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一株3型牛腺病毒的分离与鉴定被引量：9: 2011年; 本研究于2009年由患急性呼吸道疾病牛的鼻拭子中分离获得一株病毒,经形态特征、血清学试验及PCR鉴定表明,该病毒与牛腺病毒3型(BAV-3)相似。对其E2A基因进行序列测定,并与GenBank中登录的BAV1型、3型、4型及人、绵羊、鼠等其它种属来源的腺病毒E2A基因序列进行比对及系统进化分析,结果显示该分离株与BAV-3的同源性为95.5%。经MEGA4软件分析,分离株与BAV-3验证值为100,表明其为BAV-3,并命名为BAV-3HLJ0955株。对该分离株热敏感试验表明,BAV-3 HLJ0955在56℃ 30min可被完全灭活,属于BAV第一群。这是国内首次分离获得BAV-3的报道。; 于作朱远茂蔡红高欲燃董秀梅吕闯薛飞

犬瘟热病毒血凝蛋白在昆虫细胞中的表达与抗原性分析被引量：1: 2014年; 为获得具有天然构象及良好抗原性的犬瘟热病毒(CDV)血凝蛋白(H),本研究以HLJ2-07毒株为模板,利用RTPCR方法扩增出H基因,将其克隆到pFastBacTMHTA载体中,利用大肠杆菌DH10BacTM同源重组构建穿梭质粒reBACmidrH,将重组穿梭质粒转染Sf9昆虫细胞,进行杆状病毒表达。利用Western blotting对获得的重组蛋白进行鉴定及抗原性分析。同时,利用在线网站与软件对CDV H蛋白进行B细胞表位分析预测。结果显示,在杆状病毒系统中表达的H蛋白能与His-tag单克隆抗体及CDV阳性血清发生特异性反应,表明该蛋白成功表达,且具有良好的反应原性;用Swiss-model同源建模软件及B细胞表位预测软件,预测H蛋白可能具有的B细胞表位有5处,分别是175—195、240—250、365—380、480—508及526—555。本研究获得了具有天然构象及良好抗原性的CDV重组H蛋白,可为诊断试剂开发、单克隆抗体制备及表位筛选等工作奠定基础。; 全传松姜骞于作李博韬李连峰曲连东; 关键词：犬瘟热病毒 B细胞表位

牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的多克隆抗体制备及鉴定被引量：6: 2011年; 为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)重组E2蛋白的兔源多克隆抗体,本研究利用表达BVDV E2蛋白的重组质粒pET30a-E2转化E.coli BL21(DE3),经诱导表达获得重组E2蛋白。Western blot检测显示纯化蛋白能够与BVDV参考阳性血清反应。以纯化的重组E2蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,病毒中和试验测定其中和效价为1:2048,间接免疫荧光和western blot试验表明其具有良好的反应性和特异性。本研究制备的BVDV重组E2蛋白兔源多克隆抗体可应用于BVDV的检测,同时为进一步建立检测BVDV E2蛋白的ELISA方法奠定基础。; 高欲燃朱远茂康健史鸿飞李娇任宪刚冯军科于作薛飞; 关键词：牛病毒性腹泻病毒 E2蛋白多克隆抗体

Asia 1型口蹄疫病毒VP1基因的表达鉴定及其多抗制备被引量：3: 2010年; 本研究旨在表达口蹄疫病毒(FMDV)的VP1全基因并制备特异性的多克隆抗体。利用PCR方法扩增Asia 1 IND 49197株VP1全基因,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,在大肠杆菌BL21中进行表达。SDS-PAGE结果显示表达产物分子量约为31.6ku,以包涵体的形式存在。通过Ni-NTA Purification System纯化后进行western blot和间接ELISA分析,结果显示重组蛋白能够被FMD阳性血清识别,具有良好的反应性。将纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,ELISA测定抗体效价为1∶20480,病毒中和试验测定抗体效价为1∶64。本研究所表达的VP1蛋白可用于开发检测Asia1口蹄疫抗体的诊断试剂,所制备的多克隆抗体为进一步研究VP1的结构、功能以及抗原表位的鉴定提供了条件。; 朱远茂任宪刚史鸿飞高欲燃于作冯军科相文华薛飞; 关键词：ASIA VP1基因多克隆抗体

表达FMDV Asia 1 VP1基因重组BHV-1的构建: 构建表达FMDV Asial(Asial IND 49197)VP1重组BHV-1，首先人工合VP1全基因并引入限制性内切酶Xab I和Kpn I，通过酶切连接等生物学方法用VP1基因替换本实验室前期构建好的转移栽体DG...; 朱远茂高欲燃于作董秀梅吕闯薛飞

牛腺病毒3型中国分离株的鉴定及全基因组序列分析: 牛腺病毒3型（Bovine adenovirus 3, BAV3），为腺病毒科（Adenoviridae）哺乳动物腺病毒属（Mastadenovirus）的成员，属于牛腺病毒（Bovine adenovirus，BAV）...; 于作; 关键词：全基因组测序; 文献传递

牛传染性鼻气管炎病毒gE蛋白单抗的制备及鉴定: 制备牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的特异性单克隆抗体(MAb)，本研究根据GenBank登录的IBRV gE基因序列设计一对特异性引物，扩增出长350 bp的gE基因片段，定向克隆到pET-32a(+)表达载体中，然后...; 于作朱远茂高欲燃董秀梅吕闯薛飞

牛病毒性腹泻病毒重组E2蛋白多克隆抗体的制备及鉴定: 为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)重组E2蛋白兔源多克隆抗体,利用已有的表达E2蛋白的重组质粒pET30a-E2转化表达菌BL21(DE3),经培养诱导表达出重组E2蛋白,western blot显示纯化的重组E2蛋白能...; 高欲燃朱远茂史鸿飞任宪刚冯军科于作薛飞; 关键词：牛病毒性腹泻病毒 E2蛋白多克隆抗体

牛腺病毒2型中国分离株的鉴定及全基因组序列分析: 牛腺病毒3型(Bovine adenovirus3,BAV3),为腺病毒科(Adenoviridae)哺乳动物腺病毒属(Mastadenovirus)的成员,属于牛腺病毒(Bovine adenovirus,BAV)第一...; 于作; 关键词：基因分离全基因组测序; 文献传递

表达兔出血症病毒vp60基因的重组犬2型腺病毒的构建及其免疫效力评价: 兔出血症(Rabbit hemorrhagic disease，RHD)是由兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic diseasevirus，RHDV)引起成年兔的一种急性、致死性、接触性传染病，以呼吸系统出...; 于作; 关键词：兔出血症病毒犬2型腺病毒 VP60基因免疫效力

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于作