王晔
- 作品数：7 被引量：6H指数：2
- 供职机构：四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 藏猪和约克夏猪免疫相关组织中免疫基因表达水平的比较
- 引言/目的细胞因子在免疫应答和抗病遗传中起着十分关键性的重要作用。为了系统比较中国特有高原地方猪种(藏猪)与外来猪种(约克夏猪)的免疫机能和应答反应特征,探讨它们之间的差异性及其特点,为确定和利用藏猪高抗病力和耐逆性的遗...
- 程驰孙文魁陈义辉王晔高荣
- 关键词：细胞因子荧光定量PCR转录水平
- 猪β-内啡肽基因克隆和重组质粒壳聚糖修饰分子包装体外表达研究被引量：1
- 2013年
- 目的克隆猪β-内啡肽基因,研究其体外原核、真核表达,探索高效表达目的基因的新型纳米材料,为进一步研究β-内啡肽对动物免疫应答和应激调节等方面的作用奠定基础。方法利用基因延伸重叠PCR克隆β-内啡肽的基因cDNA,双酶切后插入VR1020、pGEX-4T-1,构建其真核、原核表达载体;以不同浓度的IPTG诱导表达重组融合蛋白,并作SDS-PAGE和RT-PCR分析目的基因原核表达情况;利用壳聚糖及其修饰分子制备纳米颗粒包装重组真核表达质粒,体外转染HEK293细胞,提取总RNA进行RT-PCR分析β-内啡肽基因在真核细胞的表达。结果成功克隆了猪β-内啡肽基因,并构建获得其原核和真核表达载体;不同浓度的IPTG诱导后,在29.7kDa的位置出现了新的蛋白条带,而原来的26.2kDa处的GST标签蛋白条带消失。说明目的基因已经和GST融合产生了新的融合蛋白;壳聚糖及其聚乙二醇和聚乙烯亚胺接枝修饰分子(mPEG-PEI-CS)纳米颗粒包裹VREP转染HEK293细胞,48h后收集细胞,RT-PCR和ELISA检测显示VREP能够在HEK293细胞中高效地转录表达β-内啡肽。结论本实验成功克隆了猪的β-内啡肽基因,并成功进行了原核及真核细胞表达分析,壳聚糖修饰分子纳米颗粒包装可高效表达目的基因,为进一步的动物实验奠定了基础。
- 白光明罗公明王晔李瑛高荣
- 关键词：克隆细胞转染
- RNAi沉默藏猪TGF-β1对PRRSV病毒复制和免疫的效应研究
- 2018年
- 转移生长因子-β1(Transforming growth factor beta 1,TGF-β1)在猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染宿主细胞的过程中发挥重要作用。基于此本篇通过RNAi技术从体外沉默藏猪外周血单核细胞(Tp-PBMCs)中TGF-β1基因表达并随即感染PRRSV为出发点,探究TGF-β1表达受抑对PR R SV复制、细胞活性以及免疫应答的影响。研究表明,随着TGF-β1基因表达的抑制,Tp-PBMCs中PRRSV复制被明显抑制,抑制率高达99.0%;细胞活性升高约150%~160%;并成功激活多个抗病毒免疫相关基因转录,其中白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、α干扰素(interferon-alpha,IFN-α)、γ干扰素(interferon-gamma,IFN-γ)、α肿瘤坏死因子(tumor necrosis factoralpha,TNF-α)、Toll样受体-3(toll-like receptor 3,TLR-3)的转录水平明显升高;而白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)的mRNA水平明显降低。由此可见,用RNAi技术沉默TGF-β1基因表达不仅能抑制PRRSV的复制,还能激活免疫应答进一步抑制病毒感染的发生,从而为控制藏猪感染PRRSV提供了一条新的途径。
- 王晔
- 关键词：藏猪TGF-Β1PRRSV免疫基因
- 猪白细胞介素2与融合白细胞介素4/6基因共表达的免疫效应研究被引量：2
- 2014年
- 目的构建猪融合白细胞介素4/6与猪白细胞介素2基因的共表达载体,研究其共表达对小鼠免疫的协同效应。方法以2A自剪接技术首次构建猪融合白细胞介素4/6与白细胞介素2基因的共表达重组质粒,以壳聚糖纳米材料包裹制成纳米颗粒,进行体外转染HEK293细胞,提取总RNA进行RT-PCR分析,最后肌肉注射小鼠进行体内实验并分析。结果成功构建了重组共表达质粒VRIL4/6-2;壳聚糖包裹后转染HEK293细胞,48 h后收集细胞,RT-PCR检测显示目的基因能够在HEK293细胞中高效地转录与表达。小鼠接种实验结果表明,实验组血清中的IgG和IgG2a的含量比对照组显著增加,并且VRIL4/6-2-CS接种组的小鼠体液免疫水平明显增高(P<0.05);VRIL4/6-2实验组的CD4+淋巴细胞显著多于其它实验组(P<0.05);实验组IL-2、IL-4、IL-6、IL-23基因的表达水平明显高于对照组(P<0.05),实验组小鼠外周血白细胞、血小板和血红蛋白的含量均显著高于对照组(P<0.05)。结论 VRIL4/6-2共表达质粒能够更好的增强动物体液免疫和细胞免疫机能,可作为提高动物体液免疫和细胞免疫的经济高效安全新型免疫调节剂,具有潜在的重要应用前景。
- 杨璐一肖永乐万小平罗公明王晔陈义辉孙文魁高荣
- 关键词：共表达免疫
- shRNA沉默转化生长因子-β1及其受体对猪繁殖与呼吸综合征病毒在体外的复制及免疫应答的影响
- 引言猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是动脉病毒属的单链RNA病毒,它能利用免疫抑制因子扰乱宿主对病原的应答。研究表明TGF-β在PRRSV建立感染并致病的过程中起着重要作用。有研究成功地将RNA干扰技术(RNAi)应...
- 陈义辉王晔汪伟万小平高荣
- 关键词：藏猪转化生长因子猪繁殖与呼吸综合征病毒
- shRNA沉默猪白细胞介素-10及其受体基因对PRRSV复制和免疫应答的影响
- 引言猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是动脉病毒属的一种高致病性单链RNA病毒,给全球的养猪产业带来了巨大的损失。研究表明PRRSV诱导白细胞介素-10(IL-10)增加而抑制机体抗病毒免疫应答,是它感染致病的重要机理...
- 王晔陈义辉汪伟万小平肖永乐高荣
- 关键词：藏猪短发夹RNA
- pBD-1和PR-39基因在藏猪与约克夏猪免疫组织中的表达水平的比较研究被引量：3
- 2014年
- β-防御素1和抗菌肽PR-39在动物固有免疫中起重要作用。本实验采用实时荧光定量PCR对6周、12周和24周龄的藏猪和约克夏猪的胸腺、血液、脾脏、扁桃体、肺门淋巴结和肠系膜淋巴结中的p BD-1和PR-39 mRNA表达规律及水平进行比较。结果表明:在两种猪的所有组织中均能检测出p BD-1与PR-39 mRNA,且p BD-1与PR-39mRNA水平呈先升高后略降的时序表达模式;在不同组织中,p BD-1mRNA在两种猪的扁桃体中高表达,而PR-39mRNA在肠系膜淋巴结中高表达,二者在脾脏中低表达;与约克夏猪相比,藏猪血液、扁桃体和肠系膜淋巴结中的p BD-1和PR-39 mRNA表达量高(P<0.05),在12周和24周龄肺门淋巴结中p BD-1mRNA低(P<0.05),在胸腺和脾脏中无显著性差异(P>0.05)。说明p BD-1和PR-39mRNA在猪的免疫组织器官中均能表达并且其表达量具有组织偏好性、时序性和品种差异;与约克夏猪相比,藏猪多个免疫组织中p BD-1和PR-39mRNA高表达(P<0.05)可能与藏猪较强的抗病力和耐逆性有关。
- 程驰孙文魁陈义辉王晔李江凌刘锐高荣
- 关键词：荧光定量PCR转录
