张芳
- 作品数：8 被引量：23H指数：2
- 供职机构：第三军医大学新桥医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 脂多糖致大鼠急性肺损伤肺组织中糖皮质激素受体的表达及活性变化被引量：2
- 2005年
- 目的探讨脂多糖致大鼠急性肺损伤24h内肺组织糖皮质激素受体(GR)表达及活性变化的特点。方法将70只Wistar大鼠随机分为脂多糖致伤组和地塞米松治疗组,采用RT PCR和Westernblot在mRNA水平和蛋白质水平测定致伤组肺组织GR,EMSA法测定肺组织GR活性。结果大鼠肺组织GRmRNA在致伤后表达下调,24h恢复至正常水平;肺组织GR蛋白质表达降低,伤后8h降至最低;肺组织GR活性在伤后1h降到最低,24h仍未恢复至正常水平。地塞米松治疗组在治疗后期不能有效维持GR活性。结论大鼠急性肺损伤肺组织GR蛋白表达降低,可能与mRNA表达降低及蛋白降解加速有关;GR活性被显著抑制,出现糖皮质激素抵抗。
- 张芳钱桂生汪晓莉吴学玲雷撼
- 关键词：急性肺损伤脂多糖类
- RNA干扰技术抑制糖皮质激素受体在大鼠肺泡巨噬细胞表达及活性的研究被引量：1
- 2005年
- 目的利用RNA干扰技术,建立糖皮质激素受体(glucocorticoidreceptor,GR)基因阻断的大鼠肺泡巨噬细胞模型。方法构建2个针对GR的RNAi表达载体,分别命名为psilencer3.1GR1和psilencer3.1GR2,经测序确认后,转染大鼠肺泡巨噬细胞。RT PCR、WesternBlot分别检测GRmRNA水平和蛋白水平表达变化;相对荧光素酶活性法检测GR转录激活功能的变化。结果经测序证实:成功构建2个针对GR的RNAi表达载体(psilencer3.1GR1和2);转染psilencer3.1GR2可明显降低细胞内GRmRNA的丰度及GR蛋白表达,细胞GR转录激活活性明显降低;转染psilencer3.1GR1与对照组相比无显著变化。结论成功地构建并筛选出一个特异而高效地阻断GR表达及功能的质粒表达载体,为进一步研究糖皮质激素受体的功能提供新方法。
- 张芳钱桂生钱频陈维中苏踊跃
- 关键词：糖皮质激素受体肺泡巨噬细胞RNA干扰
- 大鼠糖皮质激素受体变异体cDNA序列克隆和表达及功能研究被引量：2
- 2005年
- 目的 :构建大鼠糖皮质激素受体变异体表达载体 ,研究其表达和功能。方法 :运用RT -nestedPCR扩增糖皮质激素受体不含有编码LBD结构域的cDNA序列 ,将PCR产物定向克隆至pEGFP -N2质粒载体 ,测序筛选重组质粒 ;荧光显微镜观察重组质粒转染后的表达情况 ;相对荧光素酶法检测转录激活活性。结果 :扩增出长 16 12bp的cDNA序列 ,测序证实 :克隆片段与Genebank该基因序列同源性为 10 0 % ;重组质粒表达产物定位于细胞核 ;转染组细胞转录激活活性增强。结论 :成功构建糖皮质激素受体变异体的表达载体 ,该变异体具有不依赖激素的转录激活活性。
- 张芳钱桂生钱频陈龙李树钧陈维中
- 关键词：糖皮质激素受体LBD转录激活活性
- 糖皮质激素诱导血管内皮细胞Ⅰ型11β羟基类固醇脱氢酶基因表达的意义被引量：3
- 2005年
- 王兴友钱桂生张芳黄桂君
- 关键词：血管内皮细胞类固醇脱氢酶激素诱导体内炎症
- 一氧化氮调节脂多糖致炎大鼠肺泡巨噬细胞糖皮质激素受体功能的研究
- 2005年
- 目的 研究肺泡巨噬细胞在脂多糖(LPS)作用条件下一氧化氮供体(SNP)对糖皮质激素受体(GR)功能的调节作用。方法 将GR荧光表达质粒pGFP GR转染大鼠肺泡巨噬细胞,经LPS和SNP作用后,荧光显微镜观察质粒表达产物GFP GR核移位情况;相对荧光素酶法检测GR转录激活活性;EMSA检测检测细胞NF κB活性。结果 5 0 0 μmol LSNP作用2h出现GFP GR核移位,同时GR转录激活活性显著增强,NF κB活性被显著抑制。运用GR特异性拮抗剂RU486后,NF κB活性抑制现象消失。结论 肺泡巨噬细胞在致炎因子作用条件下,一氧化氮供体(5 0 0 μmol LSNP )通过活化GR发挥抗炎活性。
- 钱频张芳钱桂生陈维中
- 关键词：一氧化氮供体糖皮质激素受体转录激活活性
- RNA干扰技术对人U937巨噬细胞株糖皮质激素受体表达及功能的抑制效应
- 2005年
- 目的 利用载体介导的RNA干扰技术,建立糖皮质激素受体(GR)基因阻断的人U93 7巨噬细胞株模型。方法 构建两个针对GR的RNAi重组表达载体,分别命名为pSilencer 3 1 GR1和pSilencer 3 1 GR2 ,经测序确认后,转染人U93 7巨噬细胞株。RT PCR、Westernblot分别检测糖皮质激素受体mRNA水平和蛋白水平表达变化;相对荧光素酶活性法检测地塞米松作用后GR转录激活功能的变化。结果 经测序证实:成功构建两个针对GR的RNAi表达载体(pSilencer3 1 GR1和pSilencer 3 .1 GR2 ) ;转染pSilencer 3 .1 GR2 可明显降低细胞内GRmRNA的丰度及GR蛋白表达,细胞内GR转录激活功能明显降低;转染pSilencer 3 .1 GR1与对照组相比无显著变化。结论 成功地构建并筛选出一个高效且特异阻断GR表达及功能的RNAi质粒表达载体,为进一步研究糖皮质激素受体的功能提供新方法。
- 张芳钱桂生陈维中苏踊跃
- 关键词：糖皮质激素受体RNA干扰
- 一种肺癌新耐药基因的反义基因抑制Bcl-2基因在人耐药小细胞肺癌细胞表达的研究被引量：2
- 2008年
- 目的通过构建一种肺癌新耐药相关基因的反义基因,抑制该基因在人耐药小细胞肺癌H466/CDDP细胞中的表达,进一步研究新耐药相关基因的功能和调控。方法构建该新耐药相关基因的反义基因逆转录病毒载体,通过RT-PCR检验转染新耐药相关基因的反义基因或空载体的人耐药小细胞肺癌H466/CDDP细胞中该基因mRNA的表达,使用MTT方法检测人耐药小细胞肺癌H466/CDDP细胞对化疗药物的敏感性。采用免疫组织化学方法研究人耐药小细胞肺癌抗凋亡基因Bcl-2的表达。结果成功构建新耐药相关基因的反义基因逆转录病毒载体。药物敏感性检测显示,与空载体组相比,转染新耐药相关基因反义基因的耐药小细胞肺癌细胞H446/CDDP对部分化疗药物的敏感性增强,差异显著(P<0.01)。免疫组织化学方法显示转染新耐药相关基因反义基因的耐药小细胞肺癌细胞H446/CDDP抗凋亡基因Bcl-2的表达,与空载体组相比明显减弱(P<0.01)。结论新耐药相关基因是与CDDP致人耐药小细胞肺癌H466/CDDP细胞耐药密切相关的一条新基因。该新耐药相关基因的反义基因能够抑制抗凋亡基因Bcl-2的表达,可能在肺癌MDR发生中的起着重要作用。
- 李树钧钱桂生王关嵩戢福云周向东张芳冯起甲
- 关键词：肺癌BCL-2基因
- 脂多糖作用大鼠肺泡巨噬细胞糖皮质激素受体表达及活性变化被引量：15
- 2004年
- 目的 探讨脂多糖作用大鼠肺泡巨噬细胞 2 4h内 ,糖皮质激素受体表达及活性变化特点。方法 将原代培养的大鼠肺泡巨噬细胞分为脂多糖致伤组和地塞米松治疗组 ,采用RT PCR和WesternBlot在mRNA水平和蛋白质水平测定肺泡巨噬细胞糖皮质激素受体 ;EMSA测定肺泡巨噬细胞核蛋白中糖皮质激素受体活性。结果 脂多糖作用后 ,糖皮质激素受体mRNA表达下调 ,2 4h恢复正常水平 ;糖皮质激素受体蛋白质表达降低 ,4h降至最低 ,2 4h维持在低水平表达 ;糖皮质激素受体活性在 1h降到最低 ,2 4h未恢复至正常水平。地塞米松治疗组在治疗后期不能有效维持糖皮质激素受体活性。结论 脂多糖 ( 10 0ng ml)作用大鼠肺泡巨噬细胞后 ,糖皮质激素受体蛋白表达降低 ,可能与mRNA表达降低及蛋白降解加速有关 ;糖皮质激素受体活性被显著抑制 ,出现糖皮质激素抵抗。
- 钱频张芳钱桂生陈维中
- 关键词：肺泡巨噬细胞脂多糖糖皮质激素受体糖皮质激素抵抗
