董雄剑
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：同济大学附属同济医院更多>>
- 发文基金：上海市卫生系统百名跨世纪优秀学科带头人培养计划海外青年学者合作研究基金教育部科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- hKCNE5基因克隆及其重组腺病毒表达载体的构建被引量：1
- 2006年
- 目的本研究旨在克隆人KCNE5(hKCNE5)基因,构建其重组腺病毒表达载体,以便研究hKCNE5基因过度表达对心房颤动的防治作用。方法首先利用PCR技术克隆hKCNE5基因,并将hKCNE5基因亚克隆到腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV;然后将该重组质粒线性化后电转化含有复制缺陷型腺病毒pAdEasy-1(Ad)的BJ5183-AD-1细胞,经过同源重组,获得复制缺陷型重组腺病毒hKCNE5-Ad,并经酶切鉴定、序列分析证实无误;接着将其转染超级感受态细胞XL10-Gold扩增、纯化、线性化,再感染AD-293细胞进行包装便可获得大量复制的重组腺病毒hKCNE5-Ad。结果hKCNE5基因被成功克隆后正确插入腺病毒载体Ad,其序列与GenBank公布的一致;hKCNE5-Ad可感染AD-293细胞并能在AD-293细胞内进行高效复制;收集含有hKCNE5-Ad的AD-293细胞悬液,-80℃保存备用。结论本研究成功地克隆了hKCNE5基因,构建了hKCNE5基因重组腺病毒表达载体,为进一步研究hKCNE5基因过度表达对心房颤动的防治作用奠定了基础。
- 杨奕清刘懿夏敏董雄剑林捷陈义汉
- 关键词：克隆转基因腺病毒
- 心肌特异性表达人KCNE4转基因小鼠模型的建立
- 2006年
- 目的本研究旨在建立心肌特异性表达人KCNE4(hKCNE4)基因小鼠模型,为探索hKCNE4基因对特定类型心房颤动的防治作用奠定基础。方法通过RT-PCR克隆hKCNE4基因,使用核酸内切酶和连接酶构建hKC- NE4基因心肌特异性表达载体hKCNE4-α-MHC-Clone26,经过酶切鉴定、序列分析证实无误后用BamHI酶切获得转基因表达元件hKCNE4-α-MHC-hGH pA。将hKCNE4-α-MHC-hGH pA显微注入小鼠受精卵雄性原核,并将有活力的受精卵移植到代孕小鼠的输卵管。PCR鉴定出代孕鼠所生小鼠中转基因阳性原代(G0)小鼠,运用RT-PCR-测序技术对阳性G0小鼠与野生型小鼠交配所生的一代(G1)小鼠进行检测以识别出表达转基因的阳性小鼠。结果成功克隆了hKCNE4基因,正确构建了hKCNE4基因心肌特异性表达载体hKCNE4-α-MHC-Clone 26。代孕鼠共生产86只仔鼠,9只转基因阳性,2只(分别称其为Line A和Line B)转基因在心脏中高表达。对Line A和Line B的阳性后代进行初步表型分析发现其生长发育良好,繁殖力正常,体表心电图无明显异常。结论成功建立心肌特异性表达hKCNE4转基因小鼠模型,为进一步研究hKCNE4基因对特定类型心房颤动的防治作用提供了一种工具。
- 杨奕清刘懿董雄剑林捷陈义汉
- 关键词：转基因心律失常小鼠
