公共文化服务平台

趋化因子CXCL14在CLL4诱导的急性肝损伤过程中的作用: CXCL14是CXC趋化因子家族成员，它特异性地趋化单核细胞，树突状细胞和自然杀伤细胞，承担免疫监视作用。在蛋白质一级序列上，CXCL14与家族中其它成员的差异较大，而在不同物种之间却相当保守。在一级结构上缺失氨基末端的...; 李京敬; 关键词：急性肝损伤趋化因子质粒转染原核表达纯化方法

一种基于膜结合蛋白和荧光互补的高通量猎物拮抗剂筛选方法: 一种基于膜结合蛋白和荧光互补的高通量猎物拮抗剂筛选方法。本发明涉及基因工程领域，具体公开了一种筛选受体拮抗剂的新方法及其应用。所述方法将存在于细胞外的配体和受体通过信号肽融合表达策略表达至细胞膜，并使得与受体发生相互作用...; 李京敬; 文献传递

Matrix蛋白和G蛋白双位点突变型水泡性口炎病毒的构建及生物学活性观察被引量：3: 2011年; 重组水泡性口炎病毒(Vesiclar stomatitis virs,VSV)是一种具有良好应用前景的病毒载体,可应用于制备疫苗和治疗肿瘤,但该载体仍存在安全性问题,高剂量注射实验动物可导致产生神经毒性。为减低乃至去除野生型VSV的致病性,作者针对VSV毒力因子,构建了Matrix蛋白和G蛋白双位点突变型重组VSV,该病毒敲除了原来Matrix蛋白的第51位精氨酸和G蛋白C末端的28个氨基酸。相比野生型VSV,新病毒的致病性显著降低。试验也证实这个致弱的病毒是由于2种不同弱化机理共同作用所致,即I型干扰素作用和复制能力减低。新型VSV病毒载体有希望成为一个更安全、有效的疫苗载体。; 方心葵李京敬王欣孙涛; 关键词：水泡性口炎病毒病毒载体

S100A4原核表达载体的构建以及蛋白的表达和纯化被引量：2: 2013年; S100A4是S100蛋白家族的成员,在细胞的增殖、分化、损伤修复以及肿瘤细胞转移等方面发挥重要的调控作用。本研究将S100A4全长基因构建到pET28a原核表达载体上,利用大肠杆菌表达系统表达和纯化出高纯度的重组人S100A4。通过试验证明,重组人S100A4蛋白在体外可以有效地增强黑色素瘤细胞A375-S2的增殖。重组人S100A4原核表达与纯化方法的建立将促进其结构和生物学功能研究,并且对于S100蛋白家族其它蛋白的表达与纯化具有重要的参考意义。; 韩雷何虹霖关文李京敬袁运生俞雁; 关键词：S100A4 原核表达蛋白纯化蛋白活性

一种基于膜结合蛋白和荧光互补的高通量猎物拮抗剂筛选方法: 一种基于膜结合蛋白和荧光互补的高通量猎物拮抗剂筛选方法。本发明涉及基因工程领域，具体公开了一种筛选受体拮抗剂的新方法及其应用。所述方法将存在于细胞外的配体和受体通过信号肽融合表达策略表达至细胞膜，并使得与受体发生相互作用...; 李京敬; 文献传递

2种定量PCR法与探针杂交法在检测重组白介素1受体拮抗剂中宿主DNA残留量的比较被引量：2: 2014年; 目的：建立Taqman探针技术的定量PCR方法，对大肠杆菌E.coli/BL21菌株生产的重组白介素1受体拮抗剂（rhIL^-1ra）中的残留宿主DNA进行了定量分析，并与SYBR Green法和地高辛探针杂交法进行比较。方法：以BioRad Chromo 4荧光定量PCR仪为平台，选择大肠杆菌23S核糖体RNA基因为靶基因，设计引物和Taqman探针，以纯化的宿主基因组DNA为标准品，对供试品中残留DNA进行定量。同时在重复性，精密度，检测限等方面与SYBR Green方法和地高辛探针杂交法进行比较。结果：本实验建立的Taqman探针法检测限为0.01 ng·mL^-1，在0.01～1000 ng·mL^-1区间同样具有良好的线性（r=0.997），回收率89.7%～136.0%。测定4批次供试品中残留DNA浓度为0.052、0.092、0.096、0.025 ng·mL^-1。结论：Taqman探针法与SYBR Green法检测灵敏度均达到0.01 ng·mL^-1，在重复性与精密度方面效果一致，且均优于探针杂交方法。; 李京敬郜尽韩伟; 关键词：大肠杆菌定量PCR

重组人Midkine真核表达载体的构建以及蛋白表达和纯化被引量：1: 2014年; Midkine(MK)是一种肝素结合型生长因子,在胚胎早期的分化发育、肿瘤、炎症、再生等方面发挥着重要的调控作用。本研究将人MK(hMK)全长基因构建到pPICZa(B)表达载体上,通过化学转染方法,转染质粒至不同酵母菌株中进行筛选,利用毕赤酵母的高密度发酵进行表达,纯化出高纯度的重组人Midkine(rhMK),并通过试验证明,纯化的rhMK具有趋化UMR106细胞的活性。rhMK的真核表达与纯化方法的建立为后续的药效学试验奠定了基础,并对其它蛋白的真核表达、纯化也有一定的参考意义。; 徐杨琪李京敬关文郜尽贾世香屠平韩伟俞雁; 关键词：毕赤酵母发酵离子交换层析高效液相色谱

一种抗原抗体共展示方法用于膜抗原的抗体文库筛选: 本发明公开了一种抗原抗体共展示方法用于膜抗原的抗体文库筛选。本发明所要针对目标抗原为膜蛋白，将目标抗原表达在细胞膜上，并将该目标抗原与细胞膜内侧的效应蛋白结构域偶联。同时将针对目标抗原的特异性抗体文库通过跨膜肽表达在细胞...; 李京敬张荫杰; 文献传递

酵母双杂交报告基因β-半乳糖苷酶活性测定方法的研究被引量：5: 2009年; 目的建立标准的酵母双杂交系统报告基因表达的β-半乳糖苷酶活性测定方法。方法采用o-硝基-β-D-半乳糖苷(ONPG)为底物,以液氮反复冻融破碎酵母细胞壁,通过比较不同测定时间、接种阳性克隆数目、转化方法以及酵母株对β-半乳糖苷酶酶活的影响,确定最佳酶活测定条件。结果相同条件下,单个克隆之间的酶活有差异,相对标准偏差(RSD)>8%;相同条件下,Y187酵母株比AH109酵母株酶活高18～20倍,并且本底水平很低甚至没有;双倍体酵母的酶活介于两个单倍体酵母之间,同预计一致;质粒顺序转化与共转化在AH109中差异有统计学意义(P<0.001),而在Y187中没有明显差异(P>0.05)。结论测定酵母双杂交报告基因β-半乳糖苷酶的活性宜采用Y187酵母株,酶活变化范围大,本底小,受转化方法影响小,测定时选取5个以上阳性克隆混合培养更有利于酶活的准确测定。; 郜尽王海侠李京敬俞雁; 关键词：酵母双杂交 Β-半乳糖苷酶酶活测定

人CXCL4蛋白原核表达与纯化: 2016年; CXCL4又名血小板因子4(PF4),属于CXC趋化因子亚家族,能够广谱的作用于多种细胞,在炎症,凝血等众多生理及病理反应中发挥重要作用。将CXCL4全长基因构建到原核表达载体p ET43.1a(+),利用大肠杆菌系统表达,继而纯化获得高纯度的目的蛋白。实验表明重组人CXCL4蛋白可以有效抑制人肾癌细胞增殖,具有生物学活性。重组人CXCL4原核表达与纯化方法的建立将有助于其生物学结构与功能的研究,并且对趋化因子家族其它蛋白质的表达与纯化具有参考价值。; 周亮叶浩周瓅关文李京敬郜尽韩伟俞雁; 关键词：原核表达纯化

渝B2-20050021-1　渝公网安备 50019002500403号　违法和不良信息举报中心　互联网出版许可证　新出网证(渝)字10号

李京敬