袁汉英
- 作品数：56 被引量：170H指数：8
- 供职机构：复旦大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金江西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学化学工程更多>>
- 一种适冷木糖苷酶/阿拉伯糖苷酶、其制备方法及应用
- 本发明属生物工程领域，提供了一种新型具有耐低温，并且有β-D-木苷酶活性和α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶活性的双功能酶RuXyn1。RuXyn1的氨基酸编码序列如SEQID NO 2所示，其核苷酸编码序列如SEQID NO 1...
- 吕红周峻岗袁汉英
- 文献传递
- 人表皮生长因子基因的化学合成和克隆及其在酵母中的表达被引量：5
- 1991年
- 用固相亚磷酰胺法合成了人表皮生长因子基因,全长为173个核苷酸,它被分成8个寡核苷酸,分别在DNA合成仪上合成。经分离纯化后的寡聚核苷酸进行酶促连接,然后被克隆到噬菌体M13mp18中,克隆经分子杂交、限制酶酶切以及DNA序列分析检测,证明合成的人表皮生长因子基因和设计的完全一致。将人表皮生长因子基因的DNA片段插入酵母分泌型表达载体YFD59 HindⅢ位点中,建成表达人表皮生长因子基因的质粒YFD104,再将此质粒转化酿酒酵母,所得转化子经摇瓶发酵、发酵上清液用受体结合试验表明有人表皮生长因子表达。
- 袁汉英闵永洁石松陶无凡吴声积李育阳王启松吕慧梅张承圭胡倩
- 关键词：表皮生长因子基因化学合成克隆
- 表达人卵泡抑素的毕赤氏巴斯德酵母工程菌的构建被引量：1
- 2005年
- 目的在P .pastoris中分泌表达人卵泡抑素基因。方法采用PCR法扩增目的基因FS2 88片段 ,将其亚克隆入pPIC9,构建pPIC9 FS2 88,DNA序列测定验证后 ,将pPIC9 FS2 88采用BamHⅠ和SalⅠ双酶切 ,回收小片段 ,连接pPIC9K ,构建重组分泌型表达载体pPIC9K FS2 88,电穿孔法转化SMD116 8,G4 18筛选多拷贝转化子 ,转化子发酵后 ,取上清液进行SDS PAGE和Westernblot检测重组蛋白表达。结果成功构建了重组分泌型表达载体pPIC9K FS2 88和工程菌株SMD116 8 FS2 88,SDS PGAE显示工程菌发酵上清液在 5 0 0 0 0 ～6 0 0 0 0处有弥散条带 ,并且与Westernblot结果相符。结论工程菌SMD116 8 FS2
- 尤汉宁袁汉英吕红高卜渝陈源文李育阳李定国
- 关键词：FS卵泡抑素分泌型表达载体转化子工程菌分泌表达
- 一种用于制备碱性甘露聚糖酶的酵母基因工程菌株及其应用方法
- 本发明属于遗传工程和发酵工程领域。本发明将碱性甘露聚糖酶基因的突变体MAN330克隆到分泌表达载体pUKDS上，并转化鹰嘴豆胞克鲁维酵母Y179U，形成分泌表达碱性甘露聚糖酶的鹰嘴豆胞克鲁维酵母基因工程菌株。该酵母基因工...
- 吕红潘贤袁汉英马延和田艾
- 文献传递
- 人类组织特异性DNA聚合酶POLλ2基因的克隆、表达纯化和鉴定
- 2007年
- 发现并克隆了一个肝脏特异的人类DNA聚合酶基因,是POLλ的一个剪接体,命名为POLλ2.该剪接本的cDNA长2206bp,包含一个1452bp的开放阅读框,编码482个氨基酸,位于人10号染色体长臂24区,长约7.9kb,包含8个外显子和7个内含子.生物信息学分析表明,POLλ2蛋白和DNA聚合酶X家族成员高度同源,并含有这个家族特有结构域POLx,因此是一个DNA聚合酶X家族的新成员.该剪接本的核苷酸序列和相应蛋白质氨基酸序列已提交至GenBank,登录号为AY302442.亚细胞定位实验证实,POLλ2蛋白定位于细胞核;人16种组织表达谱实验表明,POLλ2在肝组织和睾丸组织中特异性高表达,在卵巢组织中低表达,而在其他组织中没有检测到表达.癌和癌旁表达实验表明,与正常肝组织和癌旁组织相比,在15个肝癌组织的样本中有80%样本的POLλ上调表达,导致POLλ2和POLλ的mRNA分子的比例异常,可能和肝癌的病理过程有关.通过筛选菌株,E.coli BL21(DE3)CONDON Plus可以高效地表达可溶性POLλ2蛋白;通过Ni-NTA resin和Superdex-75纯化了POLλ2重组蛋白.经过同位素α-32P-dCTP掺入实验,证实了POLλ2具有DNA聚合酶活性.
- 谷福游淳刘建平程鏖余垚王翔万大方顾建人袁汉英李育阳吕红沈岩(推荐)
- 关键词：基因克隆纯化肝癌
- 甜蛋白Monellin在巴斯德毕赤氏酵母中的胞内表达被引量：3
- 2002年
- 将PCR扩增得到的Monellin基因片段插入Pichiapastoris胞内表达质粒pPIC3.5K',然后转入Pichiapas torisSMD1168受体菌中.用G418筛选高拷贝菌株,并进一步对其进行PCR鉴定.获得的阳性克隆菌株经甲醇诱导60h,SDS PAGE结果显示菌株破壁液中含有表达的Monellin,其大小约为11ku,并具有甜度.
- 于学红袁汉英高卜渝范长胜周欣李育阳
- 关键词：甜蛋白MONELLIN酵母表达
- 产碱性木聚糖酶菌株的筛选及酶学性质研究
- 木聚糖酶(Xylanase)是一种重要的半纤维素酶,指的是能将木聚糖催化水解成寡木聚糖、低聚木糖、木二糖和木糖的酶系总称,包括多种内切酶及外切酶。目前已广泛应用于造纸、饲料、食品、医药等行业。木聚糖酶广泛存在于细菌、真菌...
- 单志琼周峻岗袁汉英吕红
- 文献传递
- 一种利用鹰嘴豆胞克鲁维酵母表达系统大规模制备外源蛋白的发酵工艺
- 本发明属于遗传工程和发酵工程领域，是利用含有外源蛋白编码序列的鹰嘴豆孢克鲁维酵母基因工程菌高效制备外源蛋白的发酵工艺。发酵时，取上述基因工程菌株发酵2-6天，然后去除菌体，即得；发酵液初始菌浓度OD值为0.4-0.6，在...
- 吕红乐科易潘贤袁汉英
- 文献传递
- 人超氧化物歧化酶-胸腺素α1融合蛋白在毕赤酵母中的表达与活性检测被引量：4
- 2011年
- 为了增强胸腺素α1(Thyα1)的稳定性和免疫功能,采用胸腺素α1与人超氧化物歧化酶(hSOD)融合的策略,构建了6His-hSOD-(G4S)1-Thyα1和6His-hSOD-(G4S)2-Thyα1 2个融合基因,并分别在毕赤酵母中实现了高水平表达.重组表达的融合蛋白经过Ni-NTA亲和层析纯化后,纯度达到80%以上.用邻苯三酚自氧化法和E-玫瑰花法分别测定了人超氧化物歧化酶酶活性和胸腺素活性.结果表明,融合蛋白6His-hSOD-(G4S)1-Thyα1和6His-hSOD-(G4S)2-Thyα1的超氧化物歧化酶比活性分别为120 998±5 206 U/mg和31 279±1 121 U/mg;融合蛋白在1×10-7mol/L浓度下的E玫瑰花结率分别为(38.4±1.6)%和(36.6±0.2)%.结果说明:融合蛋白中由5个氨基酸G4S构成的连接肽能有效地保障2个蛋白质各自的结构特征,使融合蛋白既有超氧化物歧化酶的活性,又具有胸腺素的活性.
- 周宇飞周峻岗袁汉英吕红
- 关键词：胸腺素Α1融合蛋白活性测定
- 内切菊粉酶基因在毕赤酵母中的高水平表达研究被引量：2
- 2012年
- 低聚果糖(Fructooligosaccharides,FOS)具有改善胃肠道环境、刺激和加强机体免疫反应、抑制肠道特定肿瘤的发生等生物活性.内切菊粉酶能够水解菊粉获得低聚果糖.为了实现内切菊粉酶的高表达,从无花果曲霉(Aspergillus ficuum ATCC16882)中克隆了内切菊粉酶编码基因INU2,并实现了在毕赤氏酵母中的重组分泌表达,摇瓶表达的酶活力为570.4U/mL.去除内切菊粉酶的内源性信号肽序列后,其重组表达水平显著提高,摇瓶表达的酶活力为1013.8U/mL,提高幅度77.7%.TLC分析表明:毕赤酵母重组表达的内切菊粉酶(不含内源性信号肽序列)能将2%长链菊粉水解为2～3个聚合度的低聚果糖.
- 冯碧薇张赓李悦袁汉英吕红
- 关键词：毕赤酵母酶活力
