白的理化和生物活性进行研究。方法　嵌合蛋白sTNFRⅡ IgGFc经变性、复性后 ,用金属螯合层析进行纯化 ,纯化的蛋白进行配基结合实验和拮抗TNF活性检测。结果　该嵌合蛋白的纯度大于 95 % ,在体外能够二聚化 ,保留了sTNFRⅡ对hTNFα的结合特性 ,同单体sTNFRⅡ相比 ,对hTNFα的拮抗活性明显提高。; 徐春晓姚立红黄国锦柴映爽陈爱珺张智清; 关键词：可溶性受体嵌合蛋白纯化工艺

应用酵母双杂交系统筛选与CIKS(151-574)相互作用的蛋白质: 2003年; CIKS(ConnectiontoIKKandSAPK JNK)是最近发现的细胞蛋白 ,能激活IKK和SAPK JNK。应用酵母双杂交系统 ,将CIKS(15 1 5 74)插入载体pAS2 1作为诱铒 ,筛选人HeLa细胞MATCHMAKERcDNA文库 ,以期为阐明NFκB及JNK活性调控的分子机理提供新的线索。筛选得到 6个阳性AD 文库质粒 ,并用酵母双杂交实验验证了阳性AD 文库质粒与CIKS的相互作用。将阳性AD 文库质粒测序并对测序结果做BLAST分析 ,发现它们分别是RIKENcDNA 473340F0 3,PLAC8,CD2 7BP (Siva 1) ,CDC5L ,SnRNPsmB ,DVL2。CIKS能与这些功能各异的蛋白质相互作用 ,表明CIKS在细胞的多种生理活动中发挥作用。; 黄国锦张智清姚立红陈爱珺徐春晓朱宏建柴映爽严馨蕊金冬雁; 关键词：CDNA文库蛋白质相互作用酵母双杂交系统细胞蛋白

重组人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ(sTNFRⅡ)的纯化被引量：1: 2002年; 目的从大肠杆菌破碎液中纯化可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ,获得能够中和TNF活性的受体蛋白。方法菌体破碎液经热沉淀处理后,用金属鳌合层析柱纯化重组蛋白。并对蛋白的理化特性和生物学活性进行分析。结果纯化的重组蛋白纯度大于95％,并且能中和TNF的生物学活性,抑制其对细胞的杀伤作用。结论该工艺能简便有效地纯化出TNF受体蛋白,为进一步深入研究奠定了基础。; 徐春晓姚立红祖东黄国锦严馨蕊柴映爽陈爱珺张智清; 关键词：重组人肿瘤坏死因子纯化大肠杆菌生物学活性

嵌合蛋白sTNFR II-IgG Fc的克隆、表达与活性分析被引量：3: 2002年; 肿瘤坏死因子是一种重要的炎性细胞因子 ,目前已知许多免疫疾病与之相关 ,为了抑制TNF的生物学活性 ,将可溶性TNFRII(sTNFRII)和人IgGFc分子通过柔性短肽相连 ,构建成一个嵌合蛋白 ,在大肠杆菌中进行表达 ,并获得了纯化蛋白。实验证明该嵌合蛋白能够自发形成聚合体 ,识别并结合TNF蛋白 ,同单体sTNFRII相比 ,对TNF的中和活性得到了较大的提高。; 徐春晓姚立红祖东陈爱珺黄国锦张智清; 关键词：可溶性肿瘤坏死因子受体嵌合蛋白克隆

小鼠uroplakinⅡ启动子在人细胞中的作用被引量：2: 2004年; 目的　研究小鼠UroplakinⅡ (UPⅡ )启动子在人细胞中的作用。方法　采用半定量RT PCR方法 ,检测人类膀胱移行细胞癌细胞系 (BIU 87)、肾癌细胞系 (GRC 1)、脐静脉血管内皮细胞系(EC)、肺癌细胞系 (A549)和皮肤成纤维细胞系 (Hs2 7)中UPⅡ基因mRNA的表达情况 ;同时构建pEGFP UPⅡ、pGL UPⅡ重组质粒 ,应用脂质体转染技术 ,将重组质粒转染入BIU 87、GRC 1、EC、A549和Hs2 7;利用共聚焦显微镜、流式细胞仪和微板检测仪观察细胞表达绿色荧光蛋白 (GFP)和荧光素酶(Luc)的情况。结果　UPⅡ基因mRNA在BIU 87中有较高的表达 ,而在其他组织细胞中表达极低。BIU 87表达GFP较多 (5～ 10 /HP) ,亮度较强 ,流式细胞仪测定表达量为 10 .1% ;而GRC 1、EC细胞表达GFP极少 (0～ 2 /HP) ,亮度暗 ,流式细胞仪测定表达量分别为 0 %和 1.8%。Luc在BIU 87中的表达量是其他组织细胞的 1.8～ 8.2倍 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论　UPⅡ特异性的表达在膀胱癌细胞中。; 朱宏建张智清曾祥福魏守顺徐春晓黄国锦郭应禄; 关键词：启动子人细胞 RT-PCR 肾癌细胞系膀胱肿瘤

IκB激酶研究进展被引量：2: 2003年; NF κB是一类具有重要生理功能的转录因子 ,能调节许多细胞基因的表达 ,在细胞的生理活动中具有重要作用。在静息细胞中 ,NF κB以无活性的形式存在于胞质中。受信号刺激后 ,NF κB被激活。IκB激酶在NF κB激活中起着重要作用。介绍了IκB激酶的组成。; 黄国锦张智清金冬雁; 关键词：IΚB激酶转录因子细胞基因表达信号传导

小鼠尿路斑块2启动子对人细胞特异性及表达调控研究被引量：2: 2003年; 目的　研究小鼠尿路斑块 2 (UPⅡ )启动子的缺失体在人细胞中启动活性。方法　应用脂质体转染技术 ,将含不同长度的小鼠UPⅡ启动子片段的重组质粒转染入人不同组织细胞系 ,利用共聚焦激光扫描显微镜、流式细胞仪和微板检测仪观察报告基因绿色荧光蛋白 (GFP)和荧光素酶 (Luc)的表达情况。结果　UPⅡ在膀胱癌细胞BIU 87表达GFP较非膀胱癌细胞多 ( 4 .3 4%对 0 )。UPⅡ 1、UPⅡ 2、UPⅡ 3在各组织细胞中表达GFP的数目较UPⅡ小 ,UPⅡ 4在各细胞中均无表达。UPⅡ在BIU 87表达Luc的量是其他组织细胞的 1.8～ 8.2倍。UPⅡ 1、UPⅡ 2、UPⅡ 3在各组织细胞中表达Luc的量均减少 ,UPⅡ 4在各组织细胞中几乎无表达。结论　小鼠UPⅡ启动子在人膀胱移行细胞中具有特异性启动活性 ,启动子上游 1.5× 10 3 区域是增强子序列 ,下游 14 3bp区域是核心启动子序列。; 朱宏建张智清曾祥福魏守顺徐春晓黄国锦郭应禄; 关键词：小鼠启动子基因表达膀胱肿瘤

HTLV-1 Tax蛋白与NF-κB活性调控蛋白相互作用的研究: 为了阐明IKKγ寡聚化的细节、了解Tax与IKKγ间的相互作用激活IKK和NF-κB活性的确切机制以及寻找其它参与NF-κB活性调控的蛋白,我们进行了如下研究:1)证实了IKKγ能发生二聚化和三聚化.2)发现IKKγ的C...; 黄国锦; 关键词：NF-ΚB IΚB激酶蛋白质-蛋白质相互作用; 文献传递

应用酵母双杂交系统筛选hTNFα特异性结合肽: 2005年; Tumor necrosis factor (TNF) is a key cytokine in immunology system and is well known to be related with many human diseases. In order to inhibit the activity of TNF, a screening protocol was set up and 5 specific hTNFα binding peptides were obtained from yeast two-hybrid random peptide library, which lay a solid foundation for the further large scale screening and application.; 徐春晓喻宏严馨蕊黄国锦姚立红陈爱王君张智清; 关键词：酵母双杂交系统结合肽

抑制肿瘤坏死因子-α的DNA适配子的筛选与鉴定被引量：6: 2003年; 应用SELEX技术筛选能与TNF结合的DNA适配子。化学合成随机寡聚DNA库 ,以TNF为靶蛋白 ,经过12轮SELEX筛选 ,将所得产物克隆、测序。根据所测序列化学合成寡聚DNA适配子 ,用生物素_亲和素_辣根过氧化物酶显色系统检测适配子与TNF的结合活性 ;用鼠L92 9细胞检测适配子拮抗TNF活性。结果显示 ,所筛选到的寡聚DNA能与TNF_α高亲和力结合 ,并能在细胞培养中拮抗TNF_α的细胞毒活性。; 郭克泰严馨蕊黄国锦徐春晓柴映爽张智清; 关键词：肿瘤坏死因子-Α

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