汪龚泽
- 作品数：15 被引量：9H指数：2
- 供职机构：三峡大学更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金湖北省高等学校优秀中青年科技创新团队计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HIV-1 Vif的克隆、表达与活性检测被引量：1
- 2010年
- 目的克隆HIV-1Vif基因,构建原核表达质粒,进行蛋白的表达及其生物学活性的检测。方法 PCR扩增Vif基因,并将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中,构建原核表达质粒pET28a(+)/Vif,进行双酶切及测序鉴定。获得的阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳和Western blot检测分析,利用亲和层析方法纯化Vif蛋白。利用Pull-Down方法检测HIV-1Vif与SH3(HCK)特异性结合活性。结果通过酶切和测序,结果表明重组质粒pET28a(+)/Vif构建正确。SDS-PAGE和Western blot结果鉴定了原核表达的Vif重组蛋白大小正确。纯化了蛋白Vif、SH3和GST。GST pull-down试验说明Vif和SH3蛋白具有体外特异性结合活性。结论成功地克隆、表达和纯化了Vif蛋白,Vif与SH3蛋白具有结合活性,为进一步研究针对Vif与SH3结合的药物筛选提供实验依据。
- 覃晓琳刘朝奇刘徽婷汪龚泽
- 关键词：HIV-1VIF
- PD-L1高表达细胞对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响
- ＜正＞PD-L1（Ligand of programmed death-1）作为免疫抑制性受体PD-1（Programmed death 1）的配体分子被发现广泛表达于多数肿瘤组织,并认为可能是肿瘤逃避免疫杀伤效应的机制...
- 王见之刘朝奇覃晓琳吕佰瑞汪龚泽
- 文献传递
- 鼠钙网蛋白单克隆抗体的制备
- 2011年
- 钙网蛋白（Calreticulin，CRT）是高度保守，普遍存在于哺乳动物细胞中的Ca2＋储存蛋白，位于内质网腔中，具有调节细胞凋亡、应激、心血管炎症反应等多种生理和病理生理过程的多功能蛋白。
- 汪龚泽刘朝奇
- 关键词：钙网蛋白单克隆抗体病理生理过程哺乳动物细胞CA2+功能蛋白
- 小鼠CRT-SPD1融合基因原核表达载体的构建和表达
- 2013年
- 目的:设计原核表达小鼠钙网蛋白(Calreticulin,CRT)与程序性死亡分子1(Programmed Death-1,PD1)的融合蛋白,用于肿瘤靶向治疗。方法:应用RT-PCR技术扩增小鼠CRT的N、P区基因及PD1胞外区cDNA序列,用一个Linker将两者连接起来,克隆至表达载体pET28a(+)上。将重组表达质粒pET28a(+)-CRT-SPD1转化入大肠杆菌BL21(DE3)内,IPTG诱导表达;用Ni柱亲和层析纯化蛋白,并进行SDS-PAGE、Western blot鉴定。结果:所得产物经SDS-PAGE检测后,在45 kDa处显示特异条带,最后经Western Blotting鉴定,所纯化蛋白能被CRT抗体和PD1抗体抗体识别。结论:获得较纯的融合蛋白,所构建的载体可为进一步研究两者的功能和免疫学特性及肿瘤的免疫治疗奠定了基础。
- 吴薇汪龚泽邹晓华王艳林刘朝奇
- 关键词：钙网蛋白程序性死亡分子蛋白纯化
- annexinA2基因片段的克隆、表达、纯化及多克隆抗体的制备被引量：4
- 2012年
- 目的:构建人源annexinA2基因片段的原核表达载体,表达并纯化蛋白,制备多克隆抗体。方法:从GenBank(BC093056.1)中获得人源annexinA2基因的cDNA序列并根据不含信号肽的编码序列设计引物,用PCR的方法扩增编码an-nexinA2基因部分序列,将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中表达annexinA2的蛋白。表达的蛋白产物利用切胶回收的方法纯化,用His抗体进行Western blot鉴定。用纯化的目的蛋白作为抗原免疫日本大耳白兔,获得annexinA2的抗血清,通过ELISA测定兔多克隆抗体的滴度。在CaSki细胞内采用细胞免疫荧光(CIF)和流式细胞术(FCM)检测内源annexinA2蛋白的表达,用于鉴定制备的多克隆抗体特异性。结果:通过双酶切及测序证实原核表达质粒pET28a(+)-annexinA2构建成功,可在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中诱导高表达,得到相对分子质量约28 000的annexinA2蛋白。纯化的蛋白免疫日本大白兔后,产生特异的高滴度的抗体(ELISA滴度达1∶640 000)。CIF和FCM结果显示抗血清与肿瘤细胞表达的annexinA2有高度特异的结合活性。结论:构建了annexinA2的原核表达质粒并获得高纯度的蛋白,免疫动物后,获得了特异、高效价的多克隆抗体,为人源annexinA2蛋白的生物学功能及肿瘤治疗的研究提供了实验基础。
- 聂纪芹汪龚泽刘朝奇
- 关键词：原核表达蛋白纯化多克隆抗体
- 小鼠钙网蛋白的原核表达和多克隆抗体的制备
- 2011年
- 钙网蛋白(calreticulin,CRT)是存在于哺乳动物细胞具有高度保守性和多种生物学活性的蛋白,为了更好的研究其生物学活性,本课题组通过PCR方法扩增CRT截短基因,将其克隆到原核表达载体PET-28a(+)中,经大肠杆菌表达并纯化CRT蛋白。以纯化的CRT蛋白抗原免疫BALB/c小鼠,制备多克隆的CRT血清。进一步采用Western blot、ELISA、流式细胞术等技术对制备的抗体进行初步鉴定。结果显示:原核表达重组质粒在大肠杆菌中能高效表达CRT蛋白;获得多抗血清应用Western blot鉴定几种细胞株中CRT,流式细胞术检测CRT的外翻现象。因此我们得到结论——成功制备了CRT蛋白及其抗体,并有很好的特异性,能识别人鼠两种源性的CRT。
- 汪龚泽刘朝奇杨建林聂纪芹
- 关键词：钙网蛋白原核表达抗体制备
- 一种肿瘤标志物钙网蛋白检测试剂盒的制备及应用
- 一种肿瘤标志物钙网蛋白检测试剂盒的制备及应用，属于基因工程和临床诊断领域。本发明应用重组CRT蛋白免疫BALB/c小鼠和新西兰大白兔制备了CRT的单克隆抗体、多克隆抗体，并建立了检测CRT最低量为0.3125ng/ml，...
- 刘朝奇吴薇杨建林汪龚泽
- 文献传递
- HIV-1P24蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备被引量：1
- 2012年
- 目的制备HIV-1P24蛋白及单克隆抗体,建立酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测HIV感染。方法聚合酶链反应(PCR)扩增p24基因,并将其克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,经E.coli表达并纯化HIV-1P24蛋白。以纯化P24蛋白抗原免疫Balb/c小鼠,取其脾淋巴细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合,制备能产生P24单克隆抗体的杂交瘤细胞株,采用Wes ternblot、ELISA技术对制备的单克隆抗体进行初步鉴定,建立检测P24蛋白含量的ELISA竞争法。结果原核表达重组质粒在E.coli中能高效表达P24蛋白,从杂交瘤细胞中选取能稳定分泌P24单克隆抗体的杂交瘤细胞株,用ELISA竞争法检测HIV-1阳性的血清中P24蛋白含量与病毒载量显著相关。结论 P24蛋白及特异性单克隆抗体成功制备,并建立了检测P24蛋白含量的ELISA竞争法。
- 汪龚泽刘朝奇杨建林覃晓琳吕佰瑞姚佳红
- 关键词：免疫缺陷病毒质粒酶联免疫吸附测定
- mCRT-sPD1嵌合基因的融合蛋白用于抗肿瘤免疫治疗的实验研究
- 目的：肿瘤的免疫逃逸是肿瘤得以发生、发展的关键因素,其中肿瘤诱导大量的免疫抑制分子构成的信号通路有效的抑制了免疫系统对肿瘤组织的杀伤效应。本研究主要设计并表达小鼠钙网蛋白(Calreticulin,CRT)与可溶性程序性...
- 汪龚泽
- 关键词：恶性肿瘤免疫治疗融合蛋白疗效评价
- 文献传递
- 钙网蛋白抗肿瘤免疫治疗的研究进展
- 2012年
- 钙网蛋白(calreticulin,CRT)为内质网滞留蛋白,属于热激蛋白超家族成员之一,在生物体中参与广泛的生物学作用,其中参与凋亡细胞清除、抗原提呈和诱导特异性免疫应答等被广泛地应用于肿瘤的免疫治疗中。钙网基因疫苗诱导针对肿瘤特异性抗原的免疫应答、细胞膜表面高表达钙网蛋白促进肿瘤细胞被吞噬、细胞内高表达钙网蛋白促进细胞凋亡等已成为抗肿瘤免疫治疗的研究热点。
- 汪龚泽刘朝奇
- 关键词：钙网蛋白肿瘤免疫治疗
