夏万尧
- 作品数：51 被引量：436H指数：13
- 供职机构：上海交通大学医学院附属第九人民医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金上海市科委重大科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HTGF-β1基因转染脂肪干细胞及其表达被引量：2
- 2011年
- 目的探讨携带人转化生长因子β1(hTGF-β1)的腺病毒载体(adeno-hTGF-β1)转染人脂肪干细胞(ADSCs)及其表达的可行性。方法重组adeno-hTGF-β1经293细胞包装、扩增后,转染人ADSCs。转染72h后,RT-PCR检测重组腺病毒转染后ADSCs的hTGF-β1 mRNA表达,免疫细胞化学染色定性和酶联免疫吸附(ELASA)定量测定hTGF-β1蛋白的表达。结果转染后72h,ADSCs能有效表达hTGF-β1 mRNA,免疫细胞化学证实重组腺病毒转染后ADSCs胞浆内有大量棕黄色的hTGF-β1蛋白表达,ELISA结果提示其hTGF-βl表达量是转染Adeno-lacZ的3.85倍(<0.05)。结论重组腺病毒adeno-hTGF-β1能够被导入ADSCs并表达hTGF-β1蛋白,为hTGF-β1基因转染的ADSCs在软骨组织工程应用中奠定了基础。
- 夏万尧孙恒赟陈瑾君刘伟周广东曹谊林
- 关键词：脂肪干细胞基因转染腺病毒转化生长因子Β1
- 组织工程化软骨组织形成的最佳细胞浓度和最佳形成时间的实验研究被引量：71
- 1999年
- 目的研究探讨自体组织工程化软骨在动物自体内形成的最佳细胞浓度和最佳形成时间。方法取贵州香猪部分耳廓软骨组织体外消化分离软骨细胞，与可注射性生物材料Ｐｌｕｒｏｎｉｃ混合形成复合物，浓度为１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０×１０６／ｍｌ，将细胞－生物材料复合物接种于猪自体腹外侧壁皮下。第６周取材，分别称重，并作ＨＥ、ＳａｆｒａｎｉｎＯ染色，评价软骨组织形成的最适细胞浓度。参考上述实验结果，制成最适软骨细胞－生物材料复合物，接种到猪自体腹外侧壁皮下，分别在接种后第１、３、６、９和１５周取材，大体观察，并作ＨＥ、ＳａｆｒａｎｉｎＯ染色，确定软骨组织形成的最佳时间。结果在动物自体内形成的软骨组织，与正常软骨组织有相似的组织学特性，形成软骨组织最适细胞浓度为５０×１０６／ｍｌ，最佳形成时间是第６周。结论成功地利用组织工程技术在具有免疫功能的自体动物体内形成了软骨组织，并确定了软骨组织形成的最佳细胞接种浓度和接种的软骨组织形成最佳时限。
- 夏万尧曹谊林商庆新陈付国陈付国刘彦春
- 关键词：软骨细胞软骨细胞
- 胰岛素样生长因子1受体抗体对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响被引量：5
- 2006年
- 目的观察胰岛素样生长因子1受体抗体对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响。方法球囊导管损伤大鼠一侧颈总动脉,7天后体外培养受损血管的中膜平滑肌细胞,以损伤侧血管细胞为实验组,以对侧正常血管中膜平滑肌细胞为对照组;采用-αactin免疫细胞化学法进行细胞鉴定;在细胞的培养悬液中加入不同浓度的胰岛素样生长因子1受体抗体作用24 h,然后采用5-溴-2脱氧尿苷细胞增殖检测法检测细胞的增殖程度。结果大鼠颈总动脉球囊损伤后,体外培养的中膜平滑肌细胞表现出显著的增殖性(与对照组比较,P<0.01);胰岛素样生长因子1受体抗体可以显著抑制大鼠平滑肌细胞的增殖,呈现出浓度依赖性特征(组间比较,P<0.01)。结论胰岛素样生长因子1受体抗体具有抑制平滑肌细胞增殖的作用,有望用于治疗平滑肌细胞增殖性疾病。
- 苏海霞盛净刘德莉夏万尧成静陈朝婷
- 关键词：内科学免疫细胞化学大鼠颈总动脉再狭窄
- 重组hTGF-β1基因转染的BMSCs在体内成软骨能力的初步研究被引量：5
- 2010年
- 目的重组hTGF-β1腺病毒(adeno-hTGF-β1)转染的BMSCs在体内成软骨能力的初步研究,探讨其作为组织工程化软骨的种子细胞的可行性。方法重组adeno-hTGF-β1转染猪BMSCs,酶联免疫吸附定量检测(ELISA法)重组腺病毒转染hTGF-β1蛋白的表达。然后消化收集重组腺病毒转染后的BMSCs,均匀接种于圆盘状PGA支架上,对照组转染adeno-LacZ,然后植入裸鼠背部皮下,在植入后第3周取材,分别行大体观察、组织学、II型胶原免疫组化和蛋白聚糖含量检测对形成组织进行评价。结果 ELISA结果显示adeno-hTGF-β1转染的BMSCs,其hTGF-β1表达量是转染adeno-lacZ 的BMSCs 2.65倍( P<0.05)。植入裸鼠体内后3周取材,实验组HE染色观察可见有软骨形成,但较不均匀,并被纤维组织分割,形成的软骨组织区域可见软骨细胞包埋在软骨陷窝内;对照组可见仅有少量软骨形成,被大量的纤维组织和未降解的PGA支架包裹,实验组和对照组形成软骨占总组织百分比,分别为(41.83±4.64)%和(17.50±2.85)%,P<0.05。Safranin’O染色显示,实验组形成的软骨组织区域都有被染成桔红色蛋白多糖类基质分泌,着色比对照组更深。实验组形成的软骨组织区域有大量棕黄色的II型胶原颗粒,而对照组仅有少量的棕黄色的II型胶原颗粒,实验组形成的软骨组织中的蛋白聚糖含量多于正常猪耳软骨。结论重组hTGF-β1腺病毒转染BMSCs作为种子细胞,在裸鼠体内能促使软骨组织形成,从而为hTGF-β1基因转染的BMSCs在软骨组织工程应用中奠定了基础。
- 夏万尧王毅敏刘伟丁文龙钟梅芳周广东崔磊曹谊林
- 关键词：骨髓间充质干细胞基因转染腺病毒转化生长因子Β1
- 组织工程技术修复软骨、肌腱缺损的实验研究
- 曹谊林商庆新刘伟崔磊刘彦春刘永涛刘德莉夏万尧吴娟娟
- 该项研究结合以往在免疫功能缺陷的裸鼠体内构建组织工程化软骨、肌腱的研究基础，应用组织工程技术，在具有完全免疫功能的自体哺乳动物体内构建组织工程化软骨与肌腱组织；应用组织工程化软骨与肌腱，在自体动物体内，模拟甚至超出临床组...
- 关键词：
- 关键词：修复术动物实验
- 同种异体组织工程化软骨组织的免疫学差异被引量：13
- 2001年
- 王健夏万尧崔磊曹谊林商庆新
- 关键词：软骨损伤
- 重组hTGF-β1腺病毒转染BMSCs及对其增殖的影响被引量：4
- 2009年
- 目的探讨携带人转化生长因子β1(hTGF-β1)的腺病毒载体(adeno-hTGF-β1)转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)表达及对其增殖的影响。方法重组adeno-hTGF-β1转染猪BMSCs,转染72h后以酶联免疫吸附分析(ELISA)方法定量检测重组腺病毒转染后hTGF-β1蛋白的表达,MTT法测定水貂肺上皮细胞(MV-1-Lu)的生长抑制率,验证转染后所表达的hTGF-β1蛋白的生物学活性,及MTT法检测转染后对BMSCs增殖的影响。结果转染72h,BMSCs表达hTGF-β1蛋白量是转染Adeno-lacZ的BMSCs2.65倍(P<0.05);MV-1-Lu细胞生长抑制率测定显示BMSCs分泌的hTGF-β1蛋白有生物学活性,MTT法检测结果提示adeno-hTGF-β1转染BMSCs的增殖能力较对照组弱。结论转染重组adeno-hTGF-β1的BMSCs表达有生物学活性的hTGF-β1蛋白,hTGF-β1蛋白对BMSCs的增殖有一定的抑制作用。
- 夏万尧丁文龙刘伟钟梅芳周广东崔磊曹谊林
- 关键词：增殖腺病毒转化生长因子Β1
- 重组hBMP7基因转染成纤维细胞及其表达被引量：1
- 2004年
- 目的 探讨重组骨形态发生蛋白-7腺病毒载体(AdCMV-BMP7)在人真皮成纤维细胞获得稳定表达的可行性。方法重组腺病毒载体AdCMV-BMP7经293细胞包装、扩增后,转染人真皮成纤维细胞。转染48 h后以免疫组织化学、RT-PCR等方法检测hBMP7基因在人真皮成纤维细胞内的表达情况。结果 在合适的滴度下,重组腺病毒载体AdCMV-BMP7对成纤维细胞的增殖能力无明显影响。转染48 h后免疫细胞化学显示已转染AdCMV-BMP7的成纤维细胞内有大量的hBMP7表达,RT-PCR也检测到特异的hBMP7基因片段的表达。结论 重组腺病毒载体AdCMV-BMP7能够被转导入成纤维细胞内,并稳定表达hBMP7。
- 陈付国祝联刘德莉魏娴刘天一王敏柴岗王晓云周广东夏万尧崔磊刘伟曹谊林
- 关键词：骨形态发生蛋白-7腺病毒转基因技术成纤维细胞RT-PCR
- 携带人TGF-β_1腺病毒载体的构建及鉴定被引量：5
- 2006年
- 目的构建携带人转化生长因子β1(hTGF-β1)的腺病毒载体(Adeno-hTGF-β1),为hTGF-β1基因转染骨髓间质干细胞(BMSCs)的研究奠定基础。方法应用基因重组技术构建hTGF-β1腺病毒表达载体,分别用限制性内切酶酶切和聚合酶链反应(PCR)鉴定,并通过脂质体Fugene 6介导腺病毒DNA转染293细胞。结果重组hTGF-β1腺病毒DNA经限制性内切酶XhoⅠ酶切后,得到14.5、8.1、4.2、4.0、2.5、1.4、0.6 kb片段。与空白腺病毒相比,5.6 kb的片段已被置换成4.2 kb和4.0 kb片段;经PI-SceⅠ/I-CeuⅠ双酶切后,得到32.6 kb和2.6 kb含目的基因片段,片段大小无误,表明重组Adeno-hTGF-β1腺病毒表达系统构建成功。以重组Adeno-hTGF-β1DNA为模板的PCR产物中出现1.35 kb hTGF-β1目的基因片段,表明hTGF-β1基因成功连接至adeno-X腺病毒表达载体中。重组hTGF-β1腺病毒表达载体通过Fugene 6介导转染293包装细胞出现细胞病变效应(CPE)。采用PCR反应鉴定293细胞包装的腺病毒,证实扩增出247 bp的hTGF-β1目的基因片断和312 bp的腺病毒骨架基因片断。结论携带人hTGF-β1的腺病毒载体的构建成功,并能在293细胞包装,为hTGF-β1基因转染的BMSCs在软骨组织工程中的应用奠定了基础。
- 夏万尧刘伟王丹茹丁文龙钟梅芳刘德莉周广东崔磊曹谊林
- 关键词：基因重组腺病毒转化生长因子Β1
- 利用组织工程技术再生软骨组织的实验研究被引量：16
- 1999年
- 目的在有免疫力的动物体兔体内探索组织工程化软骨生成的影响因素。方法经不同物质修饰的聚羟基乙酸支架与软骨细胞体外培养，观察基质产生情况，并将细胞支架复合物体内回植，观察软骨的生成，并进行组织学及超微结构评价。结果以卵磷脂、多聚赖氨酸及聚乳酸共同修饰的聚羟基乙酸与软骨细胞体外培养，结果基质产生旺盛，体内回植后软骨生成良好。结论细胞支架复合物体外培养期间有基质产生，是组织工程化软骨生成的前提条件；以卵磷脂。
- 刘彦春王炜曹谊林商庆新夏万尧钟伟
- 关键词：软骨组织软骨细胞体外培养
