陈丽丹
- 作品数：15 被引量：27H指数：4
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- SARS冠状病毒S2基因原核表达及免疫学特性被引量：5
- 2007年
- 目的研究严重急性呼吸道综合征(SARS)冠状病毒S2蛋白表达并对其免疫学特性。方法克隆SARS冠状病毒S2基因,并在大肠埃希菌中表达谷胱甘肽硫转移酶(GST-S2)融合蛋白。通过免疫印迹(Westernblot)和酶联免疫吸附试验(ELISA)方法鉴定表达GST-S2融合蛋白的活性。结果通过原核系统表达的GST-S2融合蛋白可与谷胱甘肽硫转移酶(GST)多克隆抗体结合,并在85千道尔顿(KD)处出现特异性结合条带。GST-S2蛋白能与SARS患者恢复期血清反应,而不与正常人血清反应。结论本项研究获得了SARS冠状病毒GST-S2融合蛋白,它可与GST多克隆抗体特异性结合,并与SARS患者恢复期血清发生特异性反应。
- 周浩龙北国张文炳江丽芳陈丽丹贡树基赵卫
- 关键词：SARS冠状病毒S2基因克隆
- 脑膜炎大肠杆菌侵袭素ibeA蛋白在大肠杆菌中的表达和纯化被引量：1
- 2005年
- 目的:为了研究大肠杆菌ibeA的有效表达方法。方法:通过PCR扩增得到大量ibeA基因,并将扩增后的ibeA蛋白基因插入pGEX载体,转化E.coliDH5α,得到ibeADNA重组子的克隆。并以包涵体和可溶形式获得大量表达。结果:亲和层析纯化后获得了大量纯化蛋白,所获得的ibeA蛋白具有良好的抗原性。结论:该方法为进一步研究ibeA介导E.coli穿入血脑屏障的机理,以及筛选ibeA侵袭素的拮抗剂奠定了基础。
- 杨军曹虹陈丽丹林琳
- 关键词：脑膜炎大肠杆菌基因表达
- 脑膜炎大肠杆菌毒力岛新基因cgIE的表达、功能分析和鉴定
- ＜正＞脑膜炎大肠杆菌（Escherichia coil,E．coli）毒力岛GimA与新生儿细菌性脑膜炎的发生密切相关。GimA全长20．3kb,GC含量为46．2％,与其它E．coli基因组GC含量（50．8％）不同。...
- 曹虹陈丽丹杨军贡树基黄胜和
- 文献传递
- 脑膜炎大肠杆菌毒力岛新基因cglE的表达、功能分析和鉴定
- 脑膜炎大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)毒力岛GimA与新生儿细菌性脑膜炎的发生密切相关。GimA全长20．3kb,含有4个操纵子,编码15个蛋白质,包括1个与细菌致病相关的侵袭素IbeA。功能预...
- 曹虹陈丽丹杨军贡树基黄胜和
- 文献传递
- 脑膜炎大肠杆菌K1株新基因cglE的克隆、表达及功能研究
- 细菌性脑膜炎是中枢神经系统(centralnervesystem，CNS)最常见最严重的感染性疾病。尽管抗生素的广泛使用，但细菌性脑膜炎的发病率仍有5％-40％，而幸存者神经系统后遗症的发生率高达30％。细菌性脑膜炎的高...
- 陈丽丹
- 关键词：脑膜炎克隆表达酶活性抗原性
- 文献传递
- 登革病毒2型全长cDNA感染性转录体的构建和鉴定被引量：1
- 2009年
- 为构建登革病毒感染性克隆,针对登革病毒2型基因组全长cDNA的体外转录方法及感染性转录体进行研究。采用长链RT-PCR技术,扩增DEN2NGC株全长基因组cDNA,以之为模板,用SP6RNA聚合酶系统制备体外转录RNA转录体,分别经乳鼠脑内接种及电穿孔转染BHK-21细胞,观察其感染效应。并从受染鼠脑和病变细胞中提取总RNA,进行RT-PCR扩增、克隆测序以及电镜观察。结果发现,从感染鼠脑和细胞中经RT-PCR均可扩增出病毒特异的基因片段,大小与预期一致;并从乳鼠脑组织和BHK-21细胞中观察到恢复病毒颗粒。上述结果表明本文成功构建的DEN2 NGC株病毒全长cDNA的体外转录体具有感染性,乳鼠脑内接种途径与电穿孔转染细胞一样可成为体外转录体感染宿主细胞、获得恢复病毒的方法。
- 贡树基赵卫张文炳周浩陈丽丹张复春严子锵曹虹
- 关键词：登革2型病毒全长CDNA
- 脑膜炎大肠杆菌IbeA蛋白结合肽序列的亲和筛选被引量：1
- 2006年
- 应用噬菌体展示肽库技术,以重组的脑膜炎大肠杆菌致病蛋白IbeA作为靶分子,经过吸附-洗脱-扩增-再吸附的亲和筛选,随机挑选亲和力强的噬菌体克隆,进行ELISA、竞争抑制实验和序列测定。结果显示,经3轮淘选后,间接ELISA鉴定得到高亲和性结合IbeA蛋白的15个阳性克隆。竞争抑制实验结果表明,游离IbeA蛋白能竞争抑制噬菌体结合肽克隆与固相包被的IbeA蛋白的结合,其抑制作用随游离IbeA蛋白浓度的降低而减弱。测序结果得到5种阳性噬菌体克隆展示肽序列。上述结果提示以脑膜炎大肠杆菌IbeA蛋白为靶筛选所获得的噬菌体12肽克隆,具有特异性,其结合肽序列呈现相对保守性。建立的从噬菌体随机肽库筛选IbeA蛋白结合肽的方法具有方便、灵活和高效可行的特点。
- 曹虹林琳刘北一陈丽丹杨军贡树基李明
- 关键词：噬菌体展示肽库结合肽
- 登革2型病毒全长基因组的长链RT-PCR法扩增被引量：6
- 2006年
- 目的采用长链RT-PCR技术扩增登革2型病毒新几内亚株(NGC)全长基因组。方法根据登革2型病毒NGC株基因组全序列设计引物,在上游引物中加入Sp6 RNA聚合酶启动子核心序列,下游引物中加入ClaⅠ内切酶位点。从病毒感染的乳鼠脑中提取RNA,采用长链RT-PCR技术进行扩增。以获得的PCR产物为模板分别扩增3个NGC株特异的基因片段。结果长链RT-PCR法扩增出约11 kb基因片段,经PCR法证实为登革2型病毒NGC株特异序列。结论通过长链RT-PCR技术,获得了登革2型病毒NGC株全长基因组,为进一步构建感染性克隆打下基础。
- 贡树基赵卫曹虹张文炳周浩陈丽丹
- 关键词：登革2型病毒全长CDNA
- 脑膜炎大肠杆菌新基因cglE的克隆、表达及功能分析被引量：5
- 2006年
- 目的研究脑膜炎大肠杆菌新基因cglE在细菌穿透血脑屏障中的作用。方法1)PCR扩增cglE基因片段,克隆到原核表达载体pET22b,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达并对目的蛋白进行纯化及初步鉴定。2)应用生物信息学方法对cglE表达产物进行一级和二级结构预测。结果经Western-blot验证原核表达的CglE蛋白,SDS-PAGE电泳显示其分子量大小约50 000 Da。生物信息学分析表明,该基因与编码二氢硫辛酰胺脱氢酶(Dihydrolipoamide Ddhydrogenase,DLDH)的基因有同源性,与脑膜炎大肠杆菌侵袭素IbeA在二级结构上有相似性。结论建立稳定的原核表达系统并成功表达cglE基因产物,cglE基因可能与能量代谢及细菌穿透血脑屏障有关。目的蛋白CglE的表达及初步鉴定可为研究其功能及脑膜炎大肠杆菌的感染组学奠定了良好的基础。
- 陈丽丹曹虹黄胜和杨军周浩贡树基
- 关键词：脑膜炎大肠杆菌生物信息学
- 脑膜炎大肠杆菌新基因cg1E的表达及生物信息学分析
- 大肠杆菌(E.coil)是引起新生儿脑膜炎最常见的革兰氏阴性细菌,其发病率和死亡率较高,幸存者往往出现严重的神经系统后遗症。目前,关于血循环中的大肠杆菌如何穿透由脑微血管内皮细胞(brain microvascular ...
- 陈丽丹曹虹杨军
- 文献传递
