时代
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 神经免疫反应在慢性疼痛中的作用被引量：1
- 2014年
- 背景慢性疼痛是当前社会一个十分重要的健康问题，数百万人都在遭受其困扰。目前，慢性疼痛产生的机制尚不完全明了。神经免疫反应是指免疫细胞，细胞因子与胶质细胞，神经元之间通过整合、释放炎性介质，对神经递质及其受体产生相互影响，进而产生一个综合性的反应网络。近些年，越来越多的研究表明，神经免疫反应在慢性疼痛的发生发展中，起着关键的作用。目的对神经免疫反应在慢性疼痛产生机制中的作用进行综述。内容神经免疫反应的机制以及其在疼痛敏化过程中的作用。趋向神经免疫反应促进了慢性疼痛的敏化过程，其机制为慢性疼痛的治疗提供了一个新的研究方向。
- 时代田玉科
- 关键词：慢性疼痛免疫细胞
- 脊髓原钙粘蛋白20在大鼠骨癌痛形成中的作用
- 2012年
- 目的探讨脊髓原钙粘蛋白20（PCDH20）在大鼠骨癌痛形成中的作用。方法SPF级雌性SD大鼠36只，体重180～200g，采用随机数字表法，将大鼠随机分为4组（n=9）：假手术组（S组）、骨癌痛组（BCP组）、慢病毒对照组（LC组）、PCDH20siRNA-LV组（P组）。LC组和P组分别于脊髓内注射对照慢病毒和PCDH20 siRNA慢病毒4μl。1周后建立骨癌痛模型，采用右侧胫骨上段骨髓腔内注射Walker256乳腺癌细胞的方法制备。于病毒注射前1d（T1）、骨癌痛模型建立前1d（T2）、模型建立后7、14和21d（T3、T4、T5）时测定机械缩足阈值（MWT）。骨癌痛模型建立后21dMWT测定结束后，取术侧胫骨，HE染色后光镜下观察胫骨癌细胞侵犯情况；取脊髓组织，采用免疫组化法和Western blot法测定脊髓PCDH20和突触后致密物蛋白质95（PSD95）蛋白的表达水平，采用RT-PCR法测定脊髓PCDH20和PSD95mRNA的表达水平。结果BCP组、LC组及P组肿瘤细胞突破骨髓腔，侵犯骨皮质，骨皮质结构严重破坏；与S组比较，BCP组、LC组和P组B～L时MWT明显降低，BCP组和LC组脊髓PCDH20和PSD95mRNA及其蛋白表达水平明显上调，P组脊髓PCDH20蛋白水平上调（P〈0．05）；与BCP组比较，LC组各时点MWT、脊髓PCDH20和PSD95mRNA及其蛋白表达水平比较差异无统计学意义（P〉0．05），P组Td和B时MWT明显升高，脊髓PCDH20和PSD95mRNA及其蛋白表达水平下调（P〈0．05）。结论PCDH20通过调控大鼠脊髓PSD95的表达，调节兴奋性突触的功能，从而参与骨癌痛的形成。
- 李彩娟柯昌斌时代何文胜卜慧莲高峰田玉科
- 关键词：钙黏着糖蛋白类骨肿瘤疼痛
- Robo1 RNA干扰慢病毒载体的构建及其基因沉默效应被引量：4
- 2013年
- 目的构建Roundabout(Robo1)siRNA慢病毒载体,并在SKOV3卵巢癌细胞中鉴定其转染及基因沉默效果。方法根据GenBank中基因信息,采用干扰序列设计软件设计靶点,制备Robo1DNA片段,在T4DNA连接酶作用下,将线性化的病毒载体GV118与DNA片段制备合成GV118-siRNA目的质粒,转化感受态细胞,对于长出的克隆应用菌落PCR鉴定,再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和对比分析,重组病毒质粒与另外2种辅助包装原件载体质粒通过LipofectamineTM2000共转染293T细胞,培养48h后,收集细胞培养上清液,将病毒浓缩后在293T细胞中测定病毒滴度;并检测病毒载体在工具细胞SKOV3卵巢癌细胞中的转染效率,实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blot方法检测Robo1siRNA慢病毒对SKOV3中Robo1的干扰作用。结果成功构建Robo1siRNA慢病毒载体GV118-siR-NA,病毒滴度为2×109 TU/mL;用该病毒体外转染SKOV3卵巢癌细胞,当感染复数(MOI)为10时,感染效率大于90%;RT-PCR和Western blot方法检测Robo1基因沉默的效率分别为76.7%、56.0%。结论成功构建了Robo1siR-NA慢病毒载体GV118-siRNA,该病毒载体在体外转染SKOV3卵巢癌细胞的效率较高,且具有显著的基因沉默效果。
- 李彩娟柯昌斌田玉科时代何文胜卜慧莲高峰
- 关键词：小干扰RNA慢病毒载体基因沉默
