杨季云
- 作品数：17 被引量：98H指数：4
- 供职机构：四川大学华西医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小鼠Rnf141多克隆抗体的制备及鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的获得小鼠Rnf141多克隆抗体,并对其功能进行初步研究。方法利用多聚酶链反应(PCR)扩增获得鼠Rnf141基因并且与原核表达载体pGEX-5X-3(含GST标签)进行重组,将重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3),经1mmol/L IPTG在25℃条件下诱导,用SDS-PAGE检测,获得GST-Rnf141融合蛋白高效表达后,通过Glutathione Sephorase4B纯化。纯化的融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,通过Western blot和免疫组织化学的方法检测抗体的特异性。结果成功构建了重组质粒pGEX-Rnf141,该质粒能在大肠杆菌BL21(DE3)中表达融合蛋白GST-Rnf141,融合蛋白表达量约占细菌总蛋白的46%,制备的多抗效价达1∶128000,它可以与GST-Rnf141重组蛋白和小鼠不同脏器组织Rnf141蛋白发生特异的抗原抗体反应,在脾脏和脑组织中Rnf141蛋白表达量较高。结论成功制备小鼠Rnf141多克隆抗体,该抗体为研究Rnf141的表达与功能提供了有用的工具。
- 宋红霞张思仲杨季云
- 关键词：融合蛋白多克隆抗体
- LPS诱导肺微血管内皮细胞ICAM-1的表达及核调控机理的实验研究被引量：4
- 2002年
- 目的 :研究细菌脂多糖 (LPS)诱导的肺微血管内皮细胞 (PMVEC)ICAM - 1的表达及调控机制。方法 :10 0ng·ml-1LPS刺激PMVEC 0h、2h、4h、6h、8h或 10ng·ml-1、5 0ng·ml-1、10 0ng·ml-1LPS刺激 6h ,免疫细胞化学检测PMVECICAM - 1的表达。凝胶电泳迁移率变化分析检测NF -κB的活化。并通过加入活化阻断剂PDTC观察对PMVECICAM - 1表达的影响。结果 :PMVECICAM - 1的表达与LPS的刺激呈时相 -剂量依赖方式。LPS的刺激迅速活化NF -κB ,6 0min达到高峰 ,后逐渐下降。PDTC能显著降低ICAM - 1的表达 (P <0 .0 1)。结论 :LPS刺激诱导NF -κB的活化 ,启动ICAM - 1的合成表达。
- 顾大勇曾祥元陈莉杨季云马布仁王天然唐旭东石力
- 关键词：肺微血管内皮细胞细胞间粘附分子-1
- LPS诱导肺微血管内皮细胞与PMN的粘附作用及核调控机理的实验研究被引量：1
- 2002年
- 目的研究LPS诱导的肺微血管内皮细胞(PMVEC)与(PMN)的粘附作用及调控机制。方法100ng/mlLPS刺激PMVEC0、2、4、6、8h或10ng/ml、50ng/ml、100ng/mlLPS刺激6h ,检测PMVEC -PMN粘附率、PMVECICAM -1的表达(免疫细胞化学)。EMSA方法检测NF -κB的活化。并通过加入An ti_ICAM -1抗体或活化阻断剂观察对PMVEC -PMN粘附率的影响。结果PMVECICAM -1的表达及与PMN的粘附与LPS的刺激呈时相 -剂量依赖方式。LPS的刺激迅速活化NF -κB ,60min达到高峰 ,后逐渐下降。Anti-ICAM -1抗体、PDTC能显著降低PMVEC -PMN粘附(P<0.001)。结论LPS刺激诱导NF -κB的活化 ,启动ICAM -1的合成表达 ,从而导致PMVEC
- 曾祥元顾大勇马布仁陈莉杨季云王天然唐旭东石力
- 关键词：LPS诱导肺微血管内皮细胞PMN粘附作用多形核中性粒细胞ICAM-1
- LPS直接诱导对肺微血管内皮细胞NF-κB的影响
- 2002年
- 目的探讨LPS的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞(PMVEC)核因子κB(NF -κB)的影响。方法100ng/mlLPS刺激PMVEC0、0.5、1、2、4、6、8h或10ng/ml、50ng/ml、100ng/mlLPS刺激1h ,凝胶电泳迁移率试验检测NF -κB的活化 ,免疫细胞化学观察其亚基p50、p65的核转位。并通过加入活化阻断剂TPCK观察对诱导的NF -κB活化的影响。结果LPS的刺激迅速诱导p50、p65亚基核转位 ,活化NF -κB ,1h达高峰 ,且呈剂量依赖关系 ,后逐渐下降。PDTC能显著抑制其活化(P<0.01)。结论LPS的直接刺激诱导NF -κB的活化 。
- 马布仁顾大勇白小红杨季云曾祥元
- 关键词：肺微血管内皮细胞NF-ΚB活化炎症反应
- LPS直接诱导对肺微血管内皮细胞IL-8的表达及对PMN趋化作用影响的研究
- 2002年
- 目的探讨LPS的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞(PMVEC)IL -8表达的影响及诱导发生的PMVEC对多形核中性粒细胞(PMN)趋化作用的影响。方法100ng/mlLPS刺激PMVEC0、0.5、1、2、4、6、8h或1ng/ml、10ng/ml、100ng/mlLPS刺激6h ,ELISA和原位杂交试验分别检测培养基上清液中分泌的IL -8及PMVEC内IL -8mRNA的表达 ,同时琼脂糖平板法检测对PMN的趋化作用 ,并通过抗IL -8的抗体抑制试验观察对趋化作用的影响。结果LPS能显著促进PMVEC表达IL -8 ,包括促进IL -8mRNA的表达及IL -8的分泌。在时间上mRNA的表达先于IL -8分泌。LPS能促进PMVEC对PMN的趋化 ,随刺激作用的持续 ,诱导的PMVEC对PMN的趋化作用加强。抗IL -8抗体能显著抑制对PMN的趋化作用(P<0.01)。结论表明细菌致病因子LPS的直接诱导能促进PMVEC高效表达和分泌IL -8 ,从而为PMN的迁移提供必需的物质条件 。
- 顾大勇陈莉马布仁杨季云曾祥元
- 关键词：肺微血管内皮细胞IL-8PMN趋化作用粒细胞
- IL-6对TNF-α的细胞杀伤作用影响的实验研究被引量：2
- 2003年
- 目的 :研究IL - 6在肿瘤细胞对TNF -α耐受中的作用。方法 :检测SMMC - 772 1细胞在TNF -α作用下IL - 6的分泌。同时应用MTT实验检测细胞存活率 ,观察IL - 6和阻断IL - 6活性对细胞存活率的影响。结果 :SMMC - 772 1细胞能分泌IL - 6 ,TNF -α能促进细胞分泌IL - 6。外源加入的IL - 6对SMMC - 772 1细胞生长起促进作用。但加入抗IL - 6抗体或抗IL - 6R抗体时 ,与对照组相比 ,SMMC - 772 1细胞对TNE -α的敏感性也显著增加 ,10ng/mLTNF -α对SMMC - 772 1细胞就有显著的杀伤作用 ,P <0 0 1。随着浓度的增加 ,细胞存活率显著降低。结论 :抗IL - 6抗体和抗IL- 6R抗体可以抑制SMMC - 772 1细胞生长 ,能明显增加SMMC - 772 1细胞对TNF -α的敏感性。IL - 6对SMMC -772 1细胞的生长起促进作用。
- 杨季云马布仁曾祥元
- 关键词：IL-6TNF-Α肝癌
- LPS的直接诱导对肺微血管内皮细胞IL-8的表达及对PMN趋化作用影响的研究被引量：5
- 2003年
- 目的探讨LPS的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞(PMVEC)IL -8表达的影响及诱导发生的PMVEC对多形核中性粒细胞 (PMN)趋化作用的影响。方法100ng/mlLPS刺激PMVEC0、1、2、4、6、8h或1、10、100ng/mlLPS刺激6h,ELISA和原位杂交试验分别检测培养液上清中分泌的IL -8及PMVEC内IL-8mRNA的表达 ,同时琼脂糖平板法检测对PMN的趋化作用 ,并通过抗IL -8的抗体抑制试验观察对趋化作用的影响。结果LPS能显著促进PMVEC表达IL -8 ,包括促进IL-8mRNA的表达及IL -8的分泌。在时间上mRNA的表达先于IL -8分泌。LPS能促进PMVEC对PMN的趋化 ,随刺激作用的持续 ,诱导的PMVEC对PMN的趋化作用加强。抗IL -8抗体能显著抑制对PMN的趋化作用(P<0.01)。结论表明细菌致病因子LPS的直接诱导确能促进PMVEC高效表达和分泌IL -8 ,从而为PMN的迁移提供必需的物质条件,发挥对PMN的趋化作用而参与导致肺损伤。
- 顾大勇李艳陈莉马布仁杨季云曾祥元
- 关键词：LPS肺微血管内皮细胞IL-8PMN趋化作用
- 肿瘤坏死因子α通过激活NF-κB信号通路加快肝细胞周期进程被引量：41
- 2007年
- 在慢性炎症部位有易发肿瘤的倾向,大约有20%的恶性肿瘤发生与慢性炎症相关,肝细胞癌是世界第三大癌症死亡病因,其患者多数有慢性炎症病史,当炎症慢性迁延,肝细胞癌发生率明显增加.但慢性炎症与肿瘤发生与发展的细胞和分子机制仍然不清楚.利用人肝细胞株L-02细胞,研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)对细胞周期的影响及其机制,并探讨核因子κB(NF-κB)和ERK1/2活化对细胞周期的影响,以期能更确切地阐明炎症介质TNF-α在肝细胞癌发生发展中的作用.发现TNF-α能促进肝细胞从G0/G1期向S期转换.蛋白质印迹检测表明,TNF-α能以剂量依赖方式诱导cyclinD1表达,而对cyclinE的表达无明显影响.同时TNF-α能激活NF-κB,ERK1/2,抑制NF-κB活化降低了TNF-α诱导的cyclinD1表达,导致细胞周期阻滞于G0/G1期.抑制ERK1/2活化则对细胞周期和cyclinD1表达无显著影响.结果提示,TNF-α通过活化NF-κB信号通路,诱导cyclinD1表达,加快细胞周期进程,这可能是促进肿瘤的发生发展重要机制.针对TNF-α和NF-κB的治疗可能延长慢性炎症相关性肿瘤的潜伏期和抑制肿瘤的发展.
- 杨季云张思仲郭红曾祥元马布仁
- 关键词：慢性炎症肿瘤发生
- LPS诱导肺微血管内皮细胞ICAM-1的表达及NF-κB作用的实验研究被引量：26
- 2002年
- 目的研究LPS诱导的肺微血管内皮细胞 (PWVEC)ICAM -1的表达及调控机制。方法100ng/mlLPS刺激PMVEC0h、2h、4h、6h、8h或10ng/ml、50ng/ml、100ng/mlLPS刺激6h ,免疫细胞化学检测PMVECICAM -1的表达。凝胶电泳迁移率变化分析检测NF -κB的活化。并通过加入活化阻断剂PDTC观察对PMVECICAM -1表达的影响。结果PMVECICAM -1的表达与LPS的刺激呈时相 -剂量依赖方式。LPS的刺激迅速活化NF -κB ,60min达到高峰 ,后逐渐下降。PDTC能显著降低ICAM -1的表达 (P<0 .01)。结论LPS刺激诱导NF-κB的活化 ,启动ICAM -1的合成表达。
- 顾大勇曾祥元陈莉杨季云马布仁王天然唐旭东石力
- 关键词：LPS肺微血管内皮细胞ICAM-1
- 脂多糖直接诱导对肺微血管内皮细胞核因子κB的影响被引量：2
- 2003年
- 顾大勇马布仁陈莉杨季云曾祥元王晓华
- 关键词：脂多糖肺疾病微血管内皮细胞
