陶苏丹
- 作品数：50 被引量：60H指数：4
- 供职机构：浙江省血液中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省医药卫生科学研究基金浙江省卫生高层次创新人才培养工程项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学经济管理更多>>
- KIR2DL1、2DL2、2DL3和配基HLA-C序列分型方法的研究及其应用
- 陶苏丹章伟和艳敏何俊俊陈男英韩浙东王炜朱发明吕杭军
- 该项目建立了一种可靠的KIR2DL1、2DL2、2DL3等位基因高分辨分型方法，并利用建立的测序分型方法检测分析了KIR2DL1、2DL2、2DL3与HLA-C在浙江汉族人群中的中的分布情况和匹配率，并分析了配基HLA-...
- 关键词：
- 关键词：等位基因造血干细胞移植
- 一例ABO血型系统B抗原减弱表达的分子机制被引量：18
- 2011年
- 目的研究1例B抗原减弱献血者的血清学特性和抗原减弱的分子机制。方法应用单克隆抗体检测献血者红细胞ABO血型抗原，标准A、B、O红细胞检测其血清中的ABO抗体，并检测其血清转移酶活性。采用聚合酶链反应技术扩增ABO基因全部外显子序列和5′端非编码区序列并进行测序分析，应用逆转录-PCR和克隆测序技术分析献血者ABO cDNA转录剪接情况，采用重亚硫酸盐转化直接测序法分析ABO基因启动子区CpG岛甲基化水平。结果献血者血清学表现为B抗原明显减弱，血清中无抗-B抗体，B转移酶活性降低。基因型为B101／O01，全部外显子序列和拼接接受位点碱基无任何突变。5′端非编码区序列多态性符合B101／O01的特征，启动子、增强子、负调控序列和微卫星重复序列未发现异常。献血者存在ABO基因全长cDNA转录本，未发现新的转录剪接体。与正常对照标本比较，在启动子区CpG岛内发现启动子附近有多个特异性半甲基化位点。结论启动子区CpG岛中的甲基化位点可能是引起B抗原弱表达的原因。
- 应燕玲陶苏丹和艳敏许先国朱发明吕杭军严力行
- 关键词：ABO基因甲基化表观遗传
- 献血者粒细胞血型系统高通量基因诊断技术的建立和抗体筛选
- 何俊俊陶苏丹和艳敏王炜章伟陈男英朱发明严力行
- 该研究建立HNA-1、3、4、5和HNA-2(C42G)基因的测序技术，为最为准确的粒细胞抗原基因分型方法。利用SNaPShot技术建立了在单一检测管内同步检测HNA-1、3、4、5和HNA-2(C42G)系统的高通量分...
- 关键词：
- 关键词：献血基因诊断
- 类孟买型FUT1酶稳定表达细胞株的构建
- 2010年
- 陶苏丹和艳敏应燕玲朱发明吕杭军严力行
- 关键词：体外表达岩藻糖基转移酶位点突变目的蛋白重组表达质粒
- α-1，2岩藻糖基转移酶基因293C〉T和658C〉T突变真核细胞稳定表达的研究被引量：4
- 2011年
- 目的建立α-1，2岩藻糖基转移酶基因（α-1，2-fucosyltransferase gene，FUT1）293C〉T和658C〉T突变真核表达细胞，阐明FUT1突变引起H抗原减弱的机制。方法抽提类孟买型先证者基因组DNA扩增FUT1全长编码序列，扩增片段与真核表达载体peDNA3．1连接构建重组表达质粒。采用脂质转染技术将重组质粒转染COS7细胞并进行稳定表达筛选。采用实时荧光定量PCR检测mRNA表达量，应用HPLC检测酶活性，采用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel eieetrophoresis，SDS-PAGE）和Western印迹技术鉴定蛋白。结果构建了pcDNA3．1-FUT1野生型、pcDNA3．1-FUT1293C〉T、pcDNA3．1-FUT1658C〉T真核表达重组质粒，转染后通过G418筛选获得了稳定表达FUTj的COS7细胞。以野生型重组体转染细胞中FUT1mRNA量作为对照，293C〉T和658C〉T重组体转染细胞FUT1mRNA量分别为野生型的97．10％和104．74％。经SDS—PAGE电泳和Western印迹检测显示细胞表达相对分子质量约46000大小的目的蛋白片段，pcDNA3．1-FUT1野生型重组体转染细胞表达蛋白可催化相应的酶促反应，而peDNA3．1-FUT1293C〉T、pcDNA3．1-FUT1658C〉T转染细胞蛋白完全失去酶活性。结论体外实验提示293C〉T和658C〉T突变并不影响FUT1mRNA转录和蛋白生成，但表达蛋白的酶活性明显下降，从而导致H抗原生成减弱。
- 陶苏丹和艳敏洪小珍应燕玲朱发明吕杭军严力行
- 关键词：类孟买型基因突变酶活性
- 荧光定量聚合酶链反应检测血液制品中细菌污染方法的建立被引量：2
- 2011年
- 目的建立快速检测血液制品中细菌污染的荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法。方法以大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌分别作为革兰阴性菌和革兰阳性菌代表菌,模拟不同程度细菌污染的血液标本,利用3种不同抽提方法提取细菌基因组DNA进行荧光定量PCR(FQ-PCR);以大肠埃希菌系列浓度梯度基因组DNA为模板建立标准曲线,将14株不同菌株模拟细菌污染的血液标本进行FQ-PCR检测。结果根据Ct值和扩增效果,3种基因组抽提方法中以DNA过柱纯化法效果最佳;以大肠埃希菌梯度稀释(1.2×108)～(1.2×102)CFU/ml进行FQ-PCR反应,得到标准曲线为Y=-0.2211X+8.80(R2=0.998);14株不同细菌均能在103CFU/ml检测出阳性,但Ct值差异有统计学意义。结论建立了检测血液制品中细菌污染的荧光定量诊断技术,该方法快速可靠,在预防和诊断输血相关性细菌污染上具有一定的应用价值。
- 应燕玲陶苏丹和艳敏许先国朱发明吕杭军严力行
- 关键词：血液细菌污染荧光定量聚合酶链反应分子诊断
- 汉族人群白血病患者HLA-A、-B、-DRB1等位基因多态性和单体型频率分析
- 2010年
- 章伟王炜陈男英和艳敏陶苏丹韩浙东何俊俊朱发明吕杭军严力行
- 关键词：单体型频率等位基因多态性DRB1HLA-A基因座
- 浙江汉族人群KIR3DL2等位基因的分布
- 2021年
- 目的分析浙江汉族人群KIR3DL2等位基因分布。方法基因组DNA提取采用磁珠法。应用PCR技术通过4对引物扩增KIR3DL2基因的全长序列,利用BigDye terminator v3.1测序试剂盒对208名无血缘关系的汉族无偿献血者的全部外显子序列进行测序分析。根据KIR3DL2基因碱基多态性指定标本基因型。结果在检测的208份样本中,133份的KIR3DL2基因型为杂合子,75份的基因型为纯合子;共检出了46种基因型,常见的基因型为KIR3DL2*00201/KIR3DL2*00201、KIR3DL2*00201/KIR3DL2*00701和KIR3DL2*00201/KIR3DL2*01001,分别有70例、33例和23例。共检测到22个等位基因,频率较高的是KIR3DL2*00201、KIR3DL2*00701、KIR3DL2*01001,分别为57.45%、13.46%、9.13%。结论浙江汉族人群KIR3DL2等位基因分布具有多态性。
- 陈晨王洁琳和艳敏陶苏丹何吉朱发明
- 关键词：基因分型基因型频率
- 汉族人群白血病患者HLA-A、-B、-DRB1等位基因多态性和单体型频率分析
- 目的分析白血病患者HLA-A、-B和-DRB1位点在高分辨基因分型水平上的单体型频率及连锁不平衡特征。方法回顾性分析1330名白血病患者HLA高分辨分型情况,HLA-A、-B和-DRB1基因座高分辨分型方法采用聚合酶链反...
- 章伟严力行王炜陈男英和艳敏陶苏丹韩浙东何俊俊朱发明吕杭军
- MICB基因的克隆表达及其在抗体测定中的初步应用
- 2015年
- 目的：构建可行的MICB （ major histocompatibility complex class Ⅰ chain-related gene B）基因原核表达系统及蛋白质纯化体系,利用表达纯化蛋白建立ELISA方法初步应用于肾移植患者中MICB抗体的检测。方法外周血RNA经RT-PCR和特异性引物扩增获得MICB基因cDNA, MICB cDNA和原核表达载体pET-28a分别双酶切后连接构建重组表达载体,转染宿主菌E. coli BL21 DE3,IPTG诱导表达。亲和层析的Ni-NTA Spin纯化蛋白质,并通过Western blot鉴定。利用纯化蛋白建立ELISA法检测肾移植患者中MICB抗体。结果构建3个MICB常见等位基因2、3外显子的pET-28a-MICB重组表达体系,经Ni-NTA Spin纯化获得重组的MICB蛋白,Western blot鉴定。利用3个不同MICB蛋白质成功构建了ELISA方法,初步检测24份肾移植患者标本MICB抗体,显示不同的重组蛋白敏感性存在差异。结论本研究建立MICB基因克隆与体外表达技术,鉴定并纯化具有生物活性的蛋白质,同时建立MICB抗体检测的ELISA方法,为进一步研究MICB与移植免疫的关系提供基础资料。
- 应燕玲和艳敏陶苏丹何吉朱发明吕杭军
- 关键词：MICB蛋白表达纯化抗体测定
