- 猪β-内啡肽基因克隆和重组质粒壳聚糖修饰分子包装体外表达研究被引量：1
- 2013年
- 目的克隆猪β-内啡肽基因,研究其体外原核、真核表达,探索高效表达目的基因的新型纳米材料,为进一步研究β-内啡肽对动物免疫应答和应激调节等方面的作用奠定基础。方法利用基因延伸重叠PCR克隆β-内啡肽的基因cDNA,双酶切后插入VR1020、pGEX-4T-1,构建其真核、原核表达载体;以不同浓度的IPTG诱导表达重组融合蛋白,并作SDS-PAGE和RT-PCR分析目的基因原核表达情况;利用壳聚糖及其修饰分子制备纳米颗粒包装重组真核表达质粒,体外转染HEK293细胞,提取总RNA进行RT-PCR分析β-内啡肽基因在真核细胞的表达。结果成功克隆了猪β-内啡肽基因,并构建获得其原核和真核表达载体;不同浓度的IPTG诱导后,在29.7kDa的位置出现了新的蛋白条带,而原来的26.2kDa处的GST标签蛋白条带消失。说明目的基因已经和GST融合产生了新的融合蛋白;壳聚糖及其聚乙二醇和聚乙烯亚胺接枝修饰分子(mPEG-PEI-CS)纳米颗粒包裹VREP转染HEK293细胞,48h后收集细胞,RT-PCR和ELISA检测显示VREP能够在HEK293细胞中高效地转录表达β-内啡肽。结论本实验成功克隆了猪的β-内啡肽基因,并成功进行了原核及真核细胞表达分析,壳聚糖修饰分子纳米颗粒包装可高效表达目的基因,为进一步的动物实验奠定了基础。
- 白光明罗公明王晔李瑛高荣
- 关键词：克隆细胞转染
- 猪白细胞介素4/6、2基因共表达及其在制备生物制剂中的应用
- 本发明公开了融合猪白细胞介素4/6、2基因共表达及其在制备生物制剂中的应用，本发明提供了一种用于制备具有如下功能产品的蛋白组合物：由融合蛋白PIL4/6和白细胞介素PIL-2组成；所述融合蛋白PIL4/6包括白细胞介素P...
- 高荣陈建林杨璐一李金良梁歌王泽洲吕学斌王斌詹素琼罗公明李江凌曾富强李旭廷
- 文献传递
- 仔猪口服融合防御素的免疫和生长调节效应
- 目的通过饲喂FBD重组毕赤酵母菌发酵液,以研究它对仔猪生长性能和免疫应答的影响。方法选取45日龄、体重约9kg的藏猪仔猪40头,随机分成A1、A2、A3实验组和对照组C,A1、A2、A3分别按200mL/头,1次/天、1...
- 罗公明白光明程驰万小平陈建林高荣
- 关键词：仔猪生长发育免疫应答
- 猪白细胞介素2与融合白细胞介素4/6基因共表达的免疫效应研究被引量：2
- 2014年
- 目的构建猪融合白细胞介素4/6与猪白细胞介素2基因的共表达载体,研究其共表达对小鼠免疫的协同效应。方法以2A自剪接技术首次构建猪融合白细胞介素4/6与白细胞介素2基因的共表达重组质粒,以壳聚糖纳米材料包裹制成纳米颗粒,进行体外转染HEK293细胞,提取总RNA进行RT-PCR分析,最后肌肉注射小鼠进行体内实验并分析。结果成功构建了重组共表达质粒VRIL4/6-2;壳聚糖包裹后转染HEK293细胞,48 h后收集细胞,RT-PCR检测显示目的基因能够在HEK293细胞中高效地转录与表达。小鼠接种实验结果表明,实验组血清中的IgG和IgG2a的含量比对照组显著增加,并且VRIL4/6-2-CS接种组的小鼠体液免疫水平明显增高(P<0.05);VRIL4/6-2实验组的CD4+淋巴细胞显著多于其它实验组(P<0.05);实验组IL-2、IL-4、IL-6、IL-23基因的表达水平明显高于对照组(P<0.05),实验组小鼠外周血白细胞、血小板和血红蛋白的含量均显著高于对照组(P<0.05)。结论 VRIL4/6-2共表达质粒能够更好的增强动物体液免疫和细胞免疫机能,可作为提高动物体液免疫和细胞免疫的经济高效安全新型免疫调节剂,具有潜在的重要应用前景。
- 杨璐一肖永乐万小平罗公明王晔陈义辉孙文魁高荣
- 关键词：共表达免疫
