覃晓琳
- 作品数：40 被引量：106H指数：6
- 供职机构：南方医科大学皮肤病医院更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金宜昌市科技计划项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 人PD-L1胞外区基因的克隆、原核表达及抗体制备
- 2010年
- 目的克隆人PD-L1胞外区基因并进行原核表达及相应蛋白的抗体制备,为进一步研究PD-1/PD-L1通路及针对该通路进行疾病治疗和药物筛选奠定基础。方法用PCR方法扩增编码人PD-L1胞外区的基因序列,克隆到原核表达载体pET28a(+)中并进行表达,用His抗体为一抗进行Western blotting鉴定并验证结合活性。用纯化的hPD-L1胞外区蛋白作为抗原免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体。通过酶联免疫吸附实验(ELISA)和流式法检测抗体滴度及其特异性。结果原核表达质粒pET28a(+)-hPD-L1成功构建,并可在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导高效表达,得到的hPD-L1胞外区蛋白经SDS-PAGE和Western blotting鉴定正确。用纯化蛋白免疫日本大耳白兔,制备的多克隆抗体具有较强的免疫结合活性,抗体滴度可达105。结论鉴定和纯化了原核表达的hPD-L1蛋白,制备的相应多克隆抗体能够检测真核细胞表达的hPD-L1蛋白,为进一步研究PD-1/PD-L1生物学活性奠定了实验基础。
- 李斌刘朝奇王见之史继静覃晓琳吕佰瑞王梦瑶韩琴
- 关键词：基因表达抗体
- 四种细胞系培养沙眼衣原体的比较
- 目的：比较四种细胞系培养沙眼衣原体的易感性及药物敏感性试验结果。方法：沙眼衣原体感染McCoy、HeLa、Vero、HaCat细胞，每孔分别接种5000和1000IFU的衣原体，培养48和72h后通过碘液染色及单克隆抗体...
- 薛耀华麦志达郑磊覃晓琳曾维英黄进梅吴兴中郑和平
- 关键词：细胞系沙眼衣原体药敏试验
- 广州市和大连市淋病奈瑟球菌的耐药性及耐药质粒分型比较被引量：2
- 2014年
- 目的了解广州和大连市两地临床分离的淋病奈瑟球菌（淋球菌）对抗生素的耐药性，以及产β-内酰胺酶淋球菌（PPNG）和四环素高水平耐药淋球菌（TRNG）耐药质粒TEM-1和tetM基因分型差异。方法临床菌株来自2012年广东省皮肤性病防治中心和大连市皮肤病医院性病门诊患者的泌尿生殖道分泌物。采用琼脂稀释法测定淋球菌菌株对环丙沙星、头孢曲松和大观霉素的耐药性。多重PCR方法鉴定PPNGTEM-1和TRNGterM基因分型。结果2012年广州市皮肤性病防治中心和大连市皮肤病医院性病门诊分别分离获得淋球菌127株和102株。大连市淋球菌头孢曲松中介率达到88．2％（90／102），高于广州市的46．5％（59／127，x^2=43．44，P〈0．01），且出现5株大观霉素耐药株（4．9％），而广州市淋球菌对大观霉素100％敏感。广州市PPNG和TRNG流行率分别为46．5％（59／127）和50．4％（64／127），均明显高于大连市的33．3％（34／102）和24．5％（25／102），差异均有统计学意义（x^2=5．24、15．95，P均〈0．05）。广州和大连市TEM-1基因分型以亚洲型为主，分别为84．7％（50／59）和79．4％（27／34）；tetM基因分型以荷兰型占优势，分别为100．0％（64／64）和92．O％（23／25）。结论广州和大连两地流行淋球菌耐药性存在差异，大连市出现了大观霉素耐药株，且头孢曲松的中介率显著高于广州市。广州市PPNG和TRNG流行率明显高于大连市。两地TEM-1基因质粒分型以亚洲型占优势，terM基因以荷兰型为主。
- 吴兴中占城覃晓琳周晓维黄进梅刘晓红薛耀华张振国郑和平尹跃平
- 关键词：微生物敏感性试验基因分型
- PD-L1高表达细胞对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响
- ＜正＞PD-L1（Ligand of programmed death-1）作为免疫抑制性受体PD-1（Programmed death 1）的配体分子被发现广泛表达于多数肿瘤组织,并认为可能是肿瘤逃避免疫杀伤效应的机制...
- 王见之刘朝奇覃晓琳吕佰瑞汪龚泽
- 文献传递
- 免疫印迹法测定Tp47蛋白与梅毒患者血清的免疫反应性被引量：1
- 2015年
- 目的克隆Tp47基因、构建原核表达载体、表达并纯化Tp47蛋白,通过免疫印迹法(Western-Blot)检测其免疫反应活性。方法聚合酶链反应扩增Tp47基因,将Tp47克隆至pGEX-6P-1载体,构建重组表达质粒pGEX-6P1-Tp47,经测序鉴定正确后,转化大肠埃希菌BL21(DE3),经诱导表达后,用亲和层析方法纯化重组蛋白,鉴定正确后采用Western-Blot检测重组蛋白与梅毒阴性、阳性血清的免疫反应性。结果成功构建pGEX-6P1-Tp47原核表达质粒,表达、纯化后获得了相对分子质量约为71×103的重组蛋白;Western-Blot检测显示其能与梅毒阳性患者血清发生特异性反应,而与梅毒阴性患者血清无交叉反应性。结论成功克隆、表达、纯化Tp47重组蛋白,其与临床各期梅毒患者血清具有较好的免疫反应性,为Tp47重组蛋白用于梅毒早期诊断提供了理论依据。
- 郑和平覃晓琳黄进梅薛耀华白顺吕萍杨斌
- 关键词：梅毒重组蛋白免疫印迹法
- 米托蒽醌联合顺铂对脑胶质瘤U87细胞株的影响被引量：2
- 2011年
- 目的体外观察米托蒽醌(mitoxantrone,NVT)联合顺铂(cisplatin,CDDP)对脑胶质瘤U87细胞株的增殖抑制作用及可能的协同机制。方法 MTT法检测浓度分别为10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125μg/mL NVT、CDDP以及两药物联合对U87细胞的增殖抑制作用。RT-PCR法检测CDDP、NVT及两药联合对U87细胞上Bcl-2和Bax基因表达的影响。结果 MTT法检测结果显示,NVT浓度为0.3125μg/mL联合相同浓度CDDP时,两药联合能明显增强其对U87细胞的增殖抑制作用(67.7%±1.5%);RT-PCR法检测显示,CDDP组Bax基因的表达明显高于正常对照组,但对Bcl-2基因无此作用;低浓度的NVT和两药联合Bcl-2基因的表达明显低于正常对照组及顺铂组。结论胶质瘤U87细胞在化疗药物NVT和CDDP两药物联合作用下可通过诱导Bcl-2/Bax基因表达量的改变,协同发挥其促凋亡作用,从而增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。
- 周红建王雄伟刘朝奇覃晓琳孙俪汪雷王旭光
- 关键词：脑胶质瘤BCL-2/BAX米托蒽醌顺铂
- HIV-1 Nef基因在THP-1细胞的表达和活性检测
- 2010年
- 目的将HIV-1 Nef基因转染THP-1细胞,获得稳定表达Nef蛋白的细胞克隆,为研究Nef对巨噬细胞生物学活性的影响奠定实验基础。方法将质粒pcDNA3.1(+)-Nef和pcDNA3.1(+()阴性对照)转染THP-1细胞,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot、细胞免疫荧光等方法检测目的蛋白在真核细胞内的表达及定位,采用共转染法将荧光报告基因转染THP-1Nef和THP-13.1细胞,通过测定荧光(RLU)值来评价Nef蛋白的生物学活性。结果转染细胞经G418筛选后获得稳定表达Nef的THP-1细胞株,RT-PCR及Western blot结果表明Nef在真核细胞中成功表达,细胞免疫荧光结果显示,THP-1-Nef细胞表达的Nef蛋白主要定位于细胞质中。荧光酶标仪检测转染了HIV-1LTR-Luc和NFκB-Luc荧光报告基因的THP-1-Nef和THP-1-3.1细胞的RLU值。结论成功建立了THP-1-Nef细胞稳定表达细胞株,检测了其生物学活性,为进一步研究其作用机制实验奠定基础。
- 覃晓琳刘朝奇任东明韩莉杨凡
- 关键词：HIV-1NEFTHP-1细胞
- HIV-1 Vif的克隆、表达与活性检测被引量：1
- 2010年
- 目的克隆HIV-1Vif基因,构建原核表达质粒,进行蛋白的表达及其生物学活性的检测。方法 PCR扩增Vif基因,并将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中,构建原核表达质粒pET28a(+)/Vif,进行双酶切及测序鉴定。获得的阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳和Western blot检测分析,利用亲和层析方法纯化Vif蛋白。利用Pull-Down方法检测HIV-1Vif与SH3(HCK)特异性结合活性。结果通过酶切和测序,结果表明重组质粒pET28a(+)/Vif构建正确。SDS-PAGE和Western blot结果鉴定了原核表达的Vif重组蛋白大小正确。纯化了蛋白Vif、SH3和GST。GST pull-down试验说明Vif和SH3蛋白具有体外特异性结合活性。结论成功地克隆、表达和纯化了Vif蛋白,Vif与SH3蛋白具有结合活性,为进一步研究针对Vif与SH3结合的药物筛选提供实验依据。
- 覃晓琳刘朝奇刘徽婷汪龚泽
- 关键词：HIV-1VIF
- 沙眼衣原体OmpI-MLVA双重基因分型方法的建立及应用
- 目的：沙眼衣原体(Ct)感染是目前世界范围内流行最广的性传播疾病,除引起非淋球菌性尿道炎外,还可引起男性前列腺炎、女性盆腔炎、异位妊娠、不孕等严重并发症,是HIV感染的协同因子和重要危险因素,已构成严重的公共卫生问题.C...
- 郑和平覃晓琳
- HIV-1P24蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备被引量：1
- 2012年
- 目的制备HIV-1P24蛋白及单克隆抗体,建立酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测HIV感染。方法聚合酶链反应(PCR)扩增p24基因,并将其克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,经E.coli表达并纯化HIV-1P24蛋白。以纯化P24蛋白抗原免疫Balb/c小鼠,取其脾淋巴细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合,制备能产生P24单克隆抗体的杂交瘤细胞株,采用Wes ternblot、ELISA技术对制备的单克隆抗体进行初步鉴定,建立检测P24蛋白含量的ELISA竞争法。结果原核表达重组质粒在E.coli中能高效表达P24蛋白,从杂交瘤细胞中选取能稳定分泌P24单克隆抗体的杂交瘤细胞株,用ELISA竞争法检测HIV-1阳性的血清中P24蛋白含量与病毒载量显著相关。结论 P24蛋白及特异性单克隆抗体成功制备,并建立了检测P24蛋白含量的ELISA竞争法。
- 汪龚泽刘朝奇杨建林覃晓琳吕佰瑞姚佳红
- 关键词：免疫缺陷病毒质粒酶联免疫吸附测定
