杨长青
- 作品数：12 被引量：15H指数：3
- 供职机构：山西医科大学第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山西省青年科技研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- pGL3-hTERT-tk／GCV对胃癌细胞的促凋亡作用被引量：4
- 2008年
- 目的:探讨重组质粒pGL3-hTERT-tk/GCV对胃癌细胞的促凋亡作用。方法:以基因工程方法构建重组质粒pGL3-hTERT-tk和相应的荧光报告质粒pGL3-hTERT-tk-Luc^+;脂质体Lipofectamine^(TM)2000瞬时转染胃癌细胞系SGC-7901并用GCV干预,荧光显微镜观察细胞形态变化和转染效率,TUNEL标记和流式细胞术观察转染后胃癌细胞的凋亡;以上实验均以正常肝细胞L-02为对照。结果:经鉴定,重组质粒pGL3-hTERT-tk中tk片段的长度为1100 bp。荧光素酶标记的阳性、阴性对照及治疗报告质粒pGL3-hTERT-tk-Luc^+均能有效转染高表达端粒酶活性的胃癌细胞SGC-7901,转染效率为(8.2±1.14)%。重组质粒转染胃癌细胞后与GCV共育4 d,细胞的凋亡率为(60.0±1.56)%;被pGL3-hTERT-tk转染的肿瘤细胞细胞周期发生了变化,处于细胞周期早期的细胞大量凋亡,早期凋亡率为(47.1±1.35)%。结论:pGIB-hTERT-tk/GCV对胃癌细胞有强烈的杀伤作用,但不影响正常细胞的生长,有潜在临床应用前景。
- 邓志华杨长青王桂琴王晶晶
- 关键词：HTERT启动子自杀基因单纯疱疹病毒胸苷激酶
- pcDNA3.1(+)/hTERT-tk真核表达质粒的构建及其在HepG-2细胞中的表达
- 2009年
- 目的:研究人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因核心启动子调控的人单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/更昔洛韦(HSV-tk/GCV)系统对肝癌HepG-2细胞的体外杀伤作用。方法:构建hTERT基因启动子调控的tk基因真核表达载体pcDNA3.1(+)/hTERT-tk,用脂质体法分别转染肝癌细胞(HepG-2)和正常肝细胞(L-02)后给予更昔洛韦(GCV),用TUNEL法观察自杀基因对肝癌细胞生长的影响。结果:HETRT启动子调控下的HSV-tk/GCV系统对肝癌HepG-2细胞有明显的杀伤作用,而对正常肝细胞则作用不明显。结论:hTERT-tk/GCV基因体系能够靶向杀伤肝癌细胞,有靶向治疗肝癌的潜力。
- 刘京龙邓志华杨长青刘燕
- 关键词：靶向基因治疗自杀基因
- AF-hTERT-TK/GCV靶向抗肝癌及旁观者效应的研究
- 端粒酶是核糖核蛋白复合体，其主要功能是增加染色体末端端粒的不断重复以维护它的稳定性和细胞的恶性增殖。端粒酶包括两个基本成分，端粒酶RNA模板hTR和催化亚单位hTERT(端粒酶逆转录酶)。hTERT是端粒酶的最重要成分，...
- 杨长青
- 关键词：肝癌端粒酶HTERT
- 文献传递
- hTERT基因启动子调控HSV-tk/GCV系统对HepG2细胞杀伤作用的实验研究被引量：2
- 2008年
- 目的:研究人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因核心启动子调控的人单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦(HSV-tk/GCV)系统对肝癌细胞体外杀伤作用。方法:以pGL3-hT-ERT/tk为基础,构建pGL3-hTERT/luc、pGL3-basic/tk、pGL3-control/tk等真核表达载体,分别将其用脂质体法转染HepG2肝癌细胞和正常肝细胞L02,荧光显微镜观察转染效果,给予前药GCV,用原位末端标记(TUNEL)法、流式细胞仪检测hTERT调控的HSV-tk/GCV系统对两种细胞的杀伤作用,Western blot检测细胞周期素Cyclin D1、CDK2、p21蛋白表达。结果:hTERT启动子调控的HSV-tk/GCV系统对肝癌细胞有明显的杀伤作用,使41.85%的细胞凋亡;而对正常细胞作用不明显,Western也显示Cyclin D1、CDK2蛋白表达下降而p21升高。结论:hTERT启动子调控的tk基因治疗是一种具有肿瘤特异性的治疗方法,有望解决肿瘤基因治疗中的特异性杀伤及降低毒副反应等问题。
- 王晶晶杨长青邓志华王桂琴
- 关键词：基因
- 人端粒酶逆转录酶-双自杀基因对肝癌的靶向杀伤作用被引量：1
- 2009年
- 目前联合基因治疗最常用的是有单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV—TK）和大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（CD）。同时，肿瘤的基因治疗要求导入的自杀基因表达严格限制于靶细胞（肿瘤细胞），而对正常细胞的生长无影响，因此寻找肿瘤细胞的靶点成为亟待解决的现实问题。端粒酶是维持端粒长度的一种逆转录酶，对细胞增殖、衰老及永生化和癌变超重要作用。
- 刘京龙邓志华杨长青刘燕贾静郭素雅杨强撖绍锦李倩倩郎伟宁
- 关键词：人端粒酶逆转录酶双自杀基因靶向杀伤作用单纯疱疹病毒胸苷激酶联合基因治疗肝癌
- 重组腺病毒Ad-hTERTp-HSV-TK/GCV系统的构建及其对人肝癌细胞HepG2的杀伤作用及旁观者效应研究被引量：4
- 2009年
- 背景与目的:肝癌的基因治疗已成为肝癌治疗的重要发展方向,本文探讨Ad-hTERTP-HSV-TK/GCV系统对人肝癌细胞株HepG2的杀伤作用;并观察其过程中旁观者效应的作用。方法:用重组腺病毒Ad-hTERTP-HSV-TK系统分别感染肝癌细胞株HepG2和正常肝细胞L-02,加入前体药物更昔洛韦(GCV),四甲基偶氮唑盐比色法检测其对感染后细胞的杀伤作用;将感染后的TK阳性HepG2细胞和未感染的TK阴性HepG2细胞按不同比例浓度(0∶10、1∶9、2∶8、3∶7、4∶6、5∶5、6∶4、7∶3、8∶2、9∶1、10∶0)混合,观察其旁观者效应。结果:肝癌细胞HepG2的存活率随病毒感染复数(MOI)和GCV浓度增加而逐渐降低,L-02细胞无明显变化。旁观者效应表明,在TK阳性HepG2细胞为10%时,细胞抑制率达28.06%,70%时达90.44%。结论:重组腺病Ad-hTERTP-HSV-tk/GCV系统对肝癌细胞HepG2有选择性杀伤作用及明显的旁观者效应。
- 刘燕邓志华杨长青刘京龙贾静郭素雅杨强
- 关键词：重组腺病毒载体HTERT启动子自杀基因
- 肿瘤基因治疗中HSV1-TK的靶向性研究被引量：1
- 2008年
- 自杀基因HSV1-TK可选择性杀伤表达HSV1-TK的细胞，在肿瘤的基因治疗中尤为重要。HSV1-TK除了可以引起细胞自杀作用外，还有独特的旁观者效应，已经被美国FDA批准进入Ⅲ期临床试验研究。近几年人们把HSV1-TK的研究重点放在了肿瘤靶向性治疗上，力求提高HSV1-TK的转移效率以及HSV1-TK基因表达的特异性，使抗肿瘤治疗更有效，更安全。
- 杨长青邓志华
- 关键词：肿瘤基因靶向治疗
- 去唾液酸糖蛋白-人端粒酶逆转录酶-胸苷激酶／丙氧鸟苷的靶向促HepG2细胞凋亡作用及旁观者效应被引量：2
- 2008年
- 目的观察去唾液酸糖蛋白（AF）-pGL3-人端粒酶逆转录酶（hTERT）-胸苷激酶（TK）对肝癌细胞株HepG2细胞生长及凋亡的影响。方法培养细胞并构建pGL3-hTERT-TK质粒、AF脂质体复合物后，转染HepG2细胞和L02细胞，通过单光子液闪计数仪，脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法和流式细胞仪观察自杀基因对肝癌细胞生长和凋亡的影响，以及其对自杀基因的旁观者效应。结果在肝癌细胞HepG2中，TK基因可以被hTERT启动子驱动高效的表达，而不影响正常肝细胞L02的生长，AF通过识别去唾液酸糖蛋白受体结合到HepG2细胞表面，其携带的TK基因更易进入肝癌细胞，同时增强自杀基因TK的高效表达，在旁观者效应机制的参与下，肝癌细胞总的凋亡率达85％±3％，而正常肝细胞则仅为16％±2％。结论AF-pGL3-hTERT-TK可以靶向攻击肝痛细胞．对正常肝细胞几平无影响．其皋因传递系统具备靶向治疗肝痛的潜力。
- 杨长青邓志华刘燕刘京龙曹燕
- 关键词：旁观者效应自杀基因
- 重组腺病毒Ad—hTERTp—HSV—TK载体的构建及抗肝癌实验研究被引量：1
- 2009年
- 目的构建hTERT启动子调控的HSV—TK基因重组腺病毒载体系统，观察Ad—hTERTp—HSV-TK／GCV自杀基因系统对肝癌细胞的杀伤作用。方法将穿梭质粒pSU-Tp-TK与腺病毒骨架质粒pBHGE3共转导至HEK293细胞，利用细胞内同源重组法构建出hTERT启动子调控的携带TK基因的复制缺陷型腺病毒Ad—hTERTp—HSV—TK载体系统；将不同感染复数（MOI=1、10、100、1000）的重组腺病毒Ad—hTERTp—HSV—TK感染肝癌细胞HepG2及正常肝细胞L-02，加入不同浓度的GCV（0、1、10、100、1000ug／ml），MTT、法检测细胞活性。结果HEK293细胞出现病毒空斑，提取病毒DNA，经PCR鉴定正确后扩增、纯化，滴度为1．5×10^10pfu／ml；MTT法检测到Ad—hTERTp—HSV-TK／GCV能靶向杀死肝癌细胞HepG2，且细胞存活率随着病毒滴度和GCV浓度的增加而降低。结论该实验构建的Ad—hTERTp—HSV—TK载体系统，可靶向抑制肝癌细胞HepG2，而对正常肝细胞L-02几乎无影响。
- 刘燕邓志华杨长青刘京龙贾静郭素雅杨强
- 关键词：HTERT启动子胸苷激酶
- hTERT-TK／GCV对肝癌细胞生长及凋亡的靶向性影响被引量：3
- 2008年
- 背景与目的:自杀基因治疗肿瘤已初见成效,引起了许多研究者的关注,端粒酶有希望成为肝癌基因治疗的理想靶点。本研究探讨hTERT-TK/GCV在体外对肝癌细胞生长及凋亡的靶向杀伤作用及机制。方法:体外细胞培养,构建荧光报告质粒和治疗质粒,脂质体瞬时转染方法将质粒导入肝癌细胞,荧光显微镜,流式细胞仪,原位末端标记等方法观察转染质粒对肝癌细胞生长及凋亡的影响,用Westernblot检测hTERT-TK对肝癌细胞周期调控因子cyclinD1、Cdk2、p21蛋白表达的影响。结果:hTERT-TK可以高效、特异的转染表达端粒酶活性的肝癌细胞HepG2,并使其凋亡,总的凋亡率可达64%,而正常肝细胞L-02的凋亡率仅为15%,几乎不影响正常肝细胞的生长。结论:hTERT-TK/GCV自杀基因系统具有靶向抗肝癌作用,有潜在临床应用前景。
- 杨长青邓志华王桂琴王晶晶曹燕
- 关键词：靶向基因治疗肝癌HTERT启动子自杀基因
