高欲燃
- 作品数：18 被引量：65H指数：6
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家高技术研究发展计划哈尔滨市科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 一株3型牛腺病毒的分离与鉴定被引量：9
- 2011年
- 本研究于2009年由患急性呼吸道疾病牛的鼻拭子中分离获得一株病毒,经形态特征、血清学试验及PCR鉴定表明,该病毒与牛腺病毒3型(BAV-3)相似。对其E2A基因进行序列测定,并与GenBank中登录的BAV1型、3型、4型及人、绵羊、鼠等其它种属来源的腺病毒E2A基因序列进行比对及系统进化分析,结果显示该分离株与BAV-3的同源性为95.5%。经MEGA4软件分析,分离株与BAV-3验证值为100,表明其为BAV-3,并命名为BAV-3HLJ0955株。对该分离株热敏感试验表明,BAV-3 HLJ0955在56℃ 30min可被完全灭活,属于BAV第一群。这是国内首次分离获得BAV-3的报道。
- 于作朱远茂蔡红高欲燃董秀梅吕闯薛飞
- 牛病毒性腹泻病毒重组E2蛋白多克隆抗体制备及间接ELISA方法的建立与应用
- 牛病毒性腹泻//粘膜病/(Bovine viral diarrhea//mucosal disease, BVD//MD/)由牛病毒性腹泻病毒/(BVDV/)引起,可引起牛群临床和病理学症状,表现为繁殖障碍、胎儿畸形及广...
- 高欲燃
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒E2蛋白多克隆抗体间接ELISA
- 文献传递
- 表达FMDV Asia 1 VP1基因重组BHV-1的构建
- 构建表达FMDV Asial(Asial IND 49197)VP1重组BHV-1，首先人工合VP1全基因并引入限制性内切酶Xab I和Kpn I，通过酶切连接等生物学方法用VP1基因替换本实验室前期构建好的转移栽体DG...
- 朱远茂高欲燃于作董秀梅吕闯薛飞
- 表达O型口蹄疫病毒VP1基因的重组病毒BHV-1的构建与鉴定被引量：4
- 2009年
- 【目的】为了构建表达口蹄疫病毒(O/China/99)VP1基因的牛疱疹病毒1型,将人工合成的口蹄疫病毒VP1基因插入到巨细胞病毒(CMV)启动子之下构建gE基因缺失转移载体。【方法】利用磷酸钙介导转染法将该转移载体与亲本病毒BHV-1/gE-/LacZ+的基因组DNA共转染牛鼻甲细胞后收获增殖的病毒。通过筛选白色病毒蚀斑,得到重组病毒BHV-1/gE-/VP1。【结果】PCR检测结果表明VP1基因已经插入到了重组病毒BHV-1/gE-的基因组中,间接免疫荧光试验和Western blot证实了BHV-1/gE-/VP1中的VP1基因在感染的细胞中获得了表达。【结论】本研究成功地构建了表达口蹄疫病毒VP1基因的重组病毒BHV-1/gE-/VP1,为研制口蹄疫及其他重要牛传染病的BHV-1病毒载体疫苗奠定了基础。
- 任宪刚薛飞朱远茂童光志王延辉冯军科祖立闯李娇史鸿飞高欲燃
- 关键词：口蹄疫病毒VP1基因
- 牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的多克隆抗体制备及鉴定被引量：6
- 2011年
- 为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)重组E2蛋白的兔源多克隆抗体,本研究利用表达BVDV E2蛋白的重组质粒pET30a-E2转化E.coli BL21(DE3),经诱导表达获得重组E2蛋白。Western blot检测显示纯化蛋白能够与BVDV参考阳性血清反应。以纯化的重组E2蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,病毒中和试验测定其中和效价为1:2048,间接免疫荧光和western blot试验表明其具有良好的反应性和特异性。本研究制备的BVDV重组E2蛋白兔源多克隆抗体可应用于BVDV的检测,同时为进一步建立检测BVDV E2蛋白的ELISA方法奠定基础。
- 高欲燃朱远茂康健史鸿飞李娇任宪刚冯军科于作薛飞
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒E2蛋白多克隆抗体
- Asia 1型口蹄疫病毒VP1基因的表达鉴定及其多抗制备被引量：3
- 2010年
- 本研究旨在表达口蹄疫病毒(FMDV)的VP1全基因并制备特异性的多克隆抗体。利用PCR方法扩增Asia 1 IND 49197株VP1全基因,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,在大肠杆菌BL21中进行表达。SDS-PAGE结果显示表达产物分子量约为31.6ku,以包涵体的形式存在。通过Ni-NTA Purification System纯化后进行western blot和间接ELISA分析,结果显示重组蛋白能够被FMD阳性血清识别,具有良好的反应性。将纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,ELISA测定抗体效价为1∶20480,病毒中和试验测定抗体效价为1∶64。本研究所表达的VP1蛋白可用于开发检测Asia1口蹄疫抗体的诊断试剂,所制备的多克隆抗体为进一步研究VP1的结构、功能以及抗原表位的鉴定提供了条件。
- 朱远茂任宪刚史鸿飞高欲燃于作冯军科相文华薛飞
- 关键词：ASIAVP1基因多克隆抗体
- 牛病毒性腹泻病毒E2蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定被引量：3
- 2013年
- 为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)糖蛋白E2单克隆抗体(MAb),利用原核表达并且纯化的重组糖蛋白E2(rE2)免疫BALB/c小鼠,取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合。采用以BVDV为检测抗原的间接ELISA筛选阳性细胞克隆,经3次克隆纯化后获得2株稳定分泌抗E2特异性MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为4E3与1G11。用4E3与1G11杂交瘤细胞株接种BALB/c小鼠制备腹水,采用rE2及BVDV包被的ELISA测得的效价分别是6.21×106和6.83×105及6.83×105和7.5×104。间接ELISA、Western blot、IFA试验表明两株杂交瘤细胞所分泌的MAb具有良好的反应性和特异性。经抗体亚类鉴定4E3与1G11均为IgM/κ。特异性试验表明4E3与1G11这2株MAb均不与牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、牛腺病毒3型反应;其中4E3不与猪瘟病毒反应,而1G11则可与猪瘟病毒发生交叉反应,这种反应特性可试用于BVDV与猪瘟病毒的鉴别诊断。所制备的4E3与1G11 MAb可以用于BVDV抗原的检测,为建立检测BVDV E2蛋白血清抗体的ELISA奠定了基础。
- 王姝朱远茂蔡红马磊史鸿飞吕闯董秀梅高欲燃薛飞
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒E2单克隆抗体IGM
- 牛呼吸道合胞体病毒核蛋白的表达及其单克隆抗体的制备被引量：4
- 2012年
- 利用牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)接种牛肺细胞(BL),提取病毒RNA。通过RT-PCR扩增BRSV的核蛋白基因,然后定向克隆到原核表达载体pET30a,获得重组表达质粒pET30a-N。将重组质粒转化表达菌BL21(DE3),经增菌培养和IPTG诱导以及SDS-PAGE和Western blot分析,成功表达出了核蛋白(N),其分子量约为49kDa。为制备BRSV核蛋白的单克隆抗体,用纯化的重组核蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞融合。采用以BRSV为检测抗原的间接ELISA筛选阳性细胞克隆,经3次克隆纯化后获得2株稳定分泌抗N特异性MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为2D12与4B10。用2D12与4B10杂交瘤细胞株接种BALB/c小鼠制备腹水,采用rN及BRSV包被的ELISA测得的效价分别是1×105和1×106及1×102和1×103。间接ELISA、Western blot、IFA试验表明两株杂交瘤细胞所分泌的MAb具有良好的反应性和特异性。经抗体亚类鉴定D12与4B10均为IgG1/κ。特异性试验表明单抗2D12与4B10均不与牛副流感病毒3型和牛病毒性腹泻病毒反应。所制备的D12与4B10可用于建立检测BRSV病原及抗体的诊断方法。
- 马磊朱远茂蔡红王姝史鸿飞吕闯董秀梅高欲燃薛飞
- 牛传染性鼻气管炎病毒gE蛋白单抗的制备及鉴定
- 制备牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的特异性单克隆抗体(MAb)，本研究根据GenBank登录的IBRV gE基因序列设计一对特异性引物，扩增出长350 bp的gE基因片段，定向克隆到pET-32a(+)表达载体中，然后...
- 于作朱远茂高欲燃董秀梅吕闯薛飞
- 表达牛呼吸道合胞体病毒G蛋白基因的重组Ⅰ型牛疱疹病毒的构建与鉴定被引量：8
- 2010年
- 为构建表达牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)G蛋白基因的牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)重组病毒,本研究将人工合成的BRSV全长G蛋白基因编码序列插入到巨细胞病毒(CMV)启动子之下构建TK基因缺失转移载体。利用磷酸钙-DNA沉淀法将该转移载体与亲本病毒BHV-1/TK-/LacZ+的基因组DNA共转染牛鼻甲细胞后收获增殖的病毒。通过反向蚀斑筛选,得到重组病毒BHV-1/TK-/G+。PCR检测结果证实G蛋白基因已经插入到了亲本病毒BHV-1/TK-/LacZ+的基因组中,间接免疫荧光试验和western blot证实BHV-1/TK-/G+中的G蛋白基因在感染的细胞中获得了表达。本研究为研制BRSV及其他重要牛传染病的BHV-1病毒活载体疫苗奠定了基础。
- 冯军科朱远茂任宪刚祖立闯李娇史鸿飞高欲燃童光志薛飞
- 关键词：牛呼吸道合胞体病毒
