公共文化服务平台

联合应用泛素分子基因的汉滩病毒嵌合基因GnS0.7、GcS0.7重组腺病毒的构建及鉴定: 2015年; 目的构建含有泛素(ubiquitin,Ub)基因的汉滩病毒嵌合基因Gn S0.7和Gc S0.7重组腺病毒。方法通过PCR扩增获得Ub基因,分别克隆入本室已构建的重组腺病毒转移载体p Shuttle-p CAG-Gn S0.7和p Shuttle-p CAG-Gc S0.7中,进一步通过双酶切将转移载体中的嵌合基因分别克隆入腺病毒载体,得到重组腺病毒载体r Ad-p CAG-Ub-Gn S0.7和r Adp CAG-Ub-Gc S0.7,使用PacⅠ线性化后转染HEK293细胞,包装后获得重组腺病毒,感染HEK293细胞后用免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay,IFA)检测表达产物。结果限制性内切酶酶切鉴定、PCR扩增和测序结果显示,各重组腺病毒转移载体及重组腺病毒载体构建正确。IFA检测到各重组腺病毒中目的蛋白的表达。结论成功制备了含有Ub基因的汉滩病毒嵌合基因Gn S0.7和Gc S0.7重组腺病毒,为进一步研究联合Ub基因的汉滩病毒重组腺病毒的免疫学特性奠定了实验基础。; 张亮于澜叶伟李璞媛张芳琳程林峰; 关键词：汉坦病毒腺病毒科泛素

HSV-1 gC糖蛋白真核表达载体的构建及表达被引量：1: 2011年; 目的:构建单纯疱疹病毒1型(HSV-1)囊膜糖蛋白C(gC)哺乳动物表达载体pCI-mCMV-gC-1-IRES-DHFR-L22R,实现其在中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1)中的稳定表达。方法:利用基因重组技术构建同时克隆有gC-1基因和中国仓鼠二氢叶酸还原(DHFR-L22R)基因的真核表达载体pCI-mCMV-gC-1-IRES-DHFR-L22R,按LipofectamineTM2000说明书转染野生型CHO-K1细胞,在G418和氨甲喋呤(MTX)双筛选压力下筛选稳定表达细胞株,Slot blot方法测定重组蛋白的表达,并用His-Ni琼脂糖填料进行目的蛋白纯化,纯化后West-ern blot检测。结果:成功构建了真核表达载体pCI-mCMV-gC-1-IRES-DHFR-L22R。经过两轮筛选获得稳定表达HSV-1型gC基因的细胞系,Western blot成功检测到目的蛋白。结论:HSV-1 gC在CHO-K1细胞中成功表达,并具有良好的特异性结合活性,为进一步的实验研究和临床应用提供了基础。; 党引利阎岩张晓晓李璞媛于澜张蕾张芳琳徐志凯吴兴安; 关键词：HSV GC DHFR 真核表达 CHO

汉坦病毒疫苗研究进展: 汉坦病毒可引起HFRS和HPS两类急性传染性疾病，临床尚缺乏特异有效的治疗方案。我国是世界上受HFRS影响最严重的国家，因此针对汉坦病毒的疫苗研究工作任务紧迫。本文将对目前国内外汉坦病毒疫苗研究进展，特别是我国工作者的研...; 李璞媛白文涛; 关键词：汉坦病毒基因疫苗; 文献传递

汉坦病毒S0.7基因新型重组腺病毒的构建及鉴定: 2010年; 目的:构建含汉坦病毒核蛋白(NP)氨基端编码基因S0.7,CAG启动子及WPRE转录后调节元件的新型重组腺病毒。方法:依据GenBank序列,分别合成CAG序列及WPRE序列,插入S0.7-pShuttle中,构建含S0.7基因,CAG启动子及WPRE转录后调节元件的转移载体pShuttle-S0.7-CAG-WPRE。采用PI-SceI和I-CeuI限制性内切酶将该片段克隆入腺病毒DNA,得到重组腺病毒DNAAdeno-S0.7-CAG-WPRE,使用PacI线性化后转染HEK293细胞,包装重组腺病毒。感染HEK293细胞后用免疫荧光法检测表达产物。结果:转移载体pShuttle-S0.7-CAG-WPRE通过测序证明构建正确,纯化重组腺病毒滴度达1013pfu/L。免疫荧光结果表明,重组腺病毒感染的HEK293细胞被抗汉坦病毒NP的特异性mAb1A8所识别。结论:成功地构建了含汉坦病毒S0.7基因,CAG启动子及WPRE转录后调节元件的新型重组腺病毒,本实验为进一步研制汉坦病毒基因疫苗奠定了良好的基础。; 李凯李璞媛白文涛胡刚吴兴安徐志凯张芳琳; 关键词：汉坦病毒腺病毒

肺炎支原体蛋白质双向电泳条件的探索: 目的：建立适用于肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae，mp)的双向电泳技术。方法：对双向电泳实验中的三个关键因素：全蛋白提取量、固相ph梯度胶条范围、蛋白上样量进行摸索，比较和分析标准株FH...; 胡璇苑鑫袁静冯羽中牛文凯李璞媛刘慧莹柏长青; 关键词：肺炎支原体蛋白质组双向电泳

汉坦病毒感染C57BL/6小鼠组织中特异性抗原的检测被引量：3: 2011年; 目的通过检测汉坦病毒感染C57BL/6小鼠组织中特异性病毒抗原,以建立汉坦病毒感染动物的评价体系。方法将汉坦病毒陈株按照原病毒液、10-1、10-2三个滴度经肌肉注射感染C57BL/6小鼠,在感染后的第3、6、9、12、15天,分别取小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑等组织研磨后制成病毒悬液,以ELISA法检测各组织中的病毒特异性抗原。结果 C57BL/6小鼠感染汉坦病毒后短期内在其肝脏和脾脏可以检测到特异性抗原,随着时间的延长,这些抗原逐步消失。结论上述结果为建立汉坦病毒感染动物的评价体系提供了一种参考。; 程林峰白露李凯李璞媛胡刚于澜吴兴安徐志凯张芳琳; 关键词：汉坦病毒 C57BL/6小鼠抗原

肺炎支原体双向电泳条件的探索: 2016年; 目的建立适用于肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae,MP)的双向电泳技术。方法对双向电泳实验中的三个关键因素:全蛋白提取量、固相PH梯度胶条范围、蛋白上样量进行摸索,比较和分析标准株FH电泳图谱,利用液相色谱串联质谱技术(LC-MS/MS)鉴定部分蛋白斑点。结果采用菌液离心结合超声破碎的方法提取全蛋白,上样量为2mg,固相PH梯度胶条选取PH4-7,可以得到蛋白点分布均匀的双向电泳图谱,蛋白点数为60±2。利用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术成功获得了分子伴侣蛋白(Chaperone protein DnaK),鉴定成功率为100%。结论成功建立了适用于肺炎支原体蛋白质组分析的双向电泳技术条件,为肺炎支原体蛋白质组学的研究提供一个可靠的技术平台。; 胡璇苑鑫柏长青牛文凯袁静冯羽中李璞媛刘慧莹; 关键词：肺炎支原体蛋白质组学双向电泳技术

羊布鲁菌外膜蛋白Omp22的原核表达及鉴定被引量：6: 2009年; 布鲁菌外膜蛋白Omp22与布鲁菌致病性相关,又可诱导机体免疫反应。为进一步研究Omp22的特性,对其进行原核表达,并初步鉴定。根据Genbank序列,设计并合成羊布鲁菌外膜蛋白Omp22引物。以羊布鲁菌M5株基因组DAN为模板,PCR扩增并克隆入原核表达载体pGEX-4T-1中。酶切鉴定正确后,测定序列;将重组质粒pGEX-4T-1-Omp22电转化大肠杆菌DH5α中,诱导表达,并采用羊布鲁菌兔免疫血清,Western-blot初步检测融合蛋白GST-Omp22表达情况和免疫学特性。结果PCR扩增出约660bp目的条带,与预期相符;酶切鉴定和测序结果表明,成功构建了pGEX-4T-1-Omp22原核表达载体;优化诱导温度,结果表明,在25℃诱导表达时,该融合蛋白大部分出现在上清中;Western-blot结果证实,GST-Omp22可与羊布鲁菌兔免疫血清特异性结合。说明成功构建了Omp22蛋白原核表达载体并进行了可溶性表达;该融合蛋白可与羊布鲁菌兔免疫血清特异性结合。Omp22蛋白的表达,为进一步研究布鲁菌的致病机制以及疫苗研制奠定基础。; 张亮张蕾张芳琳李璞媛李凯吴兴安徐志凯白文涛; 关键词：原核表达

人整合素β_3亚基毕赤酵母表达载体的构建及鉴定被引量：1: 2007年; 目前研究表明整合素β3亚基是多种病毒的细胞表面受体,然而整合素β3亚基与不同病毒受体结合蛋白VAP相互作用的分子机制还不完全清楚。为此,设计引物,采用RT-PCR方法扩增人β3亚基包膜外区约2.1kb片段,克隆入毕赤酵母表达载体pPIC3.5K中。双酶切鉴定挑取阳性克隆pPIC3.5K-β3,测序证实目的基因序列正确。将pPIC3.5K-β3转化毕赤酵母工程菌GS115,在浓度为3.0mg/mL的G418选择培养基上,筛选出含有多拷贝目的基因的阳性菌株,PCR可扩增出约2.1kb的目的条带。阳性菌株经1%甲醇诱导表达,Western-blot可在酵母菌体中检测到约80kDa的目的蛋白条带。上述结果表明,成功构建了人整合素β3亚基毕赤酵母表达载体,筛选获得多拷贝阳性菌株并成功表达,为进一步研究人整合素β3在病毒感染中的作用及其单克隆抗体的制备奠定基础。; 牛舜张芳琳李璞媛胡刚刘艳丽吴兴安张蕾白文涛; 关键词：整合素

汉坦病毒囊膜糖蛋白G2在毕赤酵母GS115中的表达及鉴定被引量：1: 2007年; 构建了编码汉坦病毒囊膜糖蛋白G2基因的重组质粒,在毕赤酵母中表达,为汉坦病毒基因工程疫苗的研究提供实验基础。利用PCR法从含汉滩病毒76-118株M基因的M56质粒中扩增编码糖蛋白G2的基因片段,克隆入酵母分泌表达载体pPICZαA,构建重组质粒pPICZαA-G2。酶切鉴定挑取的阳性克隆,转化入GS115工程菌,在含100μg/mLZeocin的YPD培养基上筛选。挑选单菌落,PCR鉴定阳性克隆,用0.5%甲醇诱导表达,并利用SDS-PAGE及Western-Blot鉴定表达产物。序列分析表明所获得的基因片段与编码汉滩病毒76-118株囊膜糖蛋白G2的基因一致;100μg/mLZeocinYPD培养基上筛选出含pPICZαA-G2转化子,PCR鉴定为阳性克隆;SDS-PAGE可见约70kDa处有目的蛋白表达条带,经Western-Blot证实该条带为汉滩病毒囊膜糖蛋白G2。成功地构建了重组酵母表达载体pPICZαA-G2,并在毕赤酵母中初步表达成功,为今后汉坦病毒囊膜糖蛋白G2表达纯化以及基因工程疫苗的制备奠定了一定基础。; 李璞媛白文涛张芳琳吴兴安胡刚刘艳丽王海涛张伟徐志凯; 关键词：汉坦病毒毕赤酵母表达系统蛋白表达

渝B2-20050021-1　渝公网安备 50019002500403号　违法和不良信息举报中心　互联网出版许可证　新出网证(渝)字10号

李璞媛

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

李璞媛

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈