徐菲菲
- 作品数：53 被引量：172H指数：8
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- 缺氧预处理心肌组织蛋白质组双向凝胶电泳分析
- ＜正＞ [目的]分析缺氧预处理诱导的心肌组织与正常心肌组织蛋白质的差异表达.[方法]参照Sasak等人报道的方法复制大鼠缺氧预处理（HPC）模型。制备心肌组织二向电泳（2-DE）蛋白质样品,按照Sanchez等人改进的胶...
- 王彦珍孙胜蔡莉蓉徐菲菲刘秀华
- 文献传递
- 缺氧预处理诱导心肌细胞蛋白质组变化的初步研究被引量：21
- 2006年
- 缺氧预处理(hypoxiapreconditioning,HPC)可模拟缺血预处理(ischemicpreconditioning,IPC)对缺血/再灌注心肌的保护作用,涉及细胞内众多分子事件.本工作旨在采用双向电泳和质谱分析等蛋白质组分析技术,发现缺氧预处理后心肌细胞蛋白质整体表达上的变化,初步分析其与缺氧预处理心肌保护作用的关系.将原代培养的SD乳鼠心肌细胞分为2组(n=6):(1)缺氧预处理组(HPC):将细胞置缺氧仓内短暂缺氧20min进行缺氧预处理(HPC),制备心肌细胞蛋白提取物;(2)对照组(control):细胞置于培养箱内持续常氧孵育至实验结束,提取蛋白.采用双向凝胶电泳和图像扫描,经蛋白样本分离和考马斯亮蓝染色后比较分析,选取3个差异表达蛋白点进行胶内酶切、肽质量指纹图谱分析和数据库检索.双向电泳可分离约529±45个蛋白质,点匹配率约为78%±7.5%.18种蛋白质在HPC后发生明显表达差异,其中12种蛋白质表达降低,6种表达增高.经质谱分析鉴定出的3种蛋白质分别为myosinlightpolypeptide3,nucleosidediphosphatekinase(NDPK)和calreticulin(CRT).缺氧预处理引起心肌细胞蛋白质组变化,初步发现其中myosinlightpolypeptide3表达下调、nucleosidediphosphatekinase和calreticulin表达增加,可能通过调节心肌细胞的收缩性、激活G蛋白、调节细胞内Ca2+浓度而保护心肌.本工作通过研究缺氧预处理延迟保护过程中心肌内源性蛋白表达水平的变化,有助于从细胞水平探讨预处理延迟保护机制.
- 徐菲菲孙胜刘秀华
- 关键词：缺氧预处理心肌细胞蛋白质组双向电泳质谱
- 心肌自噬的生理与病理生理作用被引量：10
- 2013年
- 自噬是生物体内普遍存在的一种降解长寿命蛋白质和细胞器的分解代谢过程。一定程度的自噬是一种内源性细胞保护机制,并参与适应性免疫反应;自噬不足或过度造成细胞稳态失调,加剧或导致细胞死亡。疾病和应激刺激可以造成心肌自噬活性明显增高,参与多种心脏疾病的发生和发展。调控心肌自噬可能成为心血管疾病和心力衰竭治疗的潜在靶点之一。本文综述心肌自噬的生理与病理生理意义及其分子机制,为心肌损伤和相关疾病防治提供新思路。
- 徐菲菲刘秀华
- 关键词：自噬心肌缺血再灌注线粒体内质网
- p38丝裂素活化蛋白激酶介导低氧预处理诱导的内质网应激相关的心肌细胞保护被引量：24
- 2006年
- 钙网蛋白(calreticulin,CRT)和caspase-12是重要的内质网(endoplasmicreticulum,ER)应激分子,本实验在心肌细胞低氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)模型上观察低氧预处理(hypoxicpreconditioning,HPC)对CRT和caspase-12表达及活化的影响,探讨内质网应激(endoplasmicreticulumstress,ERS)在HPC保护机制中的意义及其细胞信号转导机制。原代培养的Sprague-Dawley乳鼠心肌细胞随机分为6组:H/R组、HPC+H/R组、SB203580+HPC+H/R组、SP600125+HPC+H/R组、HPC组和对照组。以细胞存活率、乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase,LDH)活性及流式细胞术检测细胞损伤情况;West-ernblot方法检测CRT和caspase-12表达、活化及p38丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinases,MAPK)、c-JunN-terminalkinase(JNK)磷酸化水平。结果表明:(1)HPC具有细胞保护作用,与H/R组比较,HPC+H/R组细胞凋亡率和LDH漏出分别降低6.6%和70.0%,存活率增高6.4%;HPC前以特异性p38MAPK抑制剂SB203580预孵育消除HPC的保护作用,与HPC+H/R组相比,细胞凋亡率和LDH漏出分别增高5.4%和2.1倍,存活率降低5.4%,JNK特异性抑制剂SP600125预孵育对HPC的保护作用无明显影响。(2)H/R明显上调CRT表达(较对照组高8.1倍)和caspase-12活性(较对照组高33.2倍);单独HPC可诱导CRT表达增多(较对照组高2.6倍),但上调程度较H/R组低60%。H/R前进行HPC降低CRT过表达程度(降低72.4%)及caspase-12活化水平(降低59.6%)。(3)HPC前应用p38MAPK抑制剂,抑制CRT表达上调(分别较HPC+H/R组和HPC组低63.9%和71.9%),并消除HPC减轻H/R上调caspase-12活性的作用(较HPC+H/R组高7.1倍);HPC前抑制JNK活性对CRT、caspase-12表达和活化均无明显影响。上述结果提示:HPC可激发适当的ERS,抑制H/R诱导的过度ERS,减少ER凋亡信号介导的细胞凋亡。p38MAPK信号途径在HPC诱导的ER应激分子表达、抑制ER凋亡信号分子活化等机制中发挥重要作用。
- 祝筱梅刘秀华蔡莉蓉徐菲菲
- 关键词：内质网缺氧预处理低氧丝裂素活化蛋白激酶
- 低氧后处理诱导钙网蛋白表达上调的心肌保护机制被引量：8
- 2009年
- 钙网蛋白(calreticulin,CRT)是内质网(endoplasmic reticulum,ER)/肌浆网(sarcoplasmic reticulum,SR)中主要的Ca2+结合分子伴侣,参与调节细胞Ca2+稳态和协助蛋白质折叠,在内源性保护现象——缺血后处理(ischemic postconditioning,I-postC)过程中表达上调,但其发挥作用的分子机制尚未完全阐明。本工作在原代培养Sprague-Dawley(SD)乳鼠心肌细胞低氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)模型上,采用反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,AS-ODNs)抑制CRT表达,观察低氧后处理(hypoxic postconditioning,H-postC)过程中CRT下游分子钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)活性以及CaN、核转录因子κB(nuclear factor kappa B,NFκB)、凋亡相关分子Bcl-2、Bax、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)等蛋白表达变化,及其与细胞保护的关系。心肌细胞随机分为6组(n=4):对照组、低氧/复氧(H/R)组、低氧后处理(H-postC)组、AS-ODNs抑制CRT表达(AS)组、AS+H/R组和AS+H-postC组,采用台盼蓝排斥实验、培养基乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性测定及流式细胞术检测细胞损伤;经Fluo-3/AM染色,采用激光共聚焦显微镜测定细胞浆游离Ca2+浓度;采用对硝基磷酸酚(p-nitrophenyl phosphate,PNPP)底物发色法测定CaN活性;Western blot检测相关蛋白表达。结果显示:(1)H-postC可减轻H/R诱导的心肌细胞损伤,与H/R组比较,细胞存活率升高17.1%,凋亡率和LDH漏出分别降低6.67%和27.9%(P均<0.05);(2)H-postC轻度上调CRT,AS-ODNs抑制CRT表达后,部分消除后处理的心肌保护作用,与H-postC组相比,AS+H-postC组细胞存活率降低8.98%、凋亡率和LDH漏出分别升高1.74%和13.6%(P均<0.05),而胞浆游离Ca2+浓度、CaN活性、CaN及NFκB表达均未发生明显变化(P>0.05),提示CRT参与后处理保护,但不是通过胞浆Ca2+-CaN途径发挥作用;(3)H-postC抑制促凋亡蛋白Bax、CHOP表达(与H/R组相比,分别下调54%和51%,P<0.05),诱导抗凋亡蛋白Bcl-2上调(与H/R组相比,上
- 徐菲菲刘秀华张振英蔡莉蓉
- 关键词：钙网蛋白钙调神经磷酸酶缺血后处理低氧
- 钙网蛋白在心肌肥大中的研究进展被引量：2
- 2009年
- 钙网蛋白(calreticulin,CRT)是内质网中主要的Ca2+结合分子伴侣,具有调控细胞Ca2+稳态、蛋白质合成与修饰等作用,参与调节细胞凋亡、应激、心血管炎症反应等多种生理和病理生理过程。CRT属于心脏胚胎基因家族,通过调节心肌细胞肌原纤维形成、促进糖原分解、诱导肥大相关基因转录、调节心脏传导系统发育及心肌细胞凋亡等,在心脏发育及心肌肥大的发生、发展过程起重要作用,本文对CRT在心肌肥大中的作用及其信号转导途径予以综述。
- 徐菲菲刘秀华
- 关键词：钙网蛋白心肌肥大
- 周围动脉闭塞症病人皮肤血流量的改变
- ＜正＞ 目的:周围动脉闭塞症（peripheral arterial occlusive disease,PAOD）在中老年人群中发病率较高,常规采用血管造影检查进行诊断。无创性测定皮肤血流量可以了解病变部位微血管功能状...
- 蔡莉蓉刘凤英赵秀梅孙胜徐菲菲刘秀华
- 文献传递
- 创伤后应激障碍致大鼠心血管及微循环改变的研究
- 目的:探讨创伤后应激障碍(posttraumatic stress disorder,PTSD)大鼠心血管及微循环的改变。方法:成年健康雄性SD大鼠48只,随机分为PTSD模型组和正常对照组,采用单一延长刺激法复制PTS...
- 刘蜜徐菲菲李玉珍宋丹丹陶天琪王晓礽李冬刘秀华
- 关键词：创伤后应激障碍血压心功能微循环
- 文献传递
- 心血管疾病的蛋白质组学研究现状被引量：1
- 2004年
- 徐菲菲刘秀华
- 关键词：心血管疾病蛋白质组学发病机制
- 低氧预处理通过上调钙网蛋白表达减轻大鼠心肌细胞氧化应激损伤被引量：8
- 2008年
- 本文旨在探讨钙网蛋白(calreticulin,CRT)是否参与低氧预处理(hypoxic preconditioning,HPC)对心肌细胞氧化应激损伤的保护及其信号转导过程。将原代培养的Sprague-Dawley乳鼠心肌细胞随机分为8组:氧化应激(H2O2)组、短暂低氧(HPC)组、HPC+H2O2组、SB203580(p38 MAPK特异性抑制剂)+HPC+H2O2组、干扰心肌细胞CRT表达的反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,AS)组、AS+H2O2组、AS+HPC+H2O2组和对照组,以细胞存活率、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出及流式细胞术检测细胞损伤情况;采用RT-PCR和Westernblot分别检测CRT表达和p38MAPK磷酸化水平。结果表明:(1)HPC可减轻氧化应激损伤,与H2O2组比较,HPC+H2O2组细胞存活率增高18.0%,细胞凋亡率和LDH漏出分别降低19.4%和53.0%(均P<0.05);HPC前以SB203580预孵育可消除HPC保护作用,与HPC+H2O2组相比,SB203580+HPC+H2O2组细胞凋亡率和LDH漏出分别增高13.1%和96.0%,存活率降低7.3%(均P<0.05);(2)氧化应激明显上调CRT表达(H2O2组较对照组高7.1倍,P<0.05);HPC也诱导CRT表达上调(HPC组较对照组高2.4倍,P<0.05),但上调程度较H2O2组低59%(P<0.05);即HPC可减轻氧化应激诱导的CRT过表达;(3)AS干扰CRT表达后,HPC保护作用降低,相关性分析显示HPC诱导的CRT适度表达与细胞存活率呈正相关(r=0.8023,P<0.05);(4)HPC前SB203580预孵育可抑制CRT表达上调(分别较HPC+H2O2组和HPC组低75%和53%,均P<0.05)。上述结果提示,HPC可能通过p38MAPK信号途径诱导CRT表达上调,减轻心肌细胞氧化应激损伤。
- 徐菲菲刘秀华祝筱梅
- 关键词：钙网蛋白氧化应激低氧预处理丝裂素活化蛋白激酶
