李斌
- 作品数：18 被引量：70H指数：4
- 供职机构：三峡大学更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金宜昌市科技计划项目湖北省卫生厅青年科技人才基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- HIV-1Env来源糖肽的表达、纯化及其阻断HIV-1粘附的体外实验研究
- 目的:在黏膜感染的过程中,HIV-1可以通过包膜蛋白表面的糖链与树突状细胞表面的C型凝集素受体 DC-SIGN结合,从而促进病毒在宿主体内的播散。在前期研究中,我们发现一组来自 HIV-1 AE2f包膜蛋白的糖基化位点能...
- 李斌
- 关键词：获得性免疫缺陷综合征人类免疫缺陷病毒黏膜感染
- 文献传递
- 人PD-L1胞外区基因的克隆、原核表达及抗体制备
- 2010年
- 目的克隆人PD-L1胞外区基因并进行原核表达及相应蛋白的抗体制备,为进一步研究PD-1/PD-L1通路及针对该通路进行疾病治疗和药物筛选奠定基础。方法用PCR方法扩增编码人PD-L1胞外区的基因序列,克隆到原核表达载体pET28a(+)中并进行表达,用His抗体为一抗进行Western blotting鉴定并验证结合活性。用纯化的hPD-L1胞外区蛋白作为抗原免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体。通过酶联免疫吸附实验(ELISA)和流式法检测抗体滴度及其特异性。结果原核表达质粒pET28a(+)-hPD-L1成功构建,并可在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导高效表达,得到的hPD-L1胞外区蛋白经SDS-PAGE和Western blotting鉴定正确。用纯化蛋白免疫日本大耳白兔,制备的多克隆抗体具有较强的免疫结合活性,抗体滴度可达105。结论鉴定和纯化了原核表达的hPD-L1蛋白,制备的相应多克隆抗体能够检测真核细胞表达的hPD-L1蛋白,为进一步研究PD-1/PD-L1生物学活性奠定了实验基础。
- 李斌刘朝奇王见之史继静覃晓琳吕佰瑞王梦瑶韩琴
- 关键词：基因表达抗体
- 人PD1胞外段基因的克隆、蛋白表达及抗体制备被引量：3
- 2010年
- 目的:研究人PD1的生物学活性,制备人PD1胞外段区域及其特异性抗体。方法:用PCR方法扩增编码人PD1胞外段的基因序列(hPD1ecr),将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,表达蛋白用SDS-PAGE和Western blot鉴定。纯化目的蛋白免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体。通过酶联免疫吸附实验(ELISA),流式细胞术检测抗体滴度及其特异性。结果:原核表达载体pET28a(+)-PD1ecr成功构建,并可在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,得到的PD1胞外区蛋白经SDS-PAGE和Western blot鉴定正确。用纯化蛋白免疫日本大耳白兔,制备的多克隆抗体具有较强免疫特异性。结论:得到纯化的人PD1胞外蛋白,制备的多克隆抗体能够检测自然状态下人PD1蛋白,为进一步研究PD1功能奠定了实验基础。
- 史继静刘朝奇李斌覃晓玲任东明
- 关键词：原核表达免疫原性多克隆抗体
- 男护生就业思想状况与社会认同情况的比较分析被引量：40
- 2008年
- 目的让男护士了解当今社会对其认同程度，做出适当调整，同时给学校和医院在培养护理人才方面提供参考。方法采用问卷调查法，对某校63名男护生进行了就业思想状况的调查，对157名社会人员进行了对男护士认同度的调查。结果56．36％的男护生认为医院对男护士的需求程度可有可无，而78．98％的社会大众则认为医院需要男护士。其次，男护生选择毕业后从事护理工作的仅10．91％，但社会大众愿意接受的有68．15％。结论社会对男护士认同度良好，需求度较大，但男护生对自身专业认同度低。建议医院在接受男护士时应针对其优势用人所长，医学院校应结合医院的需求注重男护生综合素质的培养，男护生应准确定位作好职业规划，社会应关注并接受男护士。
- 程金焱朱晓红李斌李艳杨绍珍
- 关键词：就业社会认同度
- 紫苏提取液对小鼠急性酒精中毒的作用及机制被引量：6
- 2008年
- 目的:探讨紫苏提取液(PLE)对小鼠急性酒精中毒的作用及机制.方法:用食用白酒(56度)灌胃昆明种小鼠,建立急性酒精中毒动物模型.选取小鼠40只,随机分为4组,每组10只,分别为空白对照组、PLE低剂量组(20g/kg)、PLE高剂量组(40g/kg)、模型组.各实验组给予相应的药物30min后,除空白组外其余各组分别灌胃实验用酒0.15mL/10g,空白组灌以等量的生理盐水.分别观察紫苏提取液对小鼠醉酒潜伏时间及肝组织形态的影响.Real-time PCR检测小鼠肝组织中IL-6、iNOS、TNF-α、Bax基因mRNA的表达水平.结果:酒前灌PLE可降低醉酒小鼠数量、延迟小鼠发生醉酒的时间,其中高浓度组小鼠发生醉酒的潜伏时间与对照组相比有显著性差异(47.00±6.04vs11.56±12.11,P<0.05).正常对照组小鼠肝脏小叶、汇管区结构正常,肝细胞无明显变性、坏死,无明显炎细胞浸润.与模型组相比,PLE高剂量组与低剂量组肝细胞变性、坏死,炎细胞浸润均有明显改善.与模型组相比PLE可明显下调IL-6、iNOS、TNF-α mRNA的表达(0.251±0.073,0.455±0.096vs1.58±0.124;0.381±0.043,0.345±0.067vs2.088±0.088;0.584±0.061,0.270±0.027vs2.025±0.056,P<0.05或0.01),同时Bax mRNA的表达亦下降但无统计学差异.结论:紫苏提取液可显著地延长小鼠的醉酒潜伏时间、拮抗乙醇引起的肝脏损伤,此作用可能与其下调肝组织中IL-6等基因的表达有关.
- 史继静刘朝奇陈晶王锦江李斌张伟王雅琴杨凡
- 关键词：急性酒精中毒基因表达
- 木瓜对小鼠非酒精性脂肪肝形成的预防作用被引量：6
- 2010年
- 目的:复制小鼠非酒精性脂肪肝动物模型,观察木瓜对此模型的影响。方法:高脂饮食同时皮下注射小剂量四氯化碳复制小鼠非酒精性脂肪肝模型,在高脂饮食中添加木瓜对其进行干预,与正常饮食组对照。喂养5周后检测血清肝脏酶学(ALT、AST)、血脂(TG、CHO)水平;肝组织切片染色,显微镜观察肝组织病理变化;提取肝脏总RNA检测TLR-2、TLR-4、IL-1β、TGF-β、PD-L1等基因的表达情况,并进行统计学分析。结果:与正常组相比,模型组血清的肝功能和脂质水平上升,肝细胞形态明显改变,肝索消失或不清晰,相应基因表达水平上调;与模型组相比,木瓜干预组血清肝功能指标和脂质水平均显著下降,肝细胞气球样变较少,无明显肝细胞坏死,肝索存在,肝组织TLR和炎性因子表达水平明显下调。结论:木瓜对高脂饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪肝有一定预防效果,该效应的发挥可能是通过调节TLR受体及死亡配受体表达,炎性因子的分泌而实现的。
- 李斌刘朝奇史继静董满满李梦培刘茜覃晓琳吕佰瑞
- 关键词：木瓜非酒精性脂肪肝基因表达
- 人sPD-1-Fc融合蛋白的构建及Cos-7细胞的表达
- 2011年
- 目的:构建重组人pSG5-Fc-hPD-1嵌合基因质粒,并在真核细胞进行表达,得到分泌性的sPD-1-Fc融合蛋白。为PD-1的生物学活性研究奠定基础。方法:从GenBank里查到人PD-1胞外区的基因序列,设计特异性引物,以人淋巴细胞cDNA为模板PCR扩增得到人PD-1胞外区片段。以pSG5-Fc真核表达质粒为载体,构建得到重组质粒pSG5-Fc-hPD-1。脂质体瞬时转染猴肾成纤维细胞(Cos-7),收取72 h的细胞上清。用Western blot鉴定,并与原核表达的人PD-L1蛋白免疫共沉淀检测生物学活性。结果:通过EcoRⅠ/BamHⅠ双酶切及测序证实构建的重组质粒pSG5-Fc-hPD-1正确。重组质粒在Cos-7细胞中高效表达并分泌融合蛋白sPD-1-Fc到细胞上清,应用Western blot测定到上清中的融合蛋白,且得到的sPD-1-Fc融合蛋白具有与PD-L1结合的生物学活性。结论:通过基因重组方法在真核细胞里得到高效分泌型表达的sPD-1-Fc重组蛋白,为研究PD-1生物学活性奠定了实验基础。
- 李斌刘朝奇王见之史继静吕佰瑞覃晓琳
- 关键词：PD-L1真核表达
- 小鼠PD-1胞外段的克隆、原核表达及活性分析被引量：3
- 2010年
- 目的小鼠PD-1胞外段(ePD-1)原核表达载体的构建、表达、纯化及其生物学效应初步研究。方法应用小鼠脾细胞总RNA,采用RT-PCR克隆PD-1胞外段基因,将其重组到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建原核表达载体pGEX-4T-1-ePD-1,转化至E.coli DH5α,筛选阳性菌落,进行酶切及测序鉴定。将测序正确的重组表达质粒pGEX-4T-1-ePD-1转化至E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot检测,同时通过蛋白质纯化仪纯化GST-ePD-1融合蛋白。利用流式细胞术和Alamar Blue法,检测纯化的PD-1胞外段融合蛋白对淋巴细胞增殖的影响,评价其生物学活性。结果成功构建重组质粒pGEX-4T-1-ePD-1,并在E.coli BL21(DE3)中获得了成功表达,利用蛋白质纯化仪得到纯化的GST-ePD-1融合蛋白。流式细胞术和Alamar Blue法结果均显示,不同浓度的融合蛋白作用于混合淋巴细胞,与阴性对照相比,可明显促进淋巴细胞的增殖。结论成功地克隆、表达和纯化了小鼠ePD-1蛋白,纯化的重组蛋白可有效促进淋巴细胞增殖,为进一步研究其功能和临床应用提供了条件。
- 覃晓琳刘朝奇李斌吕佰瑞杨凡
- 关键词：融合蛋白蛋白纯化淋巴细胞增殖
- 人sPD-1-Fc融合蛋白的构建及真核细胞的表达
- 2009年
- 目的：通过构建重组的人pSG5-Fc-hPD-1嵌合基因质粒,并在真核细胞进行表达,得到分泌性的sPD-1-Fc融合蛋白。为PD-1的生物学活性研究奠定基础。方法：根据人PD-1胞外区的基因序列,设计特异性引物,以人淋巴细胞cDNA为模板PCR扩增得到人PD-1胞外区片段。以pSG5-Fc真核表达质粒为载体,构建得到重组质粒pSG5-Fc-hPD-1。脂质体瞬时转染猴肾成纤维细胞（Cos-7）,收取72小时的细胞上清。westernBlot方法鉴定,并与原核表达的人PD-L1蛋白免疫共沉淀检测生物学活性。结果：通过EcoR1/BamH1双酶切及测序证实构建的重组质粒pSG5-Fc-hPD-1正确。重组质粒在Cos-7细胞中高效表达并分泌融合蛋白sPD-1-Fc到细胞上清,应用westernblot测定到上清中的融合蛋白,且得到的sPD-1-Fc融合蛋白具有与PD-L1结合的生物学活性。结论：通过基因重组方法在真核细胞里得到高效分泌型表达的sPD-1-Fc重组蛋白,为研究PD-1生物学活性奠定了实验基础。
- 李斌刘朝奇史继静吕佰瑞覃晓琳
- 关键词：PD-L1真核表达
- 小鼠可溶性PD-1的克隆、原核表达及活性分析
- 2009年
- 目的：小鼠可溶性PD-1（sPD-1）原核表达载体的构建、表达、纯化及其生物学效应初步研究。方法：应用小鼠脾细胞总RNA,采用RT-PCR克隆sPD-1基因,将其重组到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建原核表达载体pGEX-4T-1-sPD-1,转化至E.coliDH5α,筛选阳性菌落,进行酶切及测序鉴定。将测序正确的重组表达质粒pGEX-4T-1-sPD-1转化至E.coliBL21（DE3）中,经IPTG诱导表达后,对表达产物进行SDS-PAGE电泳和Western blot检测,同时通过蛋白质纯化仪纯化GST-sPD-1融合蛋白。利用流式细胞术和Alamar Blue法,检测纯化的sPD-1融合蛋白对淋巴细胞增殖的影响,评价其生物学活性。结果：成功构建重组质粒pGEX-4T-1-sPD-1,并在E.coli BL21（DE3）中获得了成功表达,利用蛋白质纯化仪得到纯化的GST-sPD-1融合蛋白。流式细胞术和Alamar Blue法结果均显示,不同浓度的融合蛋白作用于混合淋巴细胞,与阴性对照相比,可明显促进淋巴细胞的增殖。结论：成功地克隆、表达和纯化了小鼠sPD-1蛋白,纯化的重组蛋白可有效促进淋巴细胞增殖,为进一步研究其功能和临床应用提供了条件。
- 覃晓琳刘朝奇李斌吕佰瑞杨凡
- 关键词：融合蛋白蛋白纯化淋巴细胞增殖
