张建琼
- 作品数：24 被引量：66H指数：4
- 供职机构：南京铁道医学院更多>>
- 发文基金：江苏省科技计划项目青年科技基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 人源抗丙型肝炎病毒噬菌体抗体库的构建及筛选被引量：4
- 2000年
- 目的 构建人丙型肝炎病毒 (HCV)特异性噬菌体抗体库 ,制备人源抗HCV单克隆抗体 (mAb)。方法 用常规RT PCR法 ,直接从 5例丙型肝炎患者外周血混合淋巴细胞中 ,扩增抗体重链Fd基因和κ轻链基因 ,与噬菌体载体pComb3连接 ,构建噬菌体抗体Fab库。对抗体库进行 5轮吸附 -洗脱 -扩增的亲和选择后 ,以ELISA法鉴定抗HCV噬菌体抗体。结果 RT PCR可有效地扩增出Fd和κ基因 ,并以此构建成容量为 1 2× 10 7的噬菌体抗体库。经 5轮亲和选择可使特异性噬菌体抗体得到高度富集 ,抗HCV噬菌体抗体阳性克隆达 96 %。结论 抗HCV噬菌体抗体库的构建和人源抗HCVmAb的制备 ,为HCV感染的诊断。
- 张建琼张雪萍谢维林陵单祥年王琰
- 关键词：噬菌体抗体库丙型肝炎病毒人源单克隆抗体
- 高效电转化率条件的探索被引量：16
- 2000年
- 对影响 DNA电转化效率的主要因素进行探索 .结果表明 :在相同的电场强度、电阻和电容条件下 ,电脉冲时间的长短对电转化效率有较大影响 ,电脉冲时间太长或太短均使转化效率降低 ;用对数生长早中期的细菌制备感受态细胞 ,经液氮速冻后储存于 - 70℃ ,能获得高转化效率 .
- 张建琼张雪萍谢维单祥年林陵
- 关键词：大肠杆菌电转化噬菌体抗体库DNA
- 抗生素相关性腹泻的诊断方法
- 1989年
- 难辨梭菌(clostridium difficile CD)是抗生素相关性腹泻(antibiotic associated diarrhea AAD)的病原菌。抗生素在我国应用非常普遍,但临床报道却不多,主要是尚未建立一种有效的对CD菌培养及毒素的测定方法,另外临床医师也尚未对AAD有足够的认识。最近我们建立了一种用SPA标记CD菌产生的毒素的抗体来检测标本中的毒素(SPA-COA法)
- 史俊华王思一张雪萍范子文张建琼陆全
- 关键词：DIARRHEA检测标本厌氧菌培养抗原成分凝集试验痢疾杆菌
- 荧光探针杂交聚合酶链反应检测沙门菌被引量：1
- 2000年
- 韩光明张建琼张雪萍林陵高良单祥年
- 关键词：沙门菌聚合酶链反应
- 应用PCR从丙型肝炎患者外周血B淋巴细胞扩增抗体基因被引量：2
- 2000年
- 用常规RT PCR法 ,以 1组人抗体重链和轻链简并引物 ,直接从 5名丙型肝炎患者外周血混合淋巴细胞中扩增出抗体重链Fd基因和κ轻链基因。结果提示 ,用Trizol试剂提取细胞总RNA ,以Olig(dT)引导合成cDNA第一链 ,再经PCR扩增的方法 ,是值得优先采用的方法。细胞总RNA的提取不必追求高纯度 ,少量外周血即足以满足构建抗体库所需 ,简并引物可获得良好的扩增效果 。
- 张建琼张雪萍林陵谢维单祥年
- 关键词：抗体基因外周血淋巴细胞丙型肝炎PCR
- 戊型肝炎患者粪便中病毒RNA的半定量检测
- 2000年
- 目的 探讨戊型肝炎病毒 (HEV)RNA半定量检测的意义和可行性 ,为HEVRNA的定量PCR(多聚酶链反应 )检测提供科学依据。方法 在逆转录 -套式PCR基础上 ,采用样品倍比稀释法对戊型肝炎患者粪便中病毒RNA作半定量检测。结果 2 0份粪便标本中有 14份检测结果阳性 ,其中病毒RNA拷贝水平为 8× 10 5、8× 10 7、8× 10 8、8× 10 9PCR单位·ml-1的分别为 2、10、1、1份。对同一标本而言 ,在不同稀释度时 ,其PCR产物在量上无显著差异。结论 定量PCR技术检测戊型肝炎病毒RNA是可行的 。
- 吕海芹董莉张建琼赵宇林陵
- 关键词：半定量检测戊型肝炎RNAHEV粪便
- 协同凝集试验检测轮状病毒抗原的研究被引量：1
- 1991年
- 作者收集346份粪便标本,进行协同凝集试验(CoA)检测轮状病毒(RV)抗原的研究,结果表明建立的 RV-CoA 有较好的特异性、敏感性和重复性,粪便标本用氯仿抽提、10%SPA 稳定液吸收、再与1%白蛋白0.1%吐温20混匀后进行 RV-CoA 检测,能有效控制非特异性凝集。RV-CoA 的阳性率与电镜法和 PAGE 法相比,无显著差异,但明显高于 ELISA 法。在 RV 流行季节,应用 RV-CoA 进行婴幼儿 RV 腹泻的快速诊断,可在40min 内出结果,阳性率为68.91%。RV-CoA 简便、快速、经济,适用于基层医院开展实验诊断和现场流行病学调查。
- 孟继鸿张建琼林陵郭淑珠王思智李桦谢西平施圣云
- 关键词：RV轮状病毒抗原粪便标本凝集试验阳性率
- 四种方法检测粪便中轮状病毒的比较
- 1992年
- 用电镜(EM)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和协同凝集试验(CoA)等四种方法检测腹泻患儿粪便中轮状病毒,在20份四种方法全检标本中,EM 阳性13份,PAGE16份,ELISA14份,CoA16份。在70份PAGE、ELISA 和 CcA 三种方法检测标本中,PAGE 阳性率为76%,ELISA60%,CoA79%。以 PAGE 为参照,ELISA 和 CoA 两法的敏感性各为75%和91%,特异性各为88%和59%,诊断准确度各为79%和83%。本文对四种方法的优缺点作了评价。
- 孟继鸿张建琼林陵王晓明俞泳华陶惠娥汤仕忠
- 关键词：轮状病毒微生物学检验粪便
- 人源抗丙型肝炎病毒噬菌体抗体库的构建、筛选及表达被引量：12
- 2000年
- 用常规RT PCR法 ,直接从 5名丙型肝炎患者外周血混合淋巴细胞中扩增抗体重链Fd基因和κ轻链基因 ,构建噬菌体抗体Fab库。对抗体库进行 5轮吸附 洗脱 扩增的亲和选择后 ,以ELISA法鉴定抗HCV噬菌体抗体。 5轮亲和选择使特异性噬菌体抗体得到高度富集 ,抗HCV噬菌体抗体阳性克隆达 96 %。对一阳性克隆在大肠杆菌中表达 ,经ELISA及Westernblot分析鉴定 ,证实成功表达出人源可溶性Fab。对抗体基因VH和VκDNA序列进行测定 ,证实所获基因为抗体可变区基因。抗HCV噬菌体抗体库的构建和人源抗HCV单克隆抗体Fab段的制备 ,为HCV感染的诊断、治疗和发病机制的研究提供有效的分子工具。
- 张建琼谢维张雪萍林陵单祥年王琰
- 关键词：噬菌体抗体库抗丙型肝炎病毒
- 轮状病毒新敏感细胞的筛选被引量：2
- 1993年
- 轮状病毒(RV)的细胞培养问题尚未完全解决,其原因之一可能与敏感细胞较少有关。为此,我们进行了RV新敏感细胞的筛选,发现恒河猴胚肾传代细胞Frhk-4感染不同血清型的人和动物RV标准株Wa、DS-1、YO、ST-3、SA-11和UK后,37℃旋转或静止培养均能产生明显CPE。培养物经ELISA测定含RV抗原,用PAGE检测有特征性RV核酸图型,电镜超薄切片检查感染细胞可见RV颗粒,证实Frhk-4是RV的敏感细胞,这在国内外尚未见报道。同时与MA104和CV-1细胞的比较研究表明,三种细胞对Wa和DS-1的敏感性及增殖滴度,以CV—1最高,Frhk-4次之,MA-104最低。
- 孟继鸿张建琼林陵
- 关键词：病毒增殖轮状病毒敏感细胞
