张科
- 作品数：14 被引量：20H指数：3
- 供职机构：河北联合大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- BARF1基因真核表达载体PIRES2-EGFP/BARF1的构建及鉴定
- 2011年
- 提取B95-8细胞RNA,进行逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增BARF1基因,将其克隆到pUM-T载体,转化E.coliDH5α,筛选阳性克隆,提取质粒并用EcoRI和BamHI双酶切,电泳回收BARF1片段.同时用EcoRI和BamHI双酶切真核载体PIRES2-EGFP,电泳后回收载体PIRES2-EGFP并与BARF1片段连接;转化E.coliDH5α,筛选阳性克隆.提取质粒并用EcoRI和BamHI双酶切鉴定插入方向,并进行测序分析.转染胃上皮细胞GES-1后,观察细胞形态与行为变化.得到666 bp的BARF1基因片段.经双酶切鉴定,BARF1基因已正确连接到PIRES2-EGFP真核表达载体;测序结果与B95-8细胞株序列完全一致.BARF1基因转染GES-1细胞后,细胞由梭形圆化,黏着力减弱,重叠生长.结果表明成功地构建了携带EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)编码BARF1基因的真核表达载体.
- 李淑英张科杜海军王湛李旭坤慈雅丽王新燕张秀军周玲
- 关键词：EB病毒BARF1基因真核表达载体
- 宫颈脱落细胞中人乳头瘤病毒16型整合状态及病毒载量分析被引量：2
- 2014年
- 目的：探讨宫颈脱落细胞中人乳头瘤状病毒（humanpapillomavirus，HPV）16型整合状态及病毒载量在宫颈病变中的意义。方法：应用多聚酶链反应（polymerasechainreaction，PCR）及实时定量PCR扩增，检测HPV16E2、E6及人看家基因β-actin的拷贝数，分析HPVl6病毒载量和整合状态与宫颈病变的关系。结果：428例标本中，检测到27例HPV16阳性，其病毒载量介于2.8～118．9拷贝／细胞；其中4例（14．8％）E2／E6比率〉1，为纯游离型：6例（22．2％）E2／E6比率=0，为纯整合型；17例（63．O％）E2／E6比率〉0而〈1，为整合与游离的混合型：并且随病变程度加重，游离型比例逐渐降低，整合型（游离＋整合）比例逐渐升高。结论：HPV16整合入宿主基因组在部分宫颈上皮病变中已经存在：检测HPV16E2、E6及其比值，可以作为宫颈病变早期筛查的一种手段．以便及早发现宫颈病变的高危患者。
- 张科李淑英侯灵彤赵莹张云茹王玉娇
- 关键词：人乳头瘤状病毒
- BARF1基因转染对人胃上皮细胞Bcl-2表达的影响
- 2013年
- ①目的探讨EB病毒编码BARF1基因对人胃上皮细胞Bcl-2表达的影响。②方法用携带BARF1基因的真核载体PIRES2-EGFP/BARF1,转染人胃上皮细胞系GES-1,G418筛选单克隆。用免疫组化法检测转染细胞及未转染细胞Bcl-2的表达状况。③结果获得稳定表达BARF1基因的人胃上皮细胞株,转染BARF1基因的细胞Bcl-2表达显著高于未转染和转染空载体GES-1细胞(P<0.01)。④结论 BARF1基因可能上调了人胃上皮细胞Bcl-2表达。
- 张科张垅李淑英杜海军赵莹张云茹周玲曾毅
- 关键词：人胃上皮细胞BCL-2
- 人乳头瘤病毒感染与不同地域食管癌发生相关性Meta分析被引量：7
- 2013年
- 目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)感染与不同地域食管癌(EC)发生的病因学关系。方法在中国知网,检索有关EC发生与HPV感染相关的研究文献,研究纳入标准是:以原位杂交或聚合酶链反应为检测方法检测高危型HPV DNA,并且研究文献所选用病例既有EC组织又有正常对照组织。结果入选17篇文献中:EC组织标本HPV检出率为44.0%,正常对照组织中HPV阳性率为16.7%,EC组织中HPV感染率与正常对照组织有显著差异(P<0.05);分布在香港、上海、福建、广东、河南、四川、河北和新疆8个区域的被检标本中HPV感染率存在明显的地域差异(P<0.05)。结论高危型HPV感染在不同地域普遍存在,可能是EC发生的重要病原因子。
- 邰智慧张科李淑英李劲涛杜海军周玲杜君朱丽华刘爱华熊亚南
- 关键词：人乳头瘤病毒食管癌META分析
- EB病毒对不同分化程度胃癌细胞的易感性
- 2014年
- 目的建立携带EB病毒(EBV)的人胃癌细胞株,探讨EBV对不同分化程度胃癌细胞的易感性。方法用携带EBV的B95-8细胞系制备EBV,感染胃癌细胞BGC823、MKN45及MKN28,用有限稀释法对感染细胞进行克隆,观察细胞形态,并用PCR法检测未感染及感染细胞中EBV编码核抗原EBNA1、EBNA2、潜伏感染膜蛋白LMP1、LMP2A、裂解感染早期基因BARF1、晚期基因BLLF1及Bc LF1的表达状况。结果已感染细胞的形态由原来的梭形变为多形态,并检测到EBNA1、BARF1及Bc LF1的表达,而未检测到EBNA2、BLLF1、LMP1及LMP2A的表达。结论不同分化程度的胃癌细胞对EBV都易感,并且EBV感染可改变细胞的表型,提示不同分化程度的胃癌细胞系可作为EBV感染的靶细胞。
- 张科邰智慧李淑英杜海军李劲涛朱丽华赵莹张云茹周玲曾毅
- 关键词：胃癌EB病毒
- 胃腺癌细胞中miR-23a靶基因PPP2R5E的鉴定被引量：4
- 2015年
- 目的利用双荧光蛋白报告基因分析系统验证mi R-23a的靶基因PPP2R5E。方法选取表达绿色荧光蛋白的质粒pc DNA3/EGFP,将PPP2R5E-3’UTR的特异性序列插入其中,并与红色荧光蛋白表达质粒p Ds Red2-N1及表达mi R-23a的质粒共同稳定转染胃腺癌细胞MGC803,稳定转染后提取细胞蛋白,荧光分光光度计进行定量检测。并通过半定量RT-PCR、实时定量PCR检测mi R-23a功能受抑制或过表达mi R-23a的MGC803细胞或胃腺癌组织中PPP2R5E基因m RNA的表达情况,验证mi R-23a对其调控作用。表达si RNA抑制MGC803中PPP2R5E m RNA的表达后,通过MTT和平板克隆形成实验观察其对胃腺癌细胞系MGC803细胞活性和克隆形成能力的影响。结果绿色荧光蛋白的表达量,稳定转染pc DNA3/EGFPPPP2R5E-3’UTR质粒和mi R-23a质粒组明显低于pc DNA3/EGFP-PPP2R5E-3’UTR和pc DNA3共同稳定转染组。mi R-23a功能受抑制的胃腺癌细胞MGC803中靶基因PPP2R5E的m RNA表达水平升高;相反,过表达mi R-23a的胃腺癌细胞MGC803及胃腺癌组织中靶基因PPP2R5E的m RNA表达水平下降。沉默MGC803细胞中的PPP2R5E后,细胞活性和克隆形成能力均加强。结论 PPP2R5E可能是mi R-23a的直接靶基因。
- 朱丽华李盖刘爱华张科李冀章广玲
- 关键词：胃腺癌MGC803MI靶基因
- 高危型人乳头瘤病毒感染及其E6E7诱导人食管上皮癌变作用
- 李淑英张科李劲涛张志斐周玲
- 主要技术内容：中国是世界上食管癌发病率和死亡率最高的国家。高危型人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus，HPV)感染是食管癌发生的重要因素。HPVE6E7基因与宿主细胞内重要蛋白相互作用发挥致癌功能，全面认...
- 关键词：
- 关键词：食管癌人乳头瘤病毒肿瘤治疗
- EB病毒感染、基因转染致上皮细胞恶性转化及其潜伏膜蛋白的功能
- 李淑英周玲朱丽华张科杜海军等
- 主要技术内容及创新点：1.通过EBV感染及BARF1基因转染人胃上皮细胞，获得了携带EBV的人胃上皮细胞株GES-1/EBV及稳定表达BARF1基因的细胞株GES-1/BARF1，发现了EBV感染及BARF1基因转染均可...
- 关键词：
- 关键词：肿瘤治疗
- 食管癌组织中人乳头瘤病毒16型整合状态的检测被引量：1
- 2012年
- 目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)感染与我国食管癌发生的相关性。方法应用HPV16 E6型特异性引物,检测食管癌手术切除组织中HPV16感染状况。对所得HPV16阳性标本,应用HPV16 E2和E6引物进行实时荧光PCR扩增,检测HPV16 E2与E6的含量,通过E2与E6的比率,确定HPV整合状态;用β-actin引物进行荧光PCR扩增,检测每一样品中β-actin含量,通过HPV16E6与β-actin之比,计算HPV16的病毒载量。结果 55例食管癌患者手术切除组织中32例HPV16阳性;在32例HPV16E6阳性标本中,检测到6.3%(2/32)为纯游离型、84.3%(27/32)为游离/整合的混合型、9.4%(3/32)为完全整合型,提示病毒DNA与宿主基因组整合很普遍;这些标本的病毒载量大约在0.066～65.2拷贝/细胞之间。结论 HPV16阳性食管癌组织样品中,病毒DNA与宿主基因整合很普遍,HPV感染可能是食管癌发生的重要病原因子。
- 张科李淑英丁广成赵莹刘文博张云茹
- 关键词：食管癌人乳头瘤状病毒
- 携带BARF1基因的人胃上皮细胞株的建立
- 2011年
- 目的建立携带BARF1基因的人胃上皮细胞株,为探讨EB病毒编码BARF1基因对胃上皮细胞的影响而建立体外模型。方法构建携带BARF1基因的真核载体pcDNA3.1(+)-his/BARF1,转染人胃上皮细胞系GES-1,G418筛选单克隆。用CCK-8检测未转染的GES-1、转染空载体GES-1及转染BARF1基因的GES-1增殖状况。结果双酶切鉴定,666bp的BARF1基因片段已连接到真核表达载体pcDNA3.1(+)-his。转染细胞通过G418筛选,获得了稳定表达BARF1基因的人胃上皮细胞株,转染BARF1基因的GES-1细胞增殖速度显著高于未转染的GES-1和转染空载体GES-1细胞(P<0.01)。结论建立了稳定表达BARF1基因的人胃上皮细胞株。
- 李淑英张科杜海军王湛慈雅丽王新燕周玲曾毅
- 关键词：人胃上皮细胞转染BARF1基因
