彭云云
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 供职机构：安徽医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金安徽省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- pEGFP-C2-NLRC5重组质粒的构建及其表达被引量：2
- 2014年
- 目的构建含NLRC5蛋白功能区的cDNA序列的真核表达载体pEGFP-C2-NLRC5,并检测其在肾成纤维细胞(COS-7)中的表达。方法采用RT-PCR法从人肝星状细胞(LX-2)中获得NLRC5蛋白功能区的cDNA序列片段,用EcoRⅠ和BamHⅠ双切酶将片段和载体pEGFP-C2双酶切后,酶切产物加入T4连接酶16℃连接过夜,构建真核表达载体pEGFP-C2-NLRC5。将构建成功的pEGFP-C2-NLRC5重组质粒经PCR,限制性内切酶酶切和测序鉴定后用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将其转染至COS-7细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,Western blot法鉴定融合蛋白表达。结果阳性克隆经双酶切法鉴定可见NLRC5基因片段。转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达,而且主要分布在细胞质中,Western blot法也可检测到在74 ku处有一明显条带,其大小符合EGFP-NLRC5表达的蛋白(NLRC5蛋白大小约为47 ku,EGFP蛋白大小约为27 ku),表明融合蛋白可在哺乳动物细胞中成功表达。结论成功构建pEGFP-C2-NLRC5质粒,NLRC5蛋白可在COS-7细胞中成功表达。
- 徐涛彭云云李琳黄成张磊金涌吕雄文李俊
- 关键词：COS-7基因表达重组质粒转染
- 鼠源pEGFP-C2-NLRC5重组质粒的构建及其表达被引量：1
- 2014年
- 目的构建鼠源pEGFP-C2-NLRC5表达质粒,并观察其在RAW264.7细胞中的表达。方法从小鼠巨噬细胞RAW264.7中获得NLRC5基因的cDNA,用EcoRⅠ和BamHⅠ限制性内切酶双酶切后连接至pEGFP-C2载体上。表达载体经PCR、限制性内切酶酶切和DNA序列分析正确后转染至小鼠巨噬细胞RAW264.7中,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,RT-PCR法鉴定其转录,Western blot法分析其蛋白表达。结果进行双酶切鉴定该质粒可见NLRC5DNA片段,转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR法可检测到NLRC5基因的转录,Western blot法可检测到NLRC5蛋白表达。结论成功构建重组pEGFP-C2-NLRC5表达载体,NLRC5蛋白可与绿色荧光蛋白在RAW264.7细胞中融合表达。
- 李琳彭云云黄成徐涛李俊
- 关键词：PEGFP-C2基因表达蛋白表达PEGFP-C2
- NLRC5靶向Wnt/β-catenin信号通路调控肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的功能及机制研究
- 肝癌是全球第五大致死性癌症疾病，其发病率和死亡率已有逐渐上升趋势。近年来的研究发现肝脏的慢性炎症与肝癌的发生、进展及预后有密切联系。病毒、细菌等致病性病原微生物一旦入侵机体，将迅速启动机体天然免疫应答并触发炎症性反应。天...
- 彭云云
- 关键词：肝癌细胞增殖
- 文献传递
- pEGFP-C2-MeCP2重组质粒的构建和表达被引量：2
- 2014年
- 目的构建人类甲基化CpG结合蛋白(MeCP2)基因的真核表达载体pEGFP-C2-MeCP2,在非洲绿猴肾成纤维细胞(COS-7)中检测其表达及定位。方法从人肝癌细胞(HepG2)中获得cDNA,以其为模板扩增MeCP2全长编码基因,克隆到载体pEGFP-C2上。构建的重组质粒测序后转染至COS-7细胞中,荧光倒置显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,检测MeCP2蛋白定位,Western blot法和RT-PCR法鉴定MeCP2蛋白和基因表达。结果成功构建pEGFP-C2-MeCP2重组质粒,酶切鉴定片段为1 461 bp。MeCP2蛋白及基因表达水平明显增加。细胞定位实验结果显示MeCP2蛋白定位于胞核。结论成功构建重组质粒pEGFP-C2-MeCP2,该质粒的构建为进行MeCP2功能研究提供了依据。
- 彭云云黄成马陶陶徐涛李琳陈晨李俊
- 关键词：MECP2COS-7基因表达
