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吕闯: 作品数：10 被引量：37H指数：4; 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>; 发文基金：哈尔滨市科技攻关计划项目中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家科技支撑计划更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

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一株3型牛腺病毒的分离与鉴定被引量：9: 2011年; 本研究于2009年由患急性呼吸道疾病牛的鼻拭子中分离获得一株病毒,经形态特征、血清学试验及PCR鉴定表明,该病毒与牛腺病毒3型(BAV-3)相似。对其E2A基因进行序列测定,并与GenBank中登录的BAV1型、3型、4型及人、绵羊、鼠等其它种属来源的腺病毒E2A基因序列进行比对及系统进化分析,结果显示该分离株与BAV-3的同源性为95.5%。经MEGA4软件分析,分离株与BAV-3验证值为100,表明其为BAV-3,并命名为BAV-3HLJ0955株。对该分离株热敏感试验表明,BAV-3 HLJ0955在56℃ 30min可被完全灭活,属于BAV第一群。这是国内首次分离获得BAV-3的报道。; 于作朱远茂蔡红高欲燃董秀梅吕闯薛飞

表达FMDV Asia 1 VP1基因重组BHV-1的构建: 构建表达FMDV Asial(Asial IND 49197)VP1重组BHV-1，首先人工合VP1全基因并引入限制性内切酶Xab I和Kpn I，通过酶切连接等生物学方法用VP1基因替换本实验室前期构建好的转移栽体DG...; 朱远茂高欲燃于作董秀梅吕闯薛飞

牛呼吸道合胞体病毒核蛋白的表达及其单克隆抗体的制备被引量：4: 2012年; 利用牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)接种牛肺细胞(BL),提取病毒RNA。通过RT-PCR扩增BRSV的核蛋白基因,然后定向克隆到原核表达载体pET30a,获得重组表达质粒pET30a-N。将重组质粒转化表达菌BL21(DE3),经增菌培养和IPTG诱导以及SDS-PAGE和Western blot分析,成功表达出了核蛋白(N),其分子量约为49kDa。为制备BRSV核蛋白的单克隆抗体,用纯化的重组核蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞融合。采用以BRSV为检测抗原的间接ELISA筛选阳性细胞克隆,经3次克隆纯化后获得2株稳定分泌抗N特异性MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为2D12与4B10。用2D12与4B10杂交瘤细胞株接种BALB/c小鼠制备腹水,采用rN及BRSV包被的ELISA测得的效价分别是1×105和1×106及1×102和1×103。间接ELISA、Western blot、IFA试验表明两株杂交瘤细胞所分泌的MAb具有良好的反应性和特异性。经抗体亚类鉴定D12与4B10均为IgG1/κ。特异性试验表明单抗2D12与4B10均不与牛副流感病毒3型和牛病毒性腹泻病毒反应。所制备的D12与4B10可用于建立检测BRSV病原及抗体的诊断方法。; 马磊朱远茂蔡红王姝史鸿飞吕闯董秀梅高欲燃薛飞

牛传染性鼻气管炎病毒gE蛋白单抗的制备及鉴定: 制备牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的特异性单克隆抗体(MAb)，本研究根据GenBank登录的IBRV gE基因序列设计一对特异性引物，扩增出长350 bp的gE基因片段，定向克隆到pET-32a(+)表达载体中，然后...; 于作朱远茂高欲燃董秀梅吕闯薛飞

牛病毒性腹泻病毒E2蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定被引量：3: 2013年; 为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)糖蛋白E2单克隆抗体(MAb),利用原核表达并且纯化的重组糖蛋白E2(rE2)免疫BALB/c小鼠,取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合。采用以BVDV为检测抗原的间接ELISA筛选阳性细胞克隆,经3次克隆纯化后获得2株稳定分泌抗E2特异性MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为4E3与1G11。用4E3与1G11杂交瘤细胞株接种BALB/c小鼠制备腹水,采用rE2及BVDV包被的ELISA测得的效价分别是6.21×106和6.83×105及6.83×105和7.5×104。间接ELISA、Western blot、IFA试验表明两株杂交瘤细胞所分泌的MAb具有良好的反应性和特异性。经抗体亚类鉴定4E3与1G11均为IgM/κ。特异性试验表明4E3与1G11这2株MAb均不与牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、牛腺病毒3型反应;其中4E3不与猪瘟病毒反应,而1G11则可与猪瘟病毒发生交叉反应,这种反应特性可试用于BVDV与猪瘟病毒的鉴别诊断。所制备的4E3与1G11 MAb可以用于BVDV抗原的检测,为建立检测BVDV E2蛋白血清抗体的ELISA奠定了基础。; 王姝朱远茂蔡红马磊史鸿飞吕闯董秀梅高欲燃薛飞; 关键词：牛病毒性腹泻病毒 E2 单克隆抗体 IGM

表达FMDV Asia 1 VP1基因重组BHV-1的构建: 为了构建表达FMDV Asia1(Asia1 IND 49197)VP1重组BHV-1,首先人工合VP1全基因并引入限制性内切酶XabⅠ和KpnⅠ,通过酶切连接等生物学方法用VP1基因替换本实验室前期构建好的转移载体pG...; 朱远茂高欲燃于作董秀梅吕闯薛飞; 关键词：口蹄疫病毒 VP1基因; 文献传递

牛传染性鼻气管炎病毒gE蛋白单抗的制备及鉴定: 为了制备牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的特异性单克隆抗体(MAb),本研究根据GenBank登录的IBRV gE基因序列设计一对特异性引物,扩增出长350 bp的gE基因片段,定向克隆到pET-32a(+)表达载体中,...; 于作朱远茂高欲燃董秀梅吕闯薛飞; 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 GE基因单克隆抗体

牛副流感病毒3型TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：14: 2014年; 根据牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)膜蛋白M基因设计引物及探针,以体外转录法制备的cDNA标准品为模板,建立了TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法,对其特异性、敏感性、重复性进行了测定,并对人工感染BPIV3的牛群临床样本进行了检测。结果显示,建立的TaqMan实时荧光定量RT-PCR的最低检测限为17.6copies/μL,同时进行批内、批间5次重复性试验,变异系数均小于2.5%。应用建立的方法检测牛传染性鼻气管炎病毒、牛腺病毒3型、牛呼吸道合胞体病毒、牛病毒性腹泻-黏膜病病毒1型,结果均为阴性,说明建立的方法特异性较强。用建立的方法检测人工感染BPIV3的犊牛鼻拭子样本,检测结果与样本TCID50的测定结果相符合,但比其更敏感。结果表明,本试验中建立的TaqMan实时荧光定量RT-PCR可以作为BPIV3早期诊断及定量分析的有效技术手段。; 董秀梅朱远茂蔡虹王姝吕闯马磊薛飞; 关键词：实时荧光定量RT-PCR TAQMAN探针

伪狂犬病病毒UL56蛋白与宿主蛋白Nedd4相互作用的研究被引量：3: 2019年; 伪狂犬病病毒(PRV)UL56蛋白(pUL56)属于Ⅱ型膜蛋白。近期研究结果表明PRVpUL56与PRV对啮齿动物的致病性相关。为揭示PRVpUL56与宿主相互作用的分子基础,本研究通过免疫共沉淀(Co-IP)试验确定了pUL56与神经前体细胞表达的发育下调蛋白4(Nedd4)存在相互作用。进一步,利用激光共聚焦试验确定过表达pUL56与Nedd4在转染HEK293T细胞的高尔基体存在共定位。通过互作,pUL56可以将细胞质分布的Nedd4重新定位于高尔基体。前期研究表明,含有WW结构域的宿主蛋白可以与含有PPxY(PY)基序的病毒蛋白互作。因此,本研究构建了pUL56PY基序丙氨酸突变体(PPxY/AAxY),利用Co-IP试验对pUL56突变体和Nedd4相互作用进行验证,结果表明随着pUL56PY基序突变的增加,蛋白互作能力逐渐减弱。此外,pUL56通过其PY基序显著下调Nedd4的表达。这些结果证实了PRVpUL56与Nedd4主要通过WW结构域/PY基序模式发挥相互作用,并下调Nedd4的表达。因此,本研究为阐明PRVpUL56与宿主相互作用的分子机制提供了参考依据。; 王书文吕闯蔡雪辉; 关键词：伪狂犬病病毒高尔基体

牛副流感病毒3型NP单抗的制备及初步应用被引量：9: 2011年; 为制备牛副流感病毒3型(BPIV3)核衣壳蛋白(NP)单克隆抗体(MAb),本研究利用原核表达并纯化的重组NP(rNP)免疫BALB/c小鼠,取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合。采用以BPIV3为检测抗原的间接ELISA方法筛选阳性细胞克隆,经3次克隆纯化后获得1株稳定分泌抗NP特异性MAb的杂交瘤细胞株(5E5)并制备腹水,采用rNP及BPIV3包被的ELISA效价分别是2×106和1.28×105。间接ELISA、western blot、IFA试验表明该MAb具有良好的反应性和特异性。经抗体亚类鉴定该MAb亚类为IgG1/κ。特异性试验表明该MAb不与牛传染性鼻气管炎病毒、牛病毒性腹泻病毒反应。免疫组化试验表明该MAb可以检测BPIV3感染动物体内的病原。该MAb还可用于建立检测BPIV3病原及抗体的诊断方法,同时为研究NP的结构和功能提供了条件。; 吕闯朱远茂董秀梅蔡红于作高欲燃薛飞; 关键词：核衣壳蛋白单克隆抗体特异性

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