李旭坤
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- BARF1基因真核表达载体PIRES2-EGFP/BARF1的构建及鉴定
- 2011年
- 提取B95-8细胞RNA,进行逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增BARF1基因,将其克隆到pUM-T载体,转化E.coliDH5α,筛选阳性克隆,提取质粒并用EcoRI和BamHI双酶切,电泳回收BARF1片段.同时用EcoRI和BamHI双酶切真核载体PIRES2-EGFP,电泳后回收载体PIRES2-EGFP并与BARF1片段连接;转化E.coliDH5α,筛选阳性克隆.提取质粒并用EcoRI和BamHI双酶切鉴定插入方向,并进行测序分析.转染胃上皮细胞GES-1后,观察细胞形态与行为变化.得到666 bp的BARF1基因片段.经双酶切鉴定,BARF1基因已正确连接到PIRES2-EGFP真核表达载体;测序结果与B95-8细胞株序列完全一致.BARF1基因转染GES-1细胞后,细胞由梭形圆化,黏着力减弱,重叠生长.结果表明成功地构建了携带EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)编码BARF1基因的真核表达载体.
- 李淑英张科杜海军王湛李旭坤慈雅丽王新燕张秀军周玲
- 关键词：EB病毒BARF1基因真核表达载体
- 胃癌患者人乳头瘤病毒感染状况的检测被引量：2
- 2011年
- 张科慈雅丽王新燕李旭坤杨寓玲李淑英李玉兰赵晓瑜
- 关键词：胃肿瘤聚合酶链反应
