徐春晓
- 作品数：14 被引量：35H指数：3
- 供职机构：中国预防医学科学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 关于肿瘤坏死因子及γ干扰素体外协同抑制鼻窦癌裸鼠移植瘤的初步研究被引量：1
- 1992年
- 用肿瘤细胞集落测定法分析了基因工程肿瘤坏死因子(TNF)和γ干扰素(IFN-γ)对两株人鼻窦癌裸鼠移植瘤的抑制作用。TNF的抑癌效应呈剂量依赖性,肿瘤间的敏感性不同。TNF和IFN-γ具有协同抑癌效应。本实验为晚期头颈癌生物治疗进行了有益探索。
- 李五一张宝泉徐春晓王直中蔡有余吴淑华
- 关键词：肿瘤坏死因子干扰素鼻窦肿瘤裸鼠
- 应用酵母双杂交系统筛选与CIKS(151-574)相互作用的蛋白质
- 2003年
- CIKS(ConnectiontoIKKandSAPK JNK)是最近发现的细胞蛋白 ,能激活IKK和SAPK JNK。应用酵母双杂交系统 ,将CIKS(15 1 5 74)插入载体pAS2 1作为诱铒 ,筛选人HeLa细胞MATCHMAKERcDNA文库 ,以期为阐明NFκB及JNK活性调控的分子机理提供新的线索。筛选得到 6个阳性AD 文库质粒 ,并用酵母双杂交实验验证了阳性AD 文库质粒与CIKS的相互作用。将阳性AD 文库质粒测序并对测序结果做BLAST分析 ,发现它们分别是RIKENcDNA 473340F0 3,PLAC8,CD2 7BP (Siva 1) ,CDC5L ,SnRNPsmB ,DVL2。CIKS能与这些功能各异的蛋白质相互作用 ,表明CIKS在细胞的多种生理活动中发挥作用。
- 黄国锦张智清姚立红陈爱珺徐春晓朱宏建柴映爽严馨蕊金冬雁
- 关键词：CDNA文库蛋白质相互作用酵母双杂交系统细胞蛋白
- 重组人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ(sTNFRⅡ)的纯化被引量：1
- 2002年
- 目的 从大肠杆菌破碎液中纯化可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ,获得能够中和TNF活性的受体蛋白。方法 菌体破碎液经热沉淀处理后,用金属鳌合层析柱纯化重组蛋白。并对蛋白的理化特性和生物学活性进行分析。结果 纯化的重组蛋白纯度大于95％,并且能中和TNF的生物学活性,抑制其对细胞的杀伤作用。结论该工艺能简便有效地纯化出TNF受体蛋白,为进一步深入研究奠定了基础。
- 徐春晓姚立红祖东黄国锦严馨蕊柴映爽陈爱珺张智清
- 关键词：重组人肿瘤坏死因子纯化大肠杆菌生物学活性
- 小鼠uroplakinⅡ启动子在人细胞中的作用被引量：2
- 2004年
- 目的 研究小鼠UroplakinⅡ (UPⅡ )启动子在人细胞中的作用。方法 采用半定量RT PCR方法 ,检测人类膀胱移行细胞癌细胞系 (BIU 87)、肾癌细胞系 (GRC 1)、脐静脉血管内皮细胞系(EC)、肺癌细胞系 (A549)和皮肤成纤维细胞系 (Hs2 7)中UPⅡ基因mRNA的表达情况 ;同时构建pEGFP UPⅡ、pGL UPⅡ重组质粒 ,应用脂质体转染技术 ,将重组质粒转染入BIU 87、GRC 1、EC、A549和Hs2 7;利用共聚焦显微镜、流式细胞仪和微板检测仪观察细胞表达绿色荧光蛋白 (GFP)和荧光素酶(Luc)的情况。结果 UPⅡ基因mRNA在BIU 87中有较高的表达 ,而在其他组织细胞中表达极低。BIU 87表达GFP较多 (5～ 10 /HP) ,亮度较强 ,流式细胞仪测定表达量为 10 .1% ;而GRC 1、EC细胞表达GFP极少 (0～ 2 /HP) ,亮度暗 ,流式细胞仪测定表达量分别为 0 %和 1.8%。Luc在BIU 87中的表达量是其他组织细胞的 1.8～ 8.2倍 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论 UPⅡ特异性的表达在膀胱癌细胞中。
- 朱宏建张智清曾祥福魏守顺徐春晓黄国锦郭应禄
- 关键词：启动子人细胞RT-PCR肾癌细胞系膀胱肿瘤
- TNF受体(P55)胞外区和IgGFc嵌合蛋白高效原核表达载体的构建被引量：2
- 2002年
- 目的 构建TNF受体 (P5 5 )胞外区和IgGFc嵌合蛋白的高效原核表达载体。方法 以人心肌cDNA文库为模板 ,PCR扩增TNF受体 (P5 5 )胞外区全基因 (sTNFR ED) ,亚克隆入pGEM T/IgGFc中构建 pGEM T/sTNFR ED∶Ig GFc重组子 ,然后以其为模板 ,在上游引物中引入原核细胞高频密码子 ,再次PCR扩增去信号肽TNF受体 (P5 5 )胞外区和IgGFc嵌合基因 (TNFR ED∶IgGFc) ,亚克隆入 pUC19载体 ,经序列测定正确后克隆入原核表达载体 pBV2 2 0中。结果 成功构建了TNF受体 (P5 5 )胞外区和IgGFc嵌合蛋白高效原核表达载体 ,命名为 pBV2 2 0 /TNFR ED∶IgGFc。结论 pBV2 2 0 /TNFR ED∶IgGFc表达载体的构建 ,为进一步表达TNF受体 (P5 5 )胞外区和IgGFc嵌合蛋白及其在中和TNF毒副作用。
- 祖东徐春晓张智清谭锦泉
- 关键词：TNF受体嵌合蛋白
- 肿瘤坏死因子受体生物学功能及其临床应用研究进展被引量：19
- 2003年
- 肿瘤坏死因子 (Tumornecrosisfactor ,TNF)的生物学功能是由其受体 (TNFreceptor,TNFR)介导的 ,可溶性TNF受体 (SolubleTNFreceptor,sTNFR)从膜上脱落下来 ,不再负责信号传递 ,但能与TNF结合 ,中和TNF的生物学活性。sTNFR与IgGFc组成的嵌合蛋白能有效治疗成人类风湿性关节炎和儿童多发性关节炎 。
- 徐春晓
- 关键词：肿瘤坏死因子可溶性受体类风湿性关节炎慢性心衰
- 小鼠尿路斑块2启动子对人细胞特异性及表达调控研究被引量：2
- 2003年
- 目的 研究小鼠尿路斑块 2 (UPⅡ )启动子的缺失体在人细胞中启动活性。方法 应用脂质体转染技术 ,将含不同长度的小鼠UPⅡ启动子片段的重组质粒转染入人不同组织细胞系 ,利用共聚焦激光扫描显微镜、流式细胞仪和微板检测仪观察报告基因绿色荧光蛋白 (GFP)和荧光素酶 (Luc)的表达情况。结果 UPⅡ在膀胱癌细胞BIU 87表达GFP较非膀胱癌细胞多 ( 4 .3 4%对 0 )。UPⅡ 1、UPⅡ 2、UPⅡ 3在各组织细胞中表达GFP的数目较UPⅡ小 ,UPⅡ 4在各细胞中均无表达。UPⅡ在BIU 87表达Luc的量是其他组织细胞的 1.8～ 8.2倍。UPⅡ 1、UPⅡ 2、UPⅡ 3在各组织细胞中表达Luc的量均减少 ,UPⅡ 4在各组织细胞中几乎无表达。结论 小鼠UPⅡ启动子在人膀胱移行细胞中具有特异性启动活性 ,启动子上游 1.5× 10 3 区域是增强子序列 ,下游 14 3bp区域是核心启动子序列。
- 朱宏建张智清曾祥福魏守顺徐春晓黄国锦郭应禄
- 关键词：小鼠启动子基因表达膀胱肿瘤
- TNF受体(P55)和IgGFc的融合蛋白在哺乳动物细胞中的表达被引量：1
- 2001年
- 目的 在真核细胞表达具有生物活性的可溶性肿瘤坏死因子 (TNF)受体蛋白 ,用于中和TNF的毒性。方法 将TNFR(P5 5 )的胞外区基因和人IgGFc段基因通过 18个碱基的凝血酶切点连接 ,克隆入真核表达载体pcDNA3 1(+ ) ,在COS7和BHK细胞分别得到目的蛋白的表达。结果 在真核表达系统表达了TNFR(P5 5 )胞外区与人IgGFc段的融合蛋白 ,免疫学实验及L92 9细胞体外实验均表明该蛋白具有TNFR(P5 5 )特异的抗原性、与TNF结合的活性以及抑制TNF的活性。结论 真核表达的融合蛋白产物具有可溶性TNF受体 (P5 5 )的生物学活性。
- 安乃莉徐春晓姚立红陈爱君曾革非张立国张智清
- 关键词：肿瘤坏死因子真核表达系统
- TNF受体(P55)胞外区基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：2
- 2001年
- TNF与多种疾病密切相关。为了获得大量具有生物学活性的可溶性TNF受体用以拮抗TNF的毒性作用 ,在原核表达系统中表达了TNFR(P5 5 )的胞外区与TrxA的融合蛋白。将TNFR(P5 5 )胞外区去信号肽的前三个结构域基因克隆入融合蛋白表达载体 pET 32a ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中高效表达了TrxA TNFR融合蛋白。表达产物以包涵体形式存在 ,经过变性和复性 ,并经镍金属鳌和柱亲和层析纯化 ,得到了纯度较高的可溶性受体蛋白的初纯品。免疫学实验及L92 9细胞体外实验均表明 :该蛋白具有TNFR(P5 5 )特异的抗原性、与TNF结合的活性以及良好的抑制TNF的生物学活性。
- 安乃莉徐春晓姚立红陈爱君曾革非张立国张智清
- 关键词：基因克隆融合蛋白大肠杆菌
- 可溶性人肿瘤坏死因子受体Ⅱ(sTNFRⅡ)在大肠杆菌中的表达及其活性检测被引量：3
- 2001年
- 肿瘤坏死因子 (TNF)是一种多功能性的细胞因子 ,与许多重大疾病有关。为了抑制TNF的生物学活性 ,将TNF受体Ⅱ胞外区在大肠杆菌中进行了可溶性表达 ,并通过金属鳌合层析柱纯化重组蛋白。结果表明 ,纯化的重组蛋白能够识别并结合TNF ,同时能中和TNF的生物学活性 ,抑制其对细胞的杀伤作用 ,具有潜在的临床应用前景。
- 徐春晓姚立红陈爱君安乃莉曾革非张立国张智清
- 关键词：肿瘤坏死因子受体可溶性受体大肠杆菌
