王琰
- 作品数：160 被引量：557H指数：14
- 供职机构：中国人民解放军更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金军队医药卫生科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术电子电信更多>>
- 抗TNF-α人-鼠嵌合抗体的构建及表达被引量：2
- 2000年
- 目的 :构建和表达抗TNF α人 鼠嵌合抗体。方法 :将抗TNF α鼠单抗Z8的轻、重链可变区基因插入到含有人κ链和IgG1重链恒定区基因的真核细胞表达载体中 ,分别构建轻、重链分开表达和共同表达的人 鼠嵌合抗体真核表达载体 ,转染真核细胞 ,通过ELISA、RT PCR、免疫印迹检测TNF α的活性。用L92 9细胞检测嵌合抗体体外中和TNF α的活性。结果 :ELISA鉴定结果表明该嵌合抗体与TNF α特异性结合 ;PT PCR结果显示转染后细胞系有人 鼠嵌合抗体mRNA的转录 ;免疫印迹结果证实有人IgG蛋白的表达 ;体外中和实验证明此嵌合抗体能中和TNF α对L92 9细胞的毒性。结论
- 周丽君陈晓穗王欲晓朱迎春张海荣谢帮铁王琰
- 关键词：TNF-Α人-鼠嵌合抗体基因表达
- 抗-HBs基因水平的研究被引量：1
- 1997年
- 本研究应用ＲＴ－ＰＣＲ、ＤＮＡ－ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ等分子生物学技术检测不同人群中针对一株抗－ＨＢｓ优势克隆的基因水平。发现慢性乙肝（ＨＢｓＡｇ阳性）患者中检出率为２０．６９％（６／２９），明显低于乙肝疫苗注射后人群的６２．９６％（１７／２７），Ｐ＜０．０１；而与未接种过乙肝疫苗组的检出率相比则无明显差异（Ｐ＞０．０５），后者阳性率为２１．４２％。这一结果提示：慢性乙肝患者与乙肝疫苗注射后相比，在抗－ＨＢｓ基因水平上存在差异，可能有抗－ＨＢｓ克隆的缺失或转录、ｍＲＮＡ翻译合成抗－ＨＢｓ的异常。本工作中对人群中抗－ＨＢｓ基因研究的尝试，为乙肝免疫耐受的研究提供了新的线索，同时也为乙肝的基因治疗提供了一定依据。
- 张春英仝文斌冯百芳王琰陶其敏
- 关键词：免疫耐受聚合酶链反应
- 半合成抗体库的构建及鉴定被引量：24
- 1999年
- 目的构建半合成抗体库，不经免疫制备抗体。方法通过ＰＣＲ法，从人胎肝ＤＮＡ扩增基因组ＶＨ段基因，从Ｆｄ基因制备含有不同长度随机化ＣＤＲ３的ＦＲ３－ＣＤＲ３－Ｊ－ＣＨ１片段，然后用重叠ＰＣＲ法构建Ｆｄ库，与人轻链基因库组合构建成半合成抗体库。结果通过各种组合多次建库，获得总容量为４×１０８的半合成抗体库，其Ｆｄ段和轻链基因的重组率均大于９０％，Ｆａｂ表达率为５０％。挑选２０个克隆测定ＣＤＲ３序列符合所设计的随机序列，用三种不同抗原进行筛选均得到了特异性噬菌体抗体。
- 王琰化冰刘群英陈宇萍朱迎春
- 关键词：基因文库抗体生成
- 人源性重组抗角蛋白基因工程抗体及其制备方法
- 一种人源性重组抗角蛋白基因工程抗体，其基因序列在结构上属于Fab片段，包括轻链基因和重链Fd段基因。该抗体的制备方法，包括以下主要步骤：a、从人源性噬菌体抗体库中筛选抗角蛋白噬菌体抗体；b、利用基因工程手段，获得可溶性表...
- 王刚刘玉峰王琰
- 文献传递
- 抗原表位定向选择的人源抗TNF-α Fab的鉴定被引量：4
- 1999年
- 目的对通过抗原表位定向选择技术（ＥＧＳ）所筛选到的２株人源化ＴＮＦ－α抗体Ｆａｂ段进行分析鉴定。方法测定可变区基因的序列，用亲本鼠单抗Ｚ８进行竞争ＥＬＩＳＡ，用Ｌ９２９细胞检测其体外中和ＴＮＦ－α的活性，并用硫氰酸铵洗脱法比较与亲本鼠单抗的亲和力。结果基因测序表明２株抗体ＶＨ相同，属人ＶＨⅠ亚群；Ｖκ分别属人ＶκⅠ、ＶκⅢ亚群；竞争抑制实验表明所获人源抗体片段与亲本鼠源抗体是针对ＴＮＦ－α的同一抗原表位；体外中和实验证明此抗体片段能中和ＴＮＦ－α对Ｌ９２９细胞的毒性；该抗体片段的亲和力略低于原鼠单抗Ｚ８。
- 王卓智王琰李竞刘群英化冰陈宇萍朱迎春李振甫董志伟
- 关键词：肿瘤坏死因子EGS
- 一种抗蓖麻毒蛋白的抗体
- 本发明公开了一种抗蓖麻毒蛋白的抗体。本发明所提供的抗蓖麻毒蛋白的抗体，包括轻链可变区和重链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列为序列表中序列1的自氨基末端第134－259位氨基酸残基，所述轻链可变区的氨基酸序列为序列表中序...
- 周丽君王欲晓乔媛媛王玉霞王琰贾蓓媛
- 文献传递
- 抗p185单抗5E12Fab段基因的克隆及表达被引量：1
- 2005年
- 目的克隆抗p185单抗5E12的Fab段基因并在原核细胞进行表达。方法用逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR),以可变区第一骨架区的通用引物从分泌抗p185单抗的杂交瘤细胞系5E12中克隆Fd段和κ链的基因,重组到Fab表达载体中,在大肠杆菌中表达噬菌体抗体和可溶性Fab;根据前导肽序列设计引物,通过PCR介导的定点突变将V区基因氨基端序列恢复为5E12的原始序列;以NIH3T3/erbB-2细胞ELISA法、免疫组化法等进行特异性鉴定。结果以第一骨架区的通用引物从小鼠杂交瘤细胞5E12中克隆到Fd段和κ链的基因,在大肠杆菌中表达出Fab段抗体但无特异性抗原结合活性,分别将Fd段和κ链V区基因的氨基端序列矫正为亲本单抗的原始序列后,恢复了Fab段的抗原结合活性。单独恢复Fd段可变区氨基端序列可恢复抗原结合活性。但同时恢复κ链后活性却有所下降。结论成功构建了抗p185小分子抗体Fab并进行功能性表达,为进一步构建抗p185鼠单抗其他小分子抗体及其人源化改造打下基础;进一步证实抗体氨基端序列对抗体活性的重要性,为今后以PCR方法构建小分子抗体的工作提供了有益的借鉴。
- 张国民陈宇萍王琰乔媛媛安云庆
- 关键词：FAB可变区基因
- 重组人Fab金属螯合层析法纯化条件的研究被引量：8
- 1997年
- 在重组人Fab (rhFab)表达载体的羧基端插入六个组氨酸 ,使其对金属螯合层析介质产生特异性吸附 ,可用金属螯合亲和层析法进行分离纯化 .采用自制金属 (铜、锌金属离子 )螯合层析介质 ,以 pH和咪唑两种洗脱方法 ,对rhFab段的纯化效果进行了探讨 .结果显示 :铜离子螯合层析介质比锌离子螯合层析介质对rhFab的亲和能力更强 ;pH洗脱方法的重复性优于咪唑法 ;金属铜离子螯合层析法对rhFab进行一步纯化可得到纯度大于
- 朱迎春王琰刘群英化冰高荣凯
- 关键词：组氨酸金属螯合层析
- 识别9E10单抗的噬菌体短肽的免疫学特性分析被引量：8
- 1997年
- 为分析从单价表达短肽库中筛选到的两种克隆的免疫学特性，将单价噬菌体短肽表达载体中的ｇⅢ片段切除，在大肠杆菌中表达可溶性短肽分子，ＥＬＩＳＡ竞争抑制实验证实，可溶性短肽分子可竞争抑制９Ｅ１０单抗与Ｃ－ｍｙｃ＋肽结合。进一步将噬菌体短肽的单价表达载体改建为多价表达载体，分别免疫兔和小鼠，制备免疫抗血清，ＥＬＩＳＡ实验和竞争抑制实验结果证实，两种克隆的免疫抗血清均可与９Ｅ１０单抗所识别的抗原表位结合，表明这两个克隆尽管在序列上与原自然抗原不同，但其在结构上真正模拟了ｃ－ｍｙｃ＋肽的抗原表位，在体内可诱发相似的免疫反应。
- 李全喜王琰李竟王雅明王雅明王力民徐建军董志伟
- 关键词：噬菌体分子识别
- 抗人TNF-α单抗基因的克隆及鉴定被引量：3
- 1999年
- 目的克隆抗人ＴＮＦ－α鼠单抗得可变区基因以构建人－鼠嵌合抗体表达载体。方法采用ＲＴ－ＰＣＲ技术，以前导肽序列的引物从１个分泌抗人ＴＮＦ－α的鼠单抗杂交瘤细胞系中克隆抗体轻链、重链可变区基因（Ｖκ，ＶＨ），在大肠杆菌中表达Ｆａｂ段核实其功能活性。结果分别得到了２个Ｖκ和２个ＶＨ基因。ＤＮＡ序列测定表明，其中１个轻链可变区基因为骨髓瘤细胞系中固有的无功能基因。１个重链可变区基因经原核系统表达测活表明无抗体活性。另一个轻链和重链可变区基因的成熟蛋白编码部分与从第一骨架区引物所克隆的、可在大肠杆菌表达出抗体活性的Ｖκ、ＶＨ序列相符。将该轻链、重链基因分别克隆到了人－鼠嵌合轻链、重链表达载体中。结论通过原核表达系统核实。
- 骆训懿王琰王欲晓王卓智
- 关键词：人TNF-Α基因单克隆抗体
