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颈动脉粥样硬化患者MT2A-838G/C和MCP-1-2518G/A基因多态性分析被引量：1: 2013年; 目的:探讨苏南地区汉族人群MT2A-838G/C和MCP-1-2518G/A基因多态性与颈动脉粥样硬化的相关性。方法:采用碱基淬灭探针技术检测103例有颈动脉斑块患者和46例正常对照的MT2A基因-838位点和MCP-1基因-2518位点基因型分布及基因频率,并评价基因多态性与颈动脉粥样硬化易感性之间的相关性。结果:在对照组和病例组中,MT2A 3种基因型GG、GC、CC的频率分别为52.17%、36.96%、10.87%和50.49%、36.89%、12.62%(P>0.05),等位基因G、C的频率分别为70.65%、29.35%和68.93%、31.07%(P>0.05);MCP-1 3种基因型AA、AG、GC在对照组和病例组中的频率分别为15.22%、52.17%、32.61%和20.39%、44.66%、34.95%(P>0.05),等位基因A、G的频率分别为41.30%、58.70%和42.72%、57.28%(P>0.05)。结论:MT2A-838G/C及MCP-1-2518G/A基因多态性可能不是苏南汉族人群发生颈动脉粥样硬化的独立危险因素。; 潘丽莉张俊魏江施媛萍冯悦华于洋罗光华; 关键词：颈动脉粥样硬化金属硫蛋白单核细胞趋化蛋白-1

高糖输注及罗格列酮干预对大鼠载脂蛋白M表达的影响: 2014年; 目的观察高浓度葡萄糖输注对大鼠载脂蛋白M（apoM）mRNA的表达的影响及罗格列酮干预的作用，并探讨相关机制。方法雄性SD大鼠随机分为5％葡萄糖组（对照组）、25％葡萄糖组（H组）、罗格列酮＋5％葡萄糖组（RN组）、罗格列酮＋25％葡萄糖组（RH组）4组。分两批独立的实验完成，一批应用高胰岛素．正常血糖钳夹（HEC）实验评价葡萄糖输注率（GIR），一批直接取肝脏提取总RNA，检测apoMmRNA表达水平及肝X受体途径（LXR）基因和PPAR-β/δ基因表达情况。结果葡萄糖和罗格列酮对GIR均有影响（均为P〈0．01），并且两者的交互作用差异有统计学意义（P〈0．01）。25％葡萄糖下调大鼠肝脏apoMmRNA表达（P〈0．05），而罗格列酮明显增高大鼠肝脏apoMmRNA的表达（P〈0．0001），但两者的交互作用差异无统计学意义（P〉0．05）。25％葡萄糖显著抑制大鼠肝脏LXR-β（P〈0．01）、SHP1（P〈0．01）、LRH1（P〈0．01）、ABCA1（P〈0．01）、PPAR．13／8（P〈0．01）基因的表达；而罗格列酮仅降低SHP1（P〈0．01）及ABCA1（P〈O．05）基因的表达。罗格列酮显著抑制正常大鼠肝脏ABCA1mRNA的表达（P〈0．05），但在高血糖状态下，罗格列酮则明显升高大鼠肝脏ABCA1mRNA水平（P〈0．01）。双因素方差分析表明罗格列酮和25％葡萄糖对大鼠肝脏ABCA1mRNA影响的交互作用差异有统计学意义（P〈0．01）。结论高浓度葡萄糖和罗格列酮对apoM的调节作用是相对独立的，高浓度葡萄糖有可能主要通过LRH1和（或）ABCA1途径下调apoM基因的表达。; 张俊施媛萍冯悦华潘丽莉牟琴峰张晓膺罗光华; 关键词：罗格列酮载脂蛋白M

肥胖儿童血清载脂蛋白A5水平与瘦素和空腹胰岛素的相关性研究被引量：7: 2013年; 选择79例肥胖和64名正常体重儿童，酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清载脂蛋白A5（ApoA5）和瘦素水平，放射免疫分析法（RIA）检测空腹胰岛素（FINS），采集身高、体重、腰围、血压、血脂、血糖等临床资料，计算稳态模型评估的胰岛素抵抗指数（HOMA．IR）。结果显示，肥胖组儿童瘦素、FINS水平均明显高于对照组[19．15（13．01～25．08）ng／ml对3．29（1．45～6．02）ng／ml和15．44（12．05—20．26）μg/L对10．12（8．60—12．60）μg/L，均P〈0．01]，ApoA5水平则低于对照组[134．5（105．9—172．7）ng／ml对205．9（164．3。265．3）ng／ml，P〈0．01]。相关性分析显示儿童血清ApoA5与瘦素、FINS呈显著负相关性（均P〈0．01）。; 张俊罗光华潘丽莉魏江施媛萍郑璐; 关键词：肥胖症载脂蛋白A5 瘦素空腹胰岛素

鉴定载脂蛋白M基因敲除小鼠的实时荧光定量PCR法的建立: 2015年; 目的建立新型的载脂蛋白M(apolipoprotein M,apo M)基因敲除小鼠的鉴定方法。方法根据荧光PCR原理,分别设计野生型和敲除型apo M基因的引物和探针,并通过6-羧基荧光素(FAM)和3H-吲哚菁染料(CY5)双荧光通道的扩增曲线判断小鼠的基因型。结果野生型小鼠仅在FAM通道有扩增曲线,敲除型小鼠仅在CY5通道有扩增曲线,杂合型小鼠则在FAM及CY5通道均有扩增曲线。结论建立的实时荧光定量PCR法经济、快速、简单、准确、易判断,适用于小鼠apo M基因型的鉴定。; 于洋郑璐梁云潘丽莉张俊魏江喻妙梅罗光华; 关键词：载脂蛋白M 基因型基因敲除实时荧光定量PCR

慢性阻塞性肺疾病患者人载脂蛋白M基因单核苷酸多态性检测方法的建立: 2017年; 人载脂蛋白M（apolipoprotein M,ApoM）基因定位于6号染色体短臂p21.31,其cDNA编码188个氨基酸序列,主要存在于人血浆高密度脂蛋白（high density lipoprotein,HDL）中,参与前β-HDL的形成,调节胆固醇的逆转运[1-2].另外,ApoM是1-磷酸鞘氨醇（sphingosine-1-phosphate,S1P）的生理性载体,ApoM结合S1P后,能够限制单核细胞黏附到血管内皮细胞从而起到抗炎作用[3].; 于洋张俊乔莹莹潘丽莉李巨章毛慧慧魏江张晓膺徐宁罗光华; 关键词：慢性阻塞性肺疾病患者载脂蛋白 M基因 6号染色体短臂 1-磷酸鞘氨醇高密度脂蛋白

双重荧光实时定量PCR法检测TNF-α mRNA表达水平被引量：2: 2015年; 目的:建立单管检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和内参GAPDH mRNA表达水平的双重荧光实时定量PCR方法。方法:脂多糖刺激小鼠巨噬细胞Ana-1后提取细胞RNA,经反转录合成c DNA,应用自行设计的不同荧光标记的TNF-α和GAPDH引物探针,经PCR扩增后,在FAM通道和CY5通道分别读取Ct值,同时应用基因测序技术对结果进行验证,并构建质粒标准品分析该方法的灵敏度和重复性。结果:双重荧光实时定量PCR法检测TNF-α的灵敏度达4×101拷贝/μL,检测线性范围可达6个数量级,批内和批间重复性好。结论:新方法消除了目的基因与内参的加样误差,节约成本,快速准确,适用于TNF-αmRNA的定量检测。; 姚霜郑璐于洋喻妙梅潘丽莉张俊冯悦华罗光华; 关键词：肿瘤坏死因子-Α GAPDH

双重实时荧光定量PCR检测人维生素D受体的方法学构建被引量：1: 2016年; 目的建立单管检测人维生素D受体（VDR）及甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）基因的双重实时荧光定量聚合酶链反应（dual real-time PCR）的方法。方法以GAPDH基因为内参,采用Primer Premier 5.0软件设计特异性引物及Taq Man探针,进行PCR扩增检测VDR基因。将VDR及GAPDH扩增产物片段纯化后克隆构建成重组质粒,作为定量检测基因表达的标准品,并用于分析该方法的灵敏度和重复性。结果 PCR扩增产物经测序分析证实为VDR及GAPDH特异性片段;该方法检测VDR与GAPDH灵敏度达40拷贝/μL;线性范围为4.00×10~1~4.00×10~5拷贝/μL;决定系数R2分别为0.998、0.999;扩增效率E分别为96.10%、85.15%;批内变异系数（CV）分别为0.09%~1.21%、0.35%~0.88%;批间CV分别为0.17%~0.51%、0.51%~2.46%。结论成功建立了单管检测人VDR及GAPDH的双重实时荧光定量PCR方法,且该方法特异性好、灵敏度高、可快速高通量检测VDR的相对表达量,有效缩短时间,减小实验误差。; 喻妙梅于洋张俊姚霜潘丽莉罗光华; 关键词：聚合酶链反应维生素D受体

双重荧光实时PCR法鉴定SRBⅠ基因敲除小鼠: 2015年; 目的建立一种双重荧光实时PCR鉴定B族Ⅰ型清道夫受体(SRBⅠ)基因敲除小鼠的方法。方法提取小鼠尾尖DNA,应用自行设计的鉴定野生型和敲除型SRBⅠ基因的引物和探针,经PCR扩增后,在FAM通道及CY5通道判断小鼠基因型。同时应用基因测序技术对结果进行验证,并构建质粒标准品分析该方法的灵敏度和重复性。结果仅在FAM通道出现典型S型扩增曲线的为SRBⅠ基因野生型小鼠,仅在CY5通道出现典型S型扩增曲线的为SRBⅠ基因敲除型小鼠,在两个通道都出现典型S型扩增曲线的为SRBⅠ基因杂合型小鼠。结果与DNA测序法吻合,检测野生型和突变型的灵敏度均达4×101拷贝/μL。结论新方法简单、快速、准确,适用于分型SRBⅠ基因敲除小鼠。; 潘丽莉郑璐张俊于洋姚霜喻妙梅冯悦华罗光华; 关键词：CD36 基因敲除

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