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弓形虫和乙型肝炎病毒混合核酸疫苗的研究Ⅱ.pcDNA3-HBsAg-GRA1在COS-7细胞中的表达及鉴定被引量：5: 2005年; 目的　鉴定pcDNA3 HBsAg GRA1在哺乳动物细胞内是否表达目的蛋白。方法　提取pcDNA3 HBsAg GRA1质粒 ;体外培养COS 7细胞 ;pcDNA3 HBsAg GRA1经脂质体转染体外培养的COS 7细胞 ;取转染后的细胞培养上清进行SDS PAGE ,Western blot鉴定。结果　成功将pcDNA3 HBsAg GRA1转染入COS 7细胞。转染的细胞能高效表达分子为 4 7kD分泌性融合蛋白 (HBsAg GRA1)。HBsAg GRA1能同时被HBsAb阳性人血清及弓形虫免疫兔血清所识别。结论　pcDNA3 HB sAg GRA1在体外培养的COS 7细胞中高效表达与预期分子量大小相同 ,且具有免疫学活性的融合蛋白。; 王丹静舒衡平秦志强蔡力汀吴翔蒋立平; 关键词：COS-7细胞弓形虫

随机肽库筛选弓形虫特异性抗原表位诱导保护性免疫的研究被引量：6: 2003年; 目的　从噬菌体随机肽库中筛选出模拟弓形虫特异性抗原表位的短肽分子 ,并探讨其对弓形虫的保护性效果。方法　以纯化的弓形虫免疫兔血清IgG为配基 ,亲和筛选法富集特异性噬菌体 ,随机挑取噬菌体克隆用夹心ELISA法和Dot-ELISA法检测其特异性 ,混合 4个阳性克隆免疫小鼠 ,1月后攻击感染 ,观察小鼠发病时间和死亡时间。结果　经 3轮筛选 ,特异性噬菌体得到了有效富集 ,第 3轮洗脱噬菌体的产量为第 1轮的 16 7倍 ,随机挑取 2 7个噬菌体经Dot -Bloting和夹心ELISA法检测 ,有 2 4个能与弓形虫免疫兔血清及单克隆抗体特异反应。用致死量弓形虫攻击感染经阳性克隆免疫的小鼠 ,存活时间明显长于对照组。结论　免疫筛选噬菌体随机多肽库可获得具有保护性的弓形虫抗原表位 ,为弓形虫疫苗研制提供了新途径。; 吴翔蒋立平蔡力汀舒衡平张祖萍沈杰; 关键词：随机肽库弓形虫特异性抗原表位保护性免疫

优化的日本血吸虫Sj16^(AA)蛋白的原核表达: 2018年; 目的 Sj16蛋白是从日本血吸虫分泌物中分离出的一种具有免疫调节功能的蛋白质,具有诱导器官移植免疫耐受的潜力。但是,在用传统方法合成时,其表达量低,可溶性较差,影响了其生物活性。该实验拟优化Sj16^(AA)的合成方法,为进一步研究其功能提供条件。方法在Sj16蛋白的DNA序列基础上,进行特定位点的突变修饰,同时针对大肠杆菌表达系统优化密码子。将修饰后的Sj16^(AA)基因定向克隆入pMal-c2X质粒,转入BL21(DE3)菌表达,摸索不同条件下Sj16^(AA)的表达情况。结果成功制备目的基因片段与载体的连接产物pMal-c2X-Sj16^(AA),转化后的BL21/DE3菌经IPTG诱导可表达与MBP融合的蛋白(约58 kDa),抗MBP抗体能特异性识别该蛋白。结论相较于传统合成方法,经优化的Sj16^(AA)蛋白表达量较高,可溶性较好,能够更好地应用于器官移植免疫相关的基础和临床研究。; 黄叶红阳敏彭博李俊辉刘洪庄权吴翔舒衡平明英姿; 关键词：血吸虫免疫调节原核表达

乙肝病毒HBx-d382与HBx-d431突变体特异性抗体检测方法的建立及临床应用被引量：1: 2014年; 目的建立检测乙肝病毒X基因突变体HBx-d382和HBx-d431特异性抗体的方法,探讨其在诊断HBV相关性肝细胞癌中的应用价值。方法通过生物信息和多肽合成的方法,制备HBx-d382和HBx-d431特异性多肽抗原。采用间接ELISA法对正常人和慢性乙肝病毒感染者和肝细胞癌病人血清中抗HBx-d382和抗HBxd431特异性抗体进行检测。结果肝细胞癌病人血清中抗HBx-d382和抗HBx-d431抗体的阳性率均高于正常人、慢性乙肝病毒感染者(P<0.05),慢性乙肝病毒感染者抗HBx-d382和抗HBx-d431抗体的阳性率高于正常人(P<0.05)。慢性乙肝病毒感染者HBsAg(+)/HBeAb(+)/HBcAb(+)模式抗HBx-d382阳性率明显低于HBsAg(+)/HBeAg(+)/HBcAb(+)模式和HBsAg(+)/HBcAb(+)模式(P<0.05),而抗HBx-d431和抗HBxP阳性率在这些血清学模式之间无显著性差异(P>0.05)。结论抗HBx-d382和抗HBx-d431是乙肝病毒感染的一种特异性抗体,可以用于HBV携带者及慢性乙肝病人的监测,对预测肝细胞癌的发生有一定的意义。; 祝玲玲朱平安蔡兰兰金娴施培瑶吴翔; 关键词：乙肝病毒X基因突变体特异性抗体 ELISA

以转化医学为向导的人体寄生虫学教学被引量：1: 2013年; 人体寄生虫学在医学本科生教育层面的教学,要怎样顺应转化医学发展的潮流、把握转化医学提供的创新机遇,在深入学习、体会转化医学基本内函和创新启示的基础上,应运一系列有效措施,改进医学本科生人体寄生虫学教学现状,提升该课程的教学质量,仍是需认真思考和协同攻关的研究课题。本文探讨了人体寄生虫学所涉及转化医学的一些相关问题。; 李跃辉杨林飞舒衡平吴翔; 关键词：人体寄生虫学教学

PBL教学法在医学寄生虫学教学中的几点体会被引量：6: 2008年; 目前全国高等医学院校医学寄生虫学学时大大减少,有的院校列为考查课,有的列为选修课。在此情况下,医学寄生虫学实验所占学时更是少之又少,如何利用好有限课时,使学生最大限度地吸收、掌握教学内容,已成为摆在高校师生面前的一道难题。传统的教学方法以讲授为主,容易忽视学生学习的主动性和积极性。而应用了PBL(problem based learning)教学法,其基本要点是以学生为中心、基于问题、综合地、相互合作和交互式地学习,有助于培养和提高学生在自学、实验技术、团队合作、分析问题和解决问题等方面的能力,激发学生学习的积极性和主动性。; 吴翔谭逵张琼官剑武舒衡平; 关键词：医学寄生虫学教学方法 PBL教学

编码弓形虫致密颗粒抗原-1(GRA1)质粒DNA免疫小鼠诱导抗弓形虫感染的保护性(英文)被引量：8: 2005年; 目的构建真核表达质粒pcGRA1,并观察其免疫小鼠的保护性。方法经PCR从cDNA克隆中扩增出GRA1编码基因,定向克隆入pcDNA3的EcoRⅠ/XhoⅠ位点,从而获得pcGRA1。用限制性内切酶消化、PCR及序列测定对该重组质粒进行鉴定。将100μg质粒于小鼠左后腿DNA肌注,于注射后2周和4周各加强1次;分别观察小鼠体内的特异性抗体滴度、GRA1基因在小鼠体内的分布、GRA1在肌细胞的表达以及免疫小鼠对弓形虫强毒株RH速殖子攻击后的保护性。结果DNA序列测定结果表明,将573bp的GRA1编码阅读框定向克隆到pcDNA3EcoRⅠ/XhoⅠ位点,成功构建了重组质粒pcGRA1;免疫小鼠血清中检测到特异性IgG;不同组织DNA为模板特异地扩增出GRA1编码基因;IFA检测pcGRA1免疫鼠肌细胞呈阳性反应;弓形虫RH株速殖子攻击感染pcGRA1免疫鼠,其存活时间长于对照组。结论重组质粒pcGRA1免疫小鼠可诱导特异性免疫反应,对弓形虫强毒株的攻击感染具有一定的保护性。; 蔡力汀舒衡平王丹静蒋立平吴翔; 关键词：弓形虫 DNA疫苗

大鼠感染血清免疫筛选弓形虫速殖子cDNA文库被引量：6: 2003年; 目的为弓形虫病疫苗的研制提供新的抗原分子.方法用弓形虫RH株速殖子感染大鼠,分离其血清作为探针筛选弓形虫cDNA文库,对阳性克隆的插入片段分别进行PCR扩增及DNA序列测定.结果从cDNA文库4×105个噬菌斑中筛选出13个阳性克隆,其插入片段大小分别为0.45～2.4kb.对L1、L2、L4和L5四个克隆进行测序,将所得序列查询基因库,结果,克隆L2与弓形虫P24主要抗原基因序列相同,L4与蔗糖丙酮酸磷酸激酶具有同源性,L1无任何相匹配的序列,为未曾报告过的新基因(GenBank登录号为AY180109),命名为T.g-R1.T.g-R1编码134个氨基酸的非跨膜蛋白.PROSCAN分析显示T.g-R1含有2个蛋白激酶C磷酸化位点,2个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点,1个肉豆酸酰化位点,1个微体细胞C端靶信号.L5为一小片段,无完整编码读框.结论阳性克隆的筛选和鉴定为抗弓形虫病疫苗的研制提供又一途径.; 蒋立平吴翔蔡力汀王丹静舒衡平; 关键词：CDNA文库免疫筛选 PCR扩增 DNA序列测定

弓形虫酵母表达质粒pPIC9K-GRA1的构建及鉴定被引量：3: 2007年; 目的构建弓形虫致密颗粒抗原-1(GRA1)的酵母表达质粒,为进一步研究GRA1蛋白功能奠定基础。方法PCR扩增编码GRA1目的基因,用EcoRⅠ/NotⅠ分别对扩增产物和酵母表达质粒pPIC9K进行双酶切,将GRA1定向克隆到pPIC9K的EcoRⅠ/NotⅠ位点,对重组质粒进行PCR,双酶切初步鉴定后做序列测定。结果特异扩增出预期的GRA1片段,大小为573 bp,扩增产物经双酶切后成功连接到pPIC9K中,经PCR,双酶切及序列测定证明重组质粒中含有GRA1读框。结论成功构建弓形虫GRA1酵母真核表达质粒。; 谢荣华吴翔舒衡平蒋立平范久波谭逵张琼; 关键词：刚地弓形虫

弓形虫新基因表位疫苗质粒的构建及鉴定被引量：7: 2007年; 目的构建两个弓形虫新基因2B9G1、7C3-C3的表位疫苗质粒,为阐明表位疫苗的保护性奠定基础。方法采用生物信息学方法对新基因2B9G1、7C3-C3进行表位预测,PCR扩增基因中编码3个表位的片段W2b、W2a和W4a,连接入pcDNA3,转入DH5α,挑阳性菌落进行PCR、酶切和测序鉴定;同法将W2a、W4a分别克隆入pcDNA3-W2b载体中W2b片段下游,再将W4a克隆入pcDNA3-W2b2a载体中W2a片段下游。结果经PCR、酶切鉴定及序列测定,W2b、W2a和W4a 3个片段分别插入pcDNA3预期位置;W2a和W4a片段分别插入pcDNA3-W2b预期位置;W4a片段插入pcDNA3-W2b2a预期位置。结论成功构建单表位、双表位、多表位疫苗质粒pcDNA3-W2b、pcDNA3-W2a、pcDNA3-W4a、pcDNA3-W2b2a、pcDNA3-W2b4a、pcDNA3-W2a2b4a。; 范久波吴翔谭逵谢荣华张琼蒋立平舒衡平; 关键词：弓形虫新基因表位疫苗

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