谭逵
- 作品数：14 被引量：34H指数：4
- 供职机构：中南大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 弓形虫新基因wx2黄色荧光蛋白标记质粒的构建与鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的构建弓形虫新基因wx2黄色荧光蛋白标记的黄色荧光超表达质粒,为进一步研究弓形虫新基因WX2的功能提供工具。方法采用PCR扩增出编码wx2目的基因,用BglII,AvrII分别对PCR扩增产物和ptubYFP-YFP/sagCAT进行双酶切。将wx2定向克隆到tubYFP-YFP/sag-CAT;对重组质粒进行PCR,双酶切初步鉴定后做序列测定。结果特异扩增出预计wx2目的基因片段,大小为558bp;扩增产物成功连接到ptubYFP-YFP/sagCAT中,经PCR,双酶切及序列测定结果表明重组质粒中含有基因wx2读框。结论成功构建弓形虫新基因wx2黄色荧光超表达质粒wx2-tub-YFP sag/CAT。
- 吴翔谭逵张琼谢荣华官剑武舒衡平
- 关键词：弓形虫重组质粒
- 弓形虫新基因表位疫苗免疫效果的观察被引量：5
- 2008年
- 目的观察弓形虫新基因WX、WX2的表位疫苗对小鼠的保护作用。方法将昆明小鼠分成5组,分别用pcDNA3-W2b、pcDNA3-W4a、pcDNA3-W2b4a质粒及pcDNA3和NS,肌注3次,每次间隔2周。免疫完成后ELISA法检测血清抗体水平,取脾细胞用流式细胞仪检测CD4+与CD8+淋巴细胞比值,PCR检测肌肉组织中重组质粒。免疫后第3周,小鼠经腹腔注射弓形虫速殖子500个,观察发病情况和存活时间。30d后仍存活的小鼠,取组织匀浆后进行小鼠盲传。结果免疫后第3周,pcDNA3-W2b组小鼠血清抗体水平显著高于pcDNA3和NS对照组(P<0.05);用PCR法从pcDNA3-W2b、pcDNA3-W4a和pcDNA3-W2b4a质粒组小鼠肌肉组织中成功检测到各表位疫苗质粒,且各组小鼠脾脏CD4+与CD8+T淋巴细胞比值显著低于pcDNA3组和NS组(P<0.05)。pcDNA3-W2b、pcDNA3-W2b4a组小鼠存活时间与pcDNA3组及NS组比较明显延长(P<0.05)。结论弓形虫新基因WX、WX2表位疫苗能够诱导小鼠产生抗弓形虫感染保护性免疫,提示DNA类表位疫苗的研制可作为弓形虫疫苗研究的策略之一。
- 范久波吴翔谭逵谢荣华张琼蒋立平舒衡平
- 关键词：弓形虫DNA表位疫苗质粒
- 弓形虫GRA1基因在毕赤酵母菌中的表达、纯化与鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的研究弓形虫致密颗粒抗原-1(GRA1)在毕赤酵母菌中的表达,获得高效表达的具有生物学活性的目的蛋白。方法将已构建重组的pPIC9K-GRA1质粒转化入酵母菌GS115,筛选His+Muts表型转化子,摇瓶培养,1%甲醇诱导表达。表达产物经高效液相色谱法纯化后,测定其生物学活性。结果诱导4d的蛋白表达量达到2.5g/L。SDS-PAGE显示表达蛋白的分子质量单位为24ku,Westernblot鉴定表达产物具有抗原性。表达蛋白经高效液相色谱纯化产物后纯度达到90%以上。结论弓形虫GRA1基因在毕赤酵母中成功分泌表达目的蛋白,表达产物具有抗原性。
- 谢荣华舒衡平范久波蒋立平谭逵张琼吴翔
- 关键词：弓形虫毕赤酵母基因表达
- 弓形虫wx2基因的发现及生物学特性研究
- 吴翔舒衡平马振荣谭逵蒋若兰张琼
- 弓形虫是一种严重危害人畜健康的机会致病寄生原虫，所致的弓形虫病流行范围广，防治难度大，尚无针对缓殖子和耐药虫株的有效药物，弓形虫疫苗也尚未成功。因此，研究实用高效的弓形虫病疫苗和研发高效低毒的新药是控制弓形虫病的重要措施...
- 关键词：
- 关键词：基因克隆药物防治
- 弓形虫基因缺陷虫株建立方法的初步研究被引量：1
- 2008年
- 目的:应用电穿孔技术转染Tg P24基因敲除转染质粒于弓形虫RH,探讨电穿孔技术的应用条件,以及Tg P24基因敲除质粒转染虫株在不同哺乳动物细胞中筛选的最适条件。方法:设定所需的电穿孔参数、条件,如电压,电容,脉冲次数,电击杯的大小,电转染缓冲液,电穿孔后,将弓形虫悬浮液分别转移到长有不同贴壁细胞的培养瓶中,37℃,5%CO_2(体积分数)的培养箱中培养,观察弓形虫的生长状况,并对不同电穿孔参数、条件下的弓形虫存活率进行比较。12hr后换成加有福来霉素的完全培养基中选择培养,不同时间观察虫体及细胞生长情况;在细胞中选择培养10天后,收集虫体,4℃下福来霉素处理7天,再回复到细胞内用选择培养基培养5天,收集虫体,腹腔注射昆明小鼠,大量收集弓形虫用于提取RNA进行RT-PCR。结果:优化电穿孔条件后的弓形虫存活率得到提高(P<0.05);在选择浓度为5.0μg/ml-7.5μg/ml的福来霉素培养基中,筛选虫株采用L929细胞做为宿主细胞最为适合;RT-PCR结果显示L929细胞筛选基因敲除虫株的效果较好。结论:初步确定了弓形虫电穿孔技术的应用条件,以及TgP24基因敲除质粒转染虫株在不同哺乳动物细胞中的最佳筛选条件;获得了较好的转染效率,为进一步研究弓形虫TgP24基因敲除株的生物学特性打下了良好的基础。
- 谭逵张琼范久波谢荣华蒋立平官剑武舒衡平吴翔
- 关键词：弓形虫电穿孔基因敲除哺乳动物细胞
- 两种免疫调节剂增强弓形虫W2b2a表位疫苗的小鼠保护作用被引量：2
- 2015年
- 目的:探讨匹多莫德、沙利度胺增强弓形虫W2b2a表位疫苗刺激机体产生免疫应答和保护免疫的效果。方法:将匹多莫德、沙利度胺分别与弓形虫W2b2a表位疫苗混合肌注免疫小鼠,检测其细胞免疫和体液免疫,并观察其受到弓形虫攻击感染后的生存时间。结果:pc DNA3-W2b2a加匹多莫德组、pc DNA3-W2b2a加弗氏佐剂组、pc DNA3-W2b2a加沙利度胺组小鼠血清IFN-γ水平显著高于pc DNA3-W2b2a组(P<0.05);pc DNA3-W2b2a加匹多莫德组、pc DNA3-W2b2a加弗氏佐剂组Ig G抗体水平、CD4+/CD8+比值、T细胞增殖活性显著高于pc DNA3-W2b2a组和pc DNA3-W2b2a加沙利度胺组(P<0.05);小鼠攻击试验表明,免疫组小鼠存活时间明显长于对照组(P<0.05)。结论:匹多莫德、沙利度胺可增强弓形虫W2b2a表位疫苗免疫小鼠的保护作用。
- 谢荣华谭逵吴翔舒衡平
- 关键词：弓形虫匹多莫德沙利度胺表位疫苗免疫效果
- 毕赤酵母菌表达弓形虫GRA1蛋白接种小鼠免疫效果被引量：1
- 2008年
- 目的观察毕赤酵母菌表达弓形虫GRA1蛋白免疫效果。方法采用皮下注射法免疫接种小鼠,末次免疫后第2周用ELISA检测其特异性抗体水平;流式检测鼠脾淋巴细胞亚群,末次免疫后第3周,用弓形虫RH株速殖子分别攻击感染疫苗免疫组和对照组,观察小鼠感染情况及存活时间。结果ELISA结果表明,纯化GS115/pPIC9K-GRA1表达的蛋白和GS115/pPIC9K-GRA1表达的混合蛋白组抗体水平高于佐剂组、NS对照组及GS115/pPIC9K表达的混合蛋白组(P<0.05);流式结果显示,各组CD4+淋巴细胞细胞数量变化无显著性差异(P>0.05),而CD8+淋巴细胞数量则明显增多,纯化GS115/pPIC9K-GRA1表达的蛋白、GS115/pPIC9K-GRA1表达的混合蛋白组、GS115/pPIC9K表达的混合蛋白组及佐剂组明显高于NS组(P<0.05);小鼠攻击实验表明,与NS及GS115/pPIC9K表达的混合蛋白组相比,纯化GS115/pPIC9K-GRA1表达的蛋白和GS115/pPIC9K-GRA1表达的混合蛋白组小鼠存活时间显著延长(P<0.05)。结论毕赤酵母菌表达弓形虫GRA1蛋白免疫小鼠后可诱导特异性抗体产生,CD4+淋巴细胞增殖不明显,而CD8+淋巴细胞则显著增殖及对弓形虫攻击感染有一定的保护作用。
- 谢荣华吴翔范久波舒衡平蒋立平谭逵张琼
- 关键词：弓形虫毕赤酵母菌接种免疫
- 弓形虫真核表达质粒pcDNA3/wx2的构建与鉴定
- 2007年
- 目的构建弓形虫新基因wx2的真核表达质粒,以其做为弓形虫DNA疫苗研究其保护性。方法PCR扩增出编码新基因wx2ORF,用EcoRI/XhoⅠ分别对扩增产物和pcDNA3进行双酶切,将wx2ORF定向克隆到pcDNA3的EcoRI/XhoⅠ位点,对重组质粒进行PCR,双酶切初步鉴定后做序列测定。结果特异扩增出预期的wx2ORF片段,大小为570bp左右,扩增产物经双酶切后成功连接到pcDNA3中,经PCR,双酶切及序列测定表明重组质粒中含有wx2读框。结论成功构建弓形虫真核表达质粒pcDNA3/wx2。
- 吴翔汪世平舒衡平谭逵张琼
- 关键词：弓形虫DNA疫苗
- MIC3-EGFP融合蛋白真核表达质粒的构建及其在COS-7细胞中的表达被引量：1
- 2008年
- 目的:构建以绿色荧光蛋白(greenfluorescenceprotein,GFP)为报告基因的重组表达质粒pEGFP-C2-MIC3并检测MIC3-EGFP融合蛋白其在COS-7细胞中的表达及定位。方法:通过基因重组的方法构建pEGFP-C2-MIC3重组真核表达质粒,并通过酶切和基因测序鉴定。脂质体法转染体外培养的COS-7细胞,转染后24h在活细胞状态下用倒置荧光显微镜直接观察MIC3-EGFP融合蛋白在COS-7细胞中的分布。结果:PCR检测,酶切鉴定及测序证实目的基因MIC3正确连接到pEGFP-C2的多克隆位点。pEGFP-C2-MIC3重组体转染COS-7后,在细胞质表达。结论:成功地构建了pEGFP-C2-MIC3融合蛋白真核表达质粒,在COS-7细胞中获得表达。
- 张琼谭逵蒋立平谢荣华范久波舒衡平吴翔
- 关键词：刚地弓形虫
- 弓形虫P24基因敲除质粒的构建及缺陷型虫株建立方法的初步研究
- 研究目的:
建立弓形虫P24基因缺陷型虫株,并对缺陷型虫株建立的条件进行探索。
研究方法:
/(1/)弓形虫P24基因敲除转染质粒pGB//P5-P3的构建
根据TgP24基因序列...
- 谭逵
- 关键词：弓形虫电穿孔基因敲除
- 文献传递
