何文胜
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 脊髓原钙粘蛋白20在大鼠骨癌痛形成中的作用
- 2012年
- 目的探讨脊髓原钙粘蛋白20（PCDH20）在大鼠骨癌痛形成中的作用。方法SPF级雌性SD大鼠36只，体重180～200g，采用随机数字表法，将大鼠随机分为4组（n=9）：假手术组（S组）、骨癌痛组（BCP组）、慢病毒对照组（LC组）、PCDH20siRNA-LV组（P组）。LC组和P组分别于脊髓内注射对照慢病毒和PCDH20 siRNA慢病毒4μl。1周后建立骨癌痛模型，采用右侧胫骨上段骨髓腔内注射Walker256乳腺癌细胞的方法制备。于病毒注射前1d（T1）、骨癌痛模型建立前1d（T2）、模型建立后7、14和21d（T3、T4、T5）时测定机械缩足阈值（MWT）。骨癌痛模型建立后21dMWT测定结束后，取术侧胫骨，HE染色后光镜下观察胫骨癌细胞侵犯情况；取脊髓组织，采用免疫组化法和Western blot法测定脊髓PCDH20和突触后致密物蛋白质95（PSD95）蛋白的表达水平，采用RT-PCR法测定脊髓PCDH20和PSD95mRNA的表达水平。结果BCP组、LC组及P组肿瘤细胞突破骨髓腔，侵犯骨皮质，骨皮质结构严重破坏；与S组比较，BCP组、LC组和P组B～L时MWT明显降低，BCP组和LC组脊髓PCDH20和PSD95mRNA及其蛋白表达水平明显上调，P组脊髓PCDH20蛋白水平上调（P〈0．05）；与BCP组比较，LC组各时点MWT、脊髓PCDH20和PSD95mRNA及其蛋白表达水平比较差异无统计学意义（P〉0．05），P组Td和B时MWT明显升高，脊髓PCDH20和PSD95mRNA及其蛋白表达水平下调（P〈0．05）。结论PCDH20通过调控大鼠脊髓PSD95的表达，调节兴奋性突触的功能，从而参与骨癌痛的形成。
- 李彩娟柯昌斌时代何文胜卜慧莲高峰田玉科
- 关键词：钙黏着糖蛋白类骨肿瘤疼痛
- Robo1 RNA干扰慢病毒载体的构建及其基因沉默效应被引量：4
- 2013年
- 目的构建Roundabout(Robo1)siRNA慢病毒载体,并在SKOV3卵巢癌细胞中鉴定其转染及基因沉默效果。方法根据GenBank中基因信息,采用干扰序列设计软件设计靶点,制备Robo1DNA片段,在T4DNA连接酶作用下,将线性化的病毒载体GV118与DNA片段制备合成GV118-siRNA目的质粒,转化感受态细胞,对于长出的克隆应用菌落PCR鉴定,再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和对比分析,重组病毒质粒与另外2种辅助包装原件载体质粒通过LipofectamineTM2000共转染293T细胞,培养48h后,收集细胞培养上清液,将病毒浓缩后在293T细胞中测定病毒滴度;并检测病毒载体在工具细胞SKOV3卵巢癌细胞中的转染效率,实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blot方法检测Robo1siRNA慢病毒对SKOV3中Robo1的干扰作用。结果成功构建Robo1siRNA慢病毒载体GV118-siR-NA,病毒滴度为2×109 TU/mL;用该病毒体外转染SKOV3卵巢癌细胞,当感染复数(MOI)为10时,感染效率大于90%;RT-PCR和Western blot方法检测Robo1基因沉默的效率分别为76.7%、56.0%。结论成功构建了Robo1siR-NA慢病毒载体GV118-siRNA,该病毒载体在体外转染SKOV3卵巢癌细胞的效率较高,且具有显著的基因沉默效果。
- 李彩娟柯昌斌田玉科时代何文胜卜慧莲高峰
- 关键词：小干扰RNA慢病毒载体基因沉默
- 补体在慢性神经性疼痛中的作用研究进展被引量：1
- 2012年
- 慢性疼痛是指疼痛持续超过一种急性疾病的一般病程或超过损伤愈合所需的一般时间,或疼痛复发持续超过1个月。神经元、神经胶质细胞、免疫细胞等多种机制参与其中。补体是慢性疼痛发生和维持的一个新研究点。神经系统中多种细胞可以表达补体成分和补体受体。在多种慢性神经痛模型中,补体mRNA和蛋白质表达发生变化,并且阻断补体激活可以逆转痛觉敏感。激活的补体可以通过氧化应激损伤、与细胞因子相互作用及形成膜攻击复合物参与疼痛信号的转导。
- 何文胜李彩娟田玉科
- 关键词：慢性疼痛补体补体抑制剂氧化应激
