周欠欠 作品数:10 被引量:11 H指数:2 供职机构: 军事医学科学院野战输血研究所 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家科技重大专项 北京市自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 一般工业技术 更多>>
血小板低下对树突状细胞在体迁移与归巢模式的影响研究 2017年 目的:探讨血小板低下对过继性树突状细胞(DC)在体内迁移模式的影响。方法:腹腔注射抗CD41单克隆抗体以建立血小板低下小鼠模型。将带报告基因的骨髓来源DC经脚垫和静脉两种途径输注至血小板低下和正常小鼠体内,用活体成像技术监测DC在小鼠体内的迁移和组织内分布情况。结果:经抗GPⅡb抗体处理组小鼠体内80%以上血小板被清除。DC经脚垫回输72 h后,在血小板低下组迁移到腘窝淋巴结(PLN)和腹股沟淋巴结(ILN)的比例分别为(0.32±0.02)%和(0.02±0.01)%;对照组上述两部位内为(0.27±0.15)%和(0.02±0.02)%。两组之间无统计学差异(P>0.05)。经静脉输注DC 72 h后,血小板低下组和对照组小鼠组织内的分布均主要集中在脾脏、肝脏引流淋巴结、肺脏和肝脏等,且分布比例无统计学差异。结论:小鼠体内血小板低下至不足20%时,对经皮下和静脉两种途径输注的DC在体内迁移和组织分布无明显影响。 赵嫚 周欠欠 张玉龙 马聪 何楚琳 王小慧 詹林盛关键词:血小板低下 树突状细胞 迁移 Ex vivo programming of NanoAu-promoted Smart DCs and its in vivo trafficking and homing monitored by bioluminescence imaging <正>Objective Ex vivo engineering of antigens and vaccine adjuvant to enhance DCs''''antigen swallow and presen... 周欠欠 王小慧 詹林盛文献传递 报告基因标记的可视化HBV小鼠模型的建立及其应用 目的建立HBV转录调控序列介导荧光素酶表达及荧光素酶标记的HBV全基因组表达小鼠模型,通过活体荧光成像实时监测HBV的表达,为开展肝细胞特异性转录因子、细胞因子以及结合蛋白等因素在模型动物体内对HBV增强子/启动子活性调... 詹林盛 杜娟 周勇 周欠欠细胞治疗的光学分子影像学临床前研究 研究背景:由于技术限制,目前有关肿瘤细胞治疗研究更多关注于疗效的观察,而对于外源输注的细胞是否有效归巢于病灶或目标脏器和淋巴器官,以及是否可实现与其所调控下游细胞共定位,这其中又有哪些趋化因子或细胞因子参与了过继性输注细... 周欠欠 王小慧 詹林盛关键词:细胞治疗 文献传递 一种可提高过继性树突状细胞功能化过程的促进剂及其制备方法与应用 本发明公开了一种可提高过继性树突状细胞功能化过程的促进剂及其制备方法与应用,该促进剂的主要成分包括用免疫刺激剂和抗原分别修饰金纳米粒子得到的免疫刺激剂‑纳米金复合物和抗原‑纳米金复合物;或主要成分包括用免疫刺激剂和抗原联... 王小慧 周欠欠 詹林盛 张玉龙文献传递 高压水动力法建立肝特异性白细胞介素-6报告基因小鼠模型 被引量:1 2017年 目的建立一种可实时、无创、特异监测肝白细胞介素-6(IL-6)瞬时表达的小鼠模型。方法通过水动力高压转染法将IL-6启动子启动的萤火虫荧光素酶(Fluc)报告基因载体定向转染至小鼠肝,采用活体生物发光成像检测炎症刺激条件下肝Fluc的表达情况,并考察发光强度与肝IL-6表达的相关关系。结果高压水动力法成功将p IL-6-Fluc报告基因递送至小鼠肝,约使20%肝实质细胞表达目的基因。该法可造成一过性肝损伤但可在5~7 d恢复正常。p IL-6-Fluc可被脂多糖(LPS)激活,峰值时可上升(46.80±13.35)倍,远高于ELISA检测结果[(4.09±0.96)倍]。结论通过尾静脉水动力高压转染法可将p IL-6-Fluc特异性地递送至小鼠肝进而建立活体成像法检测小鼠肝IL-6瞬时表达模型;经验证,该模型可特异性地反映IL-6激活情况,且其灵敏度高于经典的ELISA方法。 马聪 张玉龙 周欠欠 赵嫚 王小慧 江新泉 詹林盛关键词:基因转染 白细胞介素-6 肝脏炎症 腺病毒转染法构建表达乙型肝炎病毒核心蛋白小鼠肝癌细胞系及其在乙肝疫苗评价中的应用 被引量:8 2013年 目的构建一种可高效表达乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)核心蛋白(HBc)C57BL/6小鼠来源肝癌细胞系,并以其作为靶细胞评价乙肝基因疫苗在C57BL/6小鼠体内所引起的HBe特异性细胞毒性T细胞(CTL)的活性。方法以HBV全基因组为模板,采用PCR方法扩增HBe基因,插入AdEasy腺病毒穿梭载体,构建携带HBe蛋白的腺病毒穿梭载体AD—HBe,电转携带有腺病毒骨架质粒(Ad—Easy)的EcoliBJ5183感受态细胞,获得重组腺病毒质粒AD-CMV.HBc,经Pme,线性化处理后转染HEK293细胞进行包装得到相关的重组腺病毒,再感染C57BL/6小鼠来源肝癌细胞系Hepal-6。结果成功构建表达HBc蛋白的重组腺病毒,在体外对Hepal一6细胞的感染率几乎为100%,并且HBc蛋白得到高效表达。以此为靶细胞用于pVAX1-HBe基因疫苗免疫C57BL/6小鼠产生的CTL活性的体外检测。结论我们成功构建HBe蛋白表达的靶细胞系,对研究乙肝病毒核心抗原(HBcAg)所引起的细胞免疫反应及乙肝发病机理等方面有重要意义。 苑振楠 周欠欠 闫虎 杜娟 詹林盛 吴德全关键词:重组腺病毒 双荧光素酶标记丙型肝炎病毒亚基因组复制子细胞模型的建立 被引量:2 2013年 目的构建双荧光素酶标记丙型肝炎病毒(HCV)亚基因组复制子细胞模型,为HCV研究提供有效工具。方法通过单克隆筛选及慢病毒感染构建双荧光素酶标记的HCV亚基因组复制子细胞模型(HCV Fluc-UbiGluc)。利用荧光素酶检测、Western印迹检测鉴定细胞模型,利用IFN-α对HCV抗病毒效果评价验证细胞模型的有效性。结果筛选所得HCV亚基因组细胞克隆检测到荧光素酶活性,Western印迹检测到HCV NS5A蛋白表达。NS3/4A对黄色荧光蛋白(YFP)标记的MAVS(YFP-MAVS)切割作用使亚细胞定位发生转移。IFN-α处理后荧光素酶活性、HCV蛋白表达水平明显降低。结论该模型采用萤火虫荧光素酶报告基因指示HCV亚基因组在细胞内的复制水平,Gaussia荧光素酶指示细胞的生长数量,能准确反映候选药物对HCV复制水平的影响,并有效排除药物的细胞毒性干扰,具有操作简单、快速等优点,在抗病毒药物高通量筛选、HCV致病机制等研究方面具有一定的价值。 彭剑淳 高博 王怡 付秋霞 樊炜 周欠欠 贾帅争 詹林盛关键词:丙型肝炎病毒 细胞模型 复制子 一种可提高过继性树突状细胞功能化过程的促进剂及其制备方法与应用 本发明公开了一种可提高过继性树突状细胞功能化过程的促进剂及其制备方法与应用,该促进剂的主要成分包括用免疫刺激剂和抗原分别修饰金纳米粒子得到的免疫刺激剂-纳米金复合物和抗原-纳米金复合物;或主要成分包括用免疫刺激剂和抗原联... 詹林盛 王小慧 周欠欠 张玉龙雷帕霉素诱导耐受性树突状细胞抑制急性移植物抗宿主病的动物实验 2018年 目的探讨雷帕霉素(RAPA)诱导过继性输注的耐受性树突状细胞(DCs)对急性移植物抗宿主病(a GVHD)的治疗效果。方法分离15只BALB/C雄性小鼠(MHC为H-2Kd)的骨髓细胞及脾细胞,输注入经8.5Gy辐射处理(TBI照射)的30只雄性C57BL/6J小鼠(MHC为H-2Kb)中建立a GVHD模型(BALB/C→C57BL/6J);为验证a GVHD造模是否成功,将C57BL/6J小鼠分为MHC不合移植组、MHC相合移植组及单纯TBI照射组(10只/组),3组小鼠经8.5 Gy TBI照射后分别输入BALB/C来源骨髓细胞及脾细胞、C57BL/6J来源骨髓细胞及脾细胞及同等体积PBS对照,采用流式细胞术检测供鼠植入比例并观察受鼠存活情况。体外培养受鼠骨髓来源DCs,加入RAPA以诱导耐受性DCs(RAPA-t DCs),加入PBS作为对照DCs(PBS-DCs)。将a GVHD模型鼠随机分为3组(10只/组),分别是RAPA-t DCs实验组(静脉输注RAPA-t DCs 4!106/只)、PBS-DCs对照组(静脉输注PBS-DCs 4!106/只)及PBS对照组(静脉输注PBS);采用活体荧光成像观察DCs在a GVHD小鼠体内的迁移、分布情况;同时监测3组小鼠的平均体重波动并统计生存率,评价RAPA-t DCs对小鼠a GVHD的抑制效果。结果流式细胞术检测:与PBS-DCs组小鼠比较,RAPA-t DCs组小鼠DCs表面的CD40、CD80、CD86和MHCII表达丰度明显受到抑制(P〈0.05);2组小鼠DCs表面趋化因子受体CCR1平均荧光强度(MFI)为14.5±1.4 vs.10.0±2.1,表面趋化因子受体CCR5为12.7±2.3 vs 7.2±1.2(P〈0.05),表面趋化因子受体CCR7为7.8±1.3 vs.6.2±2.5(P〉0.05)。活体成像分析:RAPA处理不影响DCs在体迁移能力,RAPA-t DCs仍可归巢至淋巴结、脾脏等淋巴组织或器官。PBS-DCs组和RAPA-t DCs组a GVHD小鼠在移植后19 d体重(g)下降-2.4±1.5 vs-1.9±1.2(P〈0.05),生存期(d)延长10.1±5.5 vs 16.6±6.7(P〈0.05),但各组小鼠最终均全部死亡,整体生存率无差异。结论 RAPA可通过抑制小鼠DCs表面共刺激分子的 何楚琳 周欠欠 张玉龙 赵嫚 马聪 王政军 詹林盛 王小慧关键词:急性移植物抗宿主病 雷帕霉素 树突状细胞 归巢