高卜渝
- 作品数：17 被引量：100H指数：5
- 供职机构：复旦大学生命科学学院遗传学研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生轻工技术与工程化学工程更多>>
- 产分泌蛋白酶酵母菌株的筛选被引量：9
- 1999年
- 用含有脱脂奶粉平板上点种培养的方法，从分属９３个属，４９２个种的２ １２９个酵母菌株中进行筛选，发现有分属２７个属，８７个种的１６５个酵母菌株可产生不同程度的分泌蛋白酶。
- 高卜渝陈孝康徐波李育阳H.Fukuhara
- 关键词：酵母
- 转甲状腺素蛋白基因在毕赤氏酵母中的非融合表达
- 2002年
- 用限制酶将pSK TTR质粒上TTR基因切下,分别插入分泌型载体pPIC9和pPIC9K.将重组的pPIC9K TTR用BglⅡ酶切后,转化PichiapastorisGS115菌株,筛选获得G418高抗性转化子.转化子经摇瓶发酵,上清液用SDS PAGE检测,有明显的rTTR表达.经DEAE sepharoseF.F.离子交换柱和Superdex75分子筛层析,得到蛋白纯度大于95%的rTTR.经Westernblotting,分子质量和等电点测定等证明,毕赤氏酵母表达的rTTR与人血浆提取的TTR极为相似.
- 翟杰高卜渝裴黎霞吴俊宋大新
- 关键词：分泌型载体毕赤氏酵母蛋白质印迹
- 甜蛋白Monellin在巴斯德毕赤氏酵母中的胞内表达被引量：3
- 2002年
- 将PCR扩增得到的Monellin基因片段插入Pichiapastoris胞内表达质粒pPIC3.5K',然后转入Pichiapas torisSMD1168受体菌中.用G418筛选高拷贝菌株,并进一步对其进行PCR鉴定.获得的阳性克隆菌株经甲醇诱导60h,SDS PAGE结果显示菌株破壁液中含有表达的Monellin,其大小约为11ku,并具有甜度.
- 于学红袁汉英高卜渝范长胜周欣李育阳
- 关键词：甜蛋白MONELLIN酵母表达
- 酵母表达基因工程产物不均一性分析及其对策被引量：29
- 1994年
- 应用FPLC,SDS-PAGE,Western Blot等技术,揭示了酵母表达系统生产重组人αA干扰素的不均一性,主要表现为聚合体的存在,信号肽加工不完全以及内部降解现象。文中详细分析了酵母表达基因工程产物不均一性的原因,并提出解聚,基因定点突变,抑制蛋白酶活性,改善发酵条件等避免异质性的对策。
- 王洪海高卜渝陈佩丽董灵李育阳
- 关键词：酵母干扰素基因工程
- αA干扰素基因在酿酒酵母中的表达被引量：1
- 1990年
- 将含有αA干扰素基因的DNA片段接上化学合成的EcoR I-Hind III转换接头,然后插入酵母分泌型表达载体YFD 18中,构建成质粒YFD 66和YFD66-0.转化酵母菌BJl991后,得到转化子BJ1991/YFD66和BJl991/YFD66-0.干扰素活性测定表明,每升BJ1991/YFD66培养液含有αA干扰素10~6U,而BJ1991/YFD66-0则不产生干扰素,YFD66为αA干扰素表达质粒。
- 童贻刚李谐勋李育阳高卜渝
- 关键词：酵母干扰素分泌酿酒
- 一种高效纯化基因工程菌重组表达产物的工艺及其用途
- 本发明提供了一种高效纯化基因工程重组表达产物的方法及其试剂。使用表面活性剂等助溶剂克服重组表达产物的聚合问题，提高纯化效率。使用层析系统和适当的分离纯化条件提高了基因工程重组表达产物的分离效率。
- 李育阳高卜渝
- 文献传递
- 表达人卵泡抑素的毕赤氏巴斯德酵母工程菌的构建被引量：1
- 2005年
- 目的在P .pastoris中分泌表达人卵泡抑素基因。方法采用PCR法扩增目的基因FS2 88片段 ,将其亚克隆入pPIC9,构建pPIC9 FS2 88,DNA序列测定验证后 ,将pPIC9 FS2 88采用BamHⅠ和SalⅠ双酶切 ,回收小片段 ,连接pPIC9K ,构建重组分泌型表达载体pPIC9K FS2 88,电穿孔法转化SMD116 8,G4 18筛选多拷贝转化子 ,转化子发酵后 ,取上清液进行SDS PAGE和Westernblot检测重组蛋白表达。结果成功构建了重组分泌型表达载体pPIC9K FS2 88和工程菌株SMD116 8 FS2 88,SDS PGAE显示工程菌发酵上清液在 5 0 0 0 0 ～6 0 0 0 0处有弥散条带 ,并且与Westernblot结果相符。结论工程菌SMD116 8 FS2
- 尤汉宁袁汉英吕红高卜渝陈源文李育阳李定国
- 关键词：FS卵泡抑素分泌型表达载体转化子工程菌分泌表达
- 假丝酵母C.kefyr菊粉酶基因的克隆
- 1999年
- 张平武霍克克高卜渝邹愚李育阳
- 关键词：菊粉酶假丝酵母分泌蛋白酵母菌酿酒酵母
- 乙型肝炎病毒表面抗原在乳酸克鲁维酵母中的表达
- 1997年
- 将乙型肝炎表面抗原基因插入具调控型启动子ＰＨ０５的乳酸克鲁维酵母表达载体中，构建完成质粒ｐＬＳ１，转化宿主菌ＫｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓｌａｃｔｉｓＣＸＪ１７Ａ，ＥＬＩＳＡ结果表明，其表达水平受无机磷浓度的调控。为了进一步提高表达水平，我们将ｐＬＳ１中的乙型肝炎表面抗原表达单元插入带完整ｐＫＤ１序列的载体ｐＥ１，并将构建成的质粒ｐＬＳ２转化ＭＷ９８８Ｃ。在比较了ＣＸＪ７Ａ／ｐＬＳ１和ＭＷ９８８Ｃ／ｐＬＳ２后，我们发现ＭＷ９８８Ｃ／ｐＬＳ２的稳定性大大提高。
- 李嵩高卜渝李育阳
- 关键词：乳酸克鲁维酵母乙型肝炎病毒表面抗原
- 人纤溶蛋白酶原K5在毕赤酵母中的表达及其生物活性鉴定被引量：1
- 2004年
- 化学合成人纤溶蛋白酶原K5 (pK5 )的编码基因并克隆到毕赤氏酵母表达系统的分泌型载体pPIC9K上 ,将重组质粒经BglⅡ单酶切后电转化PichiapastorisGS115菌株 ,筛选出对G4 18有高抗性和在MM培养基上生长缓慢的转化子。经摇瓶发酵和甲醇诱导后 ,用 15 %SDS PAGE检测发酵上清液 ,表明有重组蛋白pK5的高表达。经CM Sepherose离子交换柱和Superdex 75分子筛层析两步分离纯化 ,获得了纯度达到 98%的rpK5。用MTT方法检测的结果表明 。
- 沈利宋大新高卜渝吕红李育阳
- 关键词：酵母分泌表达
