林琳
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 供职机构：南方医科大学公共卫生与热带医学学院微生物学系更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金全军“十五”指令性课题更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 脑膜炎大肠杆菌侵袭素ibeA蛋白在大肠杆菌中的表达和纯化被引量：1
- 2005年
- 目的:为了研究大肠杆菌ibeA的有效表达方法。方法:通过PCR扩增得到大量ibeA基因,并将扩增后的ibeA蛋白基因插入pGEX载体,转化E.coliDH5α,得到ibeADNA重组子的克隆。并以包涵体和可溶形式获得大量表达。结果:亲和层析纯化后获得了大量纯化蛋白,所获得的ibeA蛋白具有良好的抗原性。结论:该方法为进一步研究ibeA介导E.coli穿入血脑屏障的机理,以及筛选ibeA侵袭素的拮抗剂奠定了基础。
- 杨军曹虹陈丽丹林琳
- 关键词：脑膜炎大肠杆菌基因表达
- 赖型钩端螺旋体601株OmpL1蛋白的表达、纯化及功能分析
- 2006年
- 目的对钩端螺旋体黄疸出血群赖株ompL1基因进行克隆、表达及产物的纯化。方法从我国钩端螺旋体黄疸出血群赖株基因组中扩增全长ompL1基因片段,克隆至pGEM-T载体,回收经EcoRⅠ+HindⅢ双酶切产物,将其与表达载体pET32a连接,通过酶切图谱和序列分析法筛选出重组质粒。将含重组质粒的宿主菌诱导表达后,提取全菌总蛋白进行SDS-PAGE电泳分析。结果获得pET9L重组质粒,经诱导表达后得到分子量为31000的重组蛋白。测序得到的ompL1基因核苷酸序列与已发表ompL1基因序列(GenbankI61405)同源性为99.8%,所推导的氨基酸序列(GenbankLA3138)的同源性达100%。结论成功构建了ompL1基因的原核表达系统,为进一步制备以OmpL1为检测靶抗原的免疫层析试剂盒奠定基础。
- 林琳赵卫罗军龙敏张文炳杨军曹虹
- 关键词：钩端螺旋体OMPL1克隆
- 脑膜炎大肠杆菌IbeA蛋白结合肽序列的亲和筛选被引量：1
- 2006年
- 应用噬菌体展示肽库技术,以重组的脑膜炎大肠杆菌致病蛋白IbeA作为靶分子,经过吸附-洗脱-扩增-再吸附的亲和筛选,随机挑选亲和力强的噬菌体克隆,进行ELISA、竞争抑制实验和序列测定。结果显示,经3轮淘选后,间接ELISA鉴定得到高亲和性结合IbeA蛋白的15个阳性克隆。竞争抑制实验结果表明,游离IbeA蛋白能竞争抑制噬菌体结合肽克隆与固相包被的IbeA蛋白的结合,其抑制作用随游离IbeA蛋白浓度的降低而减弱。测序结果得到5种阳性噬菌体克隆展示肽序列。上述结果提示以脑膜炎大肠杆菌IbeA蛋白为靶筛选所获得的噬菌体12肽克隆,具有特异性,其结合肽序列呈现相对保守性。建立的从噬菌体随机肽库筛选IbeA蛋白结合肽的方法具有方便、灵活和高效可行的特点。
- 曹虹林琳刘北一陈丽丹杨军贡树基李明
- 关键词：噬菌体展示肽库结合肽
- 脑膜炎大肠埃希菌侵袭素IbeA结合多肽的初步研究被引量：1
- 2006年
- 目的脑膜炎大肠埃希菌(E.coli)侵袭素IbeA通过与脑微血管内皮细胞表面受体结合,从而介导细菌穿透血脑屏障引起新生儿细菌性脑膜炎。为通过肽库筛选获得与IbeA蛋白结合的多肽,建立噬菌体随机肽库筛选IbeA结合多肽模体的方法。方法首先制备靶分子,用PCR扩增出全长ibeA基因序列,克隆至表达载体pET28a中,转化大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达出带有His-tag的目的蛋白,经变性复性后通过Ni2+-NTA亲和层析柱得到纯度达90%的重组蛋白。然后以固相化IbeA重组蛋白为靶亲和筛选噬菌体线性12肽库。结果经过3轮淘选,得到能和IbeA结合的24个重组噬菌体克隆;挑选15个亲和力高的克隆进行DNA测序,对比分析所得的短肽序列。固相Fmoc法合成短肽,并进行结合实验、阻断实验和竞争抑制实验。结论以重组表达的IbeA融合蛋白为靶筛选得到的重组噬菌体十二肽克隆,能够和IbeA蛋白结合,为IbeA蛋白结合多肽。结果提示所筛选的阳性噬菌体克隆及其合成肽可能模拟IbeA受体表位的结构。
- 曹虹陈丽丹林琳刘北一杨军贡树基李明
- 关键词：噬菌体展示肽库结合多肽
