王欲晓
- 作品数：76 被引量：130H指数：6
- 供职机构：中国人民解放军海军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 重组人铜锌超氧化物歧化酶对电离辐射损伤小鼠免疫细胞的影响(论著)
- 1997年
- 目的：探讨电离辐射对免疫细胞的影响及重组人铜锌超氧化物歧化酶（ｒｈＣｕＺｎＳＯＤ）的抗辐射作用。方法：观察６０Ｃｏγ射线５～７Ｇｙ照射前后不同时段给予ｒｈＣｕＺｎＳＯＤ对小鼠免疫细胞的影响。结果：电离辐射对小鼠免疫细胞有明显的损伤作用。与照射对照组比较，ｒｈＣｕＺｎＳＯＤ可减轻电离辐射对小鼠免疫细胞的影响，其作用包括增强脾Ｔ淋巴细胞对刀豆蛋白Ａ诱导的增殖反应，提高脾自然杀伤细胞的活性，升高全脾淋巴细胞及外周血白细胞和淋巴细胞的数量。辐射前后给药组的效果优于辐射前或辐射后给药组。结论：ｒｈＣｕＺｎＳＯＤ对防止免疫细胞的辐射损伤有一定作用。
- 陈晓穗骆训懿周丽君谢邦铁王欲晓
- 关键词：铜锌超氧化物歧化酶免疫细胞
- 抗TNF-α人-鼠嵌合抗体的构建及表达被引量：2
- 2000年
- 目的 :构建和表达抗TNF α人 鼠嵌合抗体。方法 :将抗TNF α鼠单抗Z8的轻、重链可变区基因插入到含有人κ链和IgG1重链恒定区基因的真核细胞表达载体中 ,分别构建轻、重链分开表达和共同表达的人 鼠嵌合抗体真核表达载体 ,转染真核细胞 ,通过ELISA、RT PCR、免疫印迹检测TNF α的活性。用L92 9细胞检测嵌合抗体体外中和TNF α的活性。结果 :ELISA鉴定结果表明该嵌合抗体与TNF α特异性结合 ;PT PCR结果显示转染后细胞系有人 鼠嵌合抗体mRNA的转录 ;免疫印迹结果证实有人IgG蛋白的表达 ;体外中和实验证明此嵌合抗体能中和TNF α对L92 9细胞的毒性。结论
- 周丽君陈晓穗王欲晓朱迎春张海荣谢帮铁王琰
- 关键词：TNF-Α人-鼠嵌合抗体基因表达
- 抗CD147人源单链抗体的筛选及生物特性初步鉴定被引量：1
- 2018年
- 目的利用噬菌体展示技术筛选特异性抗CD147人源单链抗体(human anti-CD147 sc Fvs)并进行生物特性鉴定。方法以真核表达的CD147蛋白为抗原,采用"酸洗脱法"对库进行4轮富集性筛选、以ELISA法对筛选克隆的结合活性进行测定,以竞争ELISA和Western blot实验对获得的噬菌体抗体和可溶性sc Fv的特异性进行鉴定,通过DNA测序核实特异性sc Fvs的人源性及其亚群,以硫氰酸盐洗脱法对获得的抗体进行相对亲和力分析。结果经过4轮的富集性筛选,共筛出4个与CD147特异性结合的阳性克隆,其中3个获得可溶性表达,竞争抑制及Western blot实验证实其能与CD147特异性结合。DNA序列分析证实3个阳性克隆具有不同的基因型,三者的轻链可变区分别属于V_λⅠ、V_κⅡ、V_λⅢ亚群,重链可变区分别属于V_HⅠ、V_HⅢ、V_HⅢ亚群。硫氰酸盐洗脱法测出13号、15号和168号3个human anti-CD147 sc Fvs的亲和力分别为0.20 mol/L、0.35 mol/L和0.6 mol/L。结论成功从大容量噬菌体抗体库中筛选到特异性human anti-CD147 sc Fvs,为进一步研究该抗体的功能及应用前景奠定了基础。
- 刘妍陈秀秀王欲晓丁立付凯飞周丽君
- 关键词：噬菌体展示技术CD147
- 一种抗蓖麻毒蛋白的抗体
- 本发明公开了一种抗蓖麻毒蛋白的抗体。本发明所提供的抗蓖麻毒蛋白的抗体，包括轻链可变区和重链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列为序列表中序列1的自氨基末端第134－259位氨基酸残基，所述轻链可变区的氨基酸序列为序列表中序...
- 周丽君王欲晓乔媛媛王玉霞王琰贾蓓媛
- 文献传递
- 抗人TNF-α单抗基因的克隆及鉴定被引量：3
- 1999年
- 目的克隆抗人ＴＮＦ－α鼠单抗得可变区基因以构建人－鼠嵌合抗体表达载体。方法采用ＲＴ－ＰＣＲ技术，以前导肽序列的引物从１个分泌抗人ＴＮＦ－α的鼠单抗杂交瘤细胞系中克隆抗体轻链、重链可变区基因（Ｖκ，ＶＨ），在大肠杆菌中表达Ｆａｂ段核实其功能活性。结果分别得到了２个Ｖκ和２个ＶＨ基因。ＤＮＡ序列测定表明，其中１个轻链可变区基因为骨髓瘤细胞系中固有的无功能基因。１个重链可变区基因经原核系统表达测活表明无抗体活性。另一个轻链和重链可变区基因的成熟蛋白编码部分与从第一骨架区引物所克隆的、可在大肠杆菌表达出抗体活性的Ｖκ、ＶＨ序列相符。将该轻链、重链基因分别克隆到了人－鼠嵌合轻链、重链表达载体中。结论通过原核表达系统核实。
- 骆训懿王琰王欲晓王卓智
- 关键词：人TNF-Α基因单克隆抗体
- 从大容量抗体库中筛选抗蓖麻毒蛋白抗体被引量：3
- 2007年
- 目的:从天然的单链大容量噬菌体抗体库中筛选特异性的抗蓖麻毒蛋白的人源抗体。方法:将蓖麻毒蛋白固定在抗原管上,通过5轮"吸附-洗脱-扩增"过程从大容量抗体库中筛选到特异性抗体,并转染到HB2151菌中,经IPTG诱导,制备抗蓖麻毒蛋白的可溶性单链抗体。结果:经过5轮筛选,获得40个与蓖麻毒蛋白结合的阳性克隆,其中12个特异性结合的克隆,指纹分析有7种不同的可变区片段;经过基因测序,分析了可变区基因的亚群。并将其制备成可溶性的抗体。结论:利用单链大容量抗体库获得抗蓖麻毒蛋白的噬菌体抗体并且成功制备成可溶性抗体,为今后的研究和应用奠定基础。
- 乔媛媛王欲晓周丽君赵宇王玉霞赵晓航王琰
- 关键词：噬菌体抗体
- 用于大容量噬菌体抗体库的表达载体的构建及鉴定被引量：7
- 2003年
- 目的:构建一个适用于大容量抗体库的噬菌体抗体表达载体。方法:通过插入人工合成寡核苷酸、PCR介导的定位突变等技术,将载体p3MH进行改造,使之更适于构建大容量抗体库。通过噬菌体抗体的表达、ELISA及细胞内重组试验鉴定所获得的表达载体。结果:通过插入loxp511和loxp序列,将Lac启动子更换为阿拉伯糖启动子、改造抗体基因克隆位点等,将p3MH改造成pAL。经检测pAL可以表达具有功能的Fab噬菌体抗体,其表达调控更为严密,可以在cre+细菌胞内发生预期的loxp-cre介导的定位重组。结论:所获得的表达载体pAL适用于构建大容量Fab噬菌体抗体库。
- 王琰王欲晓陈晓穗化冰刘晓琳
- 关键词：PAL
- 抗银环蛇毒素人源单链抗体的筛选及鉴定被引量：3
- 2010年
- 目的从大容量天然噬菌体抗体库中筛选抗银环蛇毒素的人源单链抗体(ScFv),并进行鉴定。方法以银环蛇毒素为靶抗原,通过"吸附-洗脱-扩增"过程从大容量天然噬菌体抗体库中筛选特异性抗体,采用ELISA法检测其结合活性;与抗蛇毒素马血清进行竞争抑制ELISA,检测其中和活性;DNA指纹图谱分析和序列测定确定其抗体类型。结果经4轮筛选,获得了5株对银环蛇毒素具有结合活性的阳性克隆;其中1株结合活性高的单克隆抗体中和活性抑制率可达8.5%;DNA指纹图谱显示为3个不同的ScFv基因,序列分析表明其重链可变区均属于VHⅠ型,轻链可变区分别为VκⅡ、VκⅢ和VλⅡ。结论利用噬菌体抗体库技术获得了具有中和活性的抗银环蛇毒素人源单链抗体。
- 王欲晓周丽君张海荣曲佳乔媛媛赵晓航高荣凯
- 关键词：细菌噬菌体抗体
- 蛋白Ⅲ-α-银环蛇毒素融合蛋白表达质粒的构建及表达
- 2011年
- 目的构建适合选择感染性噬菌体(Selectivelyinfectivephage,SIP)技术筛选的蛋白Ⅲ-α-银环蛇毒素(α-Bungarotox-ins,α-BTXs)融合蛋白表达质粒。方法从银环蛇毒腺中提取总RNA,RT-PCR扩增α-BTXs基因,插入表达载体pTTMIN,转化E.coli XL1-Blue,IPTG诱导表达。经SDS-PAGE、Western blot及竞争抑制ELISA法检测融合蛋白的表达。结果获得的α-BTXs基因序列与相关报道完全一致;融合蛋白表达质粒构建正确;融合蛋白的表达量可达菌体总蛋白的20%,可与抗蛇毒素血清发生特异性反应,且保持了α-BTXs的抗原性。结论成功构建了蛋白Ⅲ-α-BTXs融合蛋白表达质粒,并在大肠杆菌中表达了融合蛋白,为利用SIP技术筛选抗α-BTXs人源抗体奠定了基础。
- 高荣凯王欲晓张海荣周丽君曲佳
- 关键词：Α-银环蛇毒素重组融合蛋白质类
- 抗HBs人V_H基因中异常序列对抗体活性影响的研究被引量：1
- 2000年
- 目的 从噬菌体抗体库中克隆到 1株VH 第 3骨架区中含有异常序列的抗HBs人Fab基因 ,探讨该VH 基因中异常序列对抗体活性的影响。方法 采用重叠PCR方法去除了这段异常序列 ,构建表达载体 ,转化大肠杆菌表达出抗HBsAg噬菌体抗体和可溶性Fab ,测定了它们与抗原的结合活性。结果 与原抗体比较 ,改造后的抗体与抗原的结合活性明显下降 ,分子模建提示这段异常序列对VHCDR1和CDR2的部分氨基酸残基的位置有一些影响 ,测定改造前Fab的亲和力约为 0 5 5×10 9mol/L ,改造后Fab因抗原结合活性过低 ,无法检测其亲和力。结论 提示这段异常序列在体内可能存在于该VH 之中。
- 陈晓穗朱迎春王欲晓顾维丰王琰
- 关键词：HBSAG分子结构
