林洁
- 作品数：3 被引量：6H指数：1
- 供职机构：中国药科大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗阿尔茨海默病重组蛋白疫苗的克隆、表达和免疫学鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的:制备抗阿尔茨海默病的重组蛋白疫苗。方法:将β淀粉样蛋白42肽N端表位Aβ1-15基因,通过来源于破伤风毒素的辅助性T细胞表位多肽TTP基因片段,与大肠杆菌L-门冬酰胺酶Ⅱ(AnsB)基因的C末端融合,构建表达质粒pET28 a-AnsB-TTP-Aβ1-15。转化至E.coliBL-21,TBYE培养基(Kanr)培养,乳糖诱导表达,通过渗透休克、DEAE52-cellu lose和Sepha-dex G-100柱层析制备融合蛋白rAnsB-TTP-Aβ1-15,通过酶活力和抗原性测定鉴定融合蛋白。结果:获得的融合蛋白rAnsB-TTP-Aβ1-15保留了AnsB 71%的催化活力,具有与抗Aβ1-42抗体特异性结合的能力。结论:获得了在AnsB多聚酶分子表面呈现有Aβ1-15表位的融合蛋白rAnsB-TTP-Aβ1-15,为抗阿尔茨海默病疫苗研究奠定了基础。
- 林洁刘景晶陈庆梅施小明
- 关键词：阿尔茨海默病重组疫苗表位抗原性
- 重组人源胰岛素原C肽在大肠杆菌中的克隆、表达与纯化(英文)被引量：5
- 2006年
- 目的:构建一种新型表达载体(pEDCC),表达并纯化得到人源胰岛素原C肽。方法:将编码截短的门冬酰胺酶突变体(ansB-C),天然C肽,人IgG1铰链区(hinge),额外的酸敏感二肽(DP)以及富含碱性氨基酸的8肽(KRKRKKSR)的核苷酸序列依次分别插入pET28a载体中,构建表达载体pEDCC。在乳糖的诱导下,融合蛋白ansB-C-hinge-DPKRKRKKSRNGS-GR-C-peptide以包涵体形式高效表达。融合蛋白经洗涤和乙醇分级沉淀纯化后,通过酸水解将PKRKRKKSRNGSGR-C-peptide释放出来。C肽N端14肽用胰蛋白酶切割,通过DE52柱与C-peptide分离。结果:构建的表达载体pEDCC序列正确,融合蛋白经分离纯化得到了高纯度的重组人源胰岛素原C肽。结论:以截短的门冬酰胺酶作为融合伙伴,并以富含碱性氨基酸的8肽调节等电点是一种生产重组人源胰岛素原C肽的有效方法。
- 王学军顾凯曹荣月林洁吴洁刘景晶
- 关键词：基因融合门冬酰胺酶胰蛋白酶
- 大肠杆菌L-门冬酰胺酶Ⅱ作为多肽呈现载体的可行性研究
- 2006年
- 为了研究大肠杆菌L-门冬酰胺酶Ⅱ(L-asparaginaseⅡ,AnsB)能否作为多肽呈现载体。选取乙肝病毒表面抗原(HBSAg)preS2结构域的核心抗原表位区作为模型多肽,构建了两种表达载体pET28a-AnsB-preS2L和pET28a-AnsB-preS2C,分别转化至表达宿主菌E.coliBL-21,LB培养基(Kanr)培养,乳糖诱导高效表达,通过渗透休克,DEAE 52-cellulose柱层析纯化获得了在AnsB C端融合有线状和环状模型多肽的嵌合酶AnsB-preS2L和AnsB-preS2C,两种嵌合酶分别保留了AnsB 81%、25%的催化活力,两者的pH稳定性均与AnsB相符。ELISA检测结果显示AnsB-preS2L与抗preS2抗体的结合能力较AnsB-preS2C强。证明AnsB确实能够作为一种表面呈现载体将线性外源多肽以融合表达的方式呈现在酶分子的表面,最终形成一种在每个亚基表面呈现有多肽的嵌合酶。最后,用富含带电序列的8肽(KRKRKKSR)替换核心抗原表位区作为模型多肽,进一步验证了AnsB作为多肽呈现载体的可行性和通用性。
- 林洁黄永城王学军吴洁刘景晶
- 关键词：外源多肽抗原表位
