应跃斌
- 作品数：16 被引量：26H指数：4
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- 基于结构域活性分析的大肠杆菌T蛋白结构研究
- 2006年
- 大肠杆菌T蛋白含有三个结构域:分支酸变位酶、预苯酸脱氢酶和调节结构域。文章作者分段克隆了T蛋白的分支酸变位酶、预苯酸脱氢酶和调节结构域等片段,并对其进行了活性研究。研究发现,定位于N末端的分支酸变位酶结构域的比活性虽然不高,而稳定性较好;同时拥有调节结构域和预苯酸脱氢酶结构域的C末端片段,其预苯酸脱氢酶比活性的剩余百分率虽然高于分支酸变位酶结构域,但稳定性较差。作者进而表达了C末端切除38个氨基酸的T/1-336片段,发现预苯酸脱氢酶活性彻底丧失,而其分支酸变位酶和调节结构域的活性却基本保留。这说明T蛋白中分支酸变位酶结构域拥有一个相对独立、完整的结构,而预苯酸脱氢酶结构域和调节结构域交织共存,结构松散。
- 应跃斌宋见惠黄鹏陈枢青
- 关键词：大肠杆菌
- 金黄色葡萄球菌肠毒素C2中缺口的形成及影响因素的研究被引量：2
- 2009年
- 目的：探索影响金黄色葡萄球菌肠毒素C2（SEC2）断裂的因素。方法：将纯化的肠毒素在不同条件下处理,观察环境因素对其断裂程度的影响。结果：重组SEC2断裂的位置可能位于其分子93位半胱氨酸与110位半胱氨酸之间。重组SEC2在37℃下、24 h内会完全产生断裂,在碱性条件下则加速其断裂的形成;H2O2会导致重组SEC2产生非特异性降解。当溶液中有β-巯基乙醇（2%）、苯甲基磺酰胺（5-10 mmol/L）、咪唑（1 mol/L）或大肠杆菌粗提物时,重组SEC2的断裂可被有效抑制。结论：肠毒素C2容易在特定位点发生断裂,可能与蛋白质本身结构有关。
- 应跃斌孙红颖丁丁李丹曦薛乔陈枢青
- 关键词：肠毒素类超抗原重组融合蛋白质类氢离子浓度蛋白酶抑制药
- 金黄色葡萄球菌肠毒素SEC2的纯化与活性研究被引量：9
- 2006年
- 从金黄色葡萄球菌发酵液中纯化金黄色葡萄球菌肠毒素C2(SEC2)。发酵液经超滤浓缩、硫酸铵沉淀、阴离子交换色谱和分子筛色谱,获得了纯度为90%的SEC2,总收率23%。体外刺激脾淋巴细胞增殖实验以及体外肿瘤细胞增殖抑制试验表明该蛋白具备良好的超抗原活性。
- 应跃斌潘映秋张伟陈枢青
- 关键词：肠毒素超抗原纯化
- 大肠杆菌T蛋白独立结构域的活性研究
- 为了进一步研究大肠杆菌T蛋白的CM、PDH和调节结构域的结构,本研究对分段克隆的T蛋白片段进行了CM、PDH和调节结构域的活性和稳定性研究。发现CM独立结构域的比活性虽然不高,其稳定性却较好．而同时拥有调节结构域的PDH...
- 应跃斌宋见惠陈枢青
- 关键词：大肠杆菌
- 文献传递
- 葡萄球菌肠毒素C2的克隆表达及其生物学活性
- 目的克隆金黄色葡萄球茼肠毒素SEC2全长基因,构建SEC2的表达戢体,实现其可溶性表达,并对纯化的rSEC2蛋白的生物学活性进行研究。方法通过聚合酶链式反应 (Polymerase chain reaction,PCR)...
- 薛乔应跃斌潘映秋李丹曦孙红颖陈枢青
- 关键词：超抗原大肠杆菌MTT法
- 文献传递
- 金葡菌肠毒素C_2的克隆表达及其生物学活性被引量：6
- 2006年
- 目的克隆金葡菌肠毒素C2全长基因,构建SEC2的表达载体,实现其可溶性表达,并对纯化的rSEC2蛋白的生物学活性进行研究。方法通过聚合酶链式反应(polym erase chain reaction,PCR)从金葡菌FR I1230菌株基因中得到肠毒素SEC2的基因,将其克隆至融合表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌进行表达并对融合蛋白进行亲和色谱纯化。通过考察重组SEC2对淋巴细胞的增殖作用及其对肿瘤细胞杀伤活性的影响,对其超抗原活性和免疫学活性进行研究。结果得到正确的肠毒素SEC2基因序列并得到高效表达的融合蛋白,MTT法结果表明,重组SEC2表现出良好的促淋巴细胞增殖活性,且能够增强淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。结论本研究成功克隆了SEC2基因,表达并纯化出具有抗肿瘤生物学活性的重组SEC2蛋白,为进一步对其分子抗肿瘤作用机制进行研究以及构建靶向抗肿瘤融合蛋白奠定了基础。
- 薛乔应跃斌潘映秋李丹曦孙红颖陈枢青
- 关键词：超抗原大肠杆菌MTT法
- 金葡液二次开发及其超抗原的药理研究
- 陈枢青马凤森孙红颖陈静丁丁方多凤应跃斌薛乔潘映秋
- 利用小鼠及裸鼠体内抑瘤模型，完成了金葡液的药理学活性研究；了利用纳升电喷雾液质联用技术，完成了三种市售金葡液注射制剂以及由杭州国光药业有限公司提供的金葡液中蛋白质有效成分的鉴定，并明确了其中含有的杂质成分。利用基因工程和...
- 关键词：
- 关键词：金葡液药理学注射制剂
- 重组金黄色葡萄球菌肠毒素C2的表达及生物学活性分析被引量：1
- 2007年
- 目的克隆金黄色葡萄球菌肠毒素C2(SEC2)基因,添加亲和纯化标签进行原核表达,并对表达产物进行生物学活性分析。方法通过PCR从pGEM-T-SEC2质粒中亚克隆得到带有编码6个组氨酸的核苷酸序列的基因片断,构建了表达质粒pET-28a-SEC2,转化至大肠杆菌BL21中诱导表达。利用亲和层析纯化rSEC2,并采用MTT法对纯化后的rSEC2和天然SEC2生物学活性进行研究和比较。结果表达质粒pET-28a-SEC2通过测序,表明已连入正确表达目的蛋白的核苷酸序列。含有该质粒的表达菌株经IPTG诱导,产生约占菌体总蛋白40%的可溶性重组蛋白。SDS-PAGE显示,经Ni2+亲和柱纯化的目的蛋白达到了电泳纯。MTT法表明该rSEC2和天然SEC2均有显著的超抗原活性。结论成功构建了pET-28a-SEC2表达质粒,获得了与天然SEC2有着类似超抗原活性的高纯度rSEC2,为进一步研究该蛋白的抗肿瘤活性奠定了基础。
- 应跃斌李丹曦潘映秋薛乔孙红颖陈枢青
- 关键词：肠毒素超抗原克隆表达组氨酸标签
- 表达rhTNFR-Fc的CHO细胞的氨基酸代谢特征及氨基酸流加培养工艺研究
- 2008年
- 为提高表达重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白(rhTNFR-Fc)的CHO工程细胞的培养密度和目的蛋白表达,研究了葡萄糖和谷氨酰胺流加-批式培养工艺的细胞氨基酸代谢特征及游离氨基酸和大豆蛋白水解物的补加策略。通过补加葡萄糖和谷氨酰胺浓缩液分别维持其浓度为10 mmol/L和2 mmol/L左右,在不同阶段定期补加特定的氨基酸浓缩液或大豆蛋白水解物补充氨基酸消耗,检测细胞培养上清中rhTNFR-Fc的表达。谷氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、脯氨酸等4种非必需氨基酸快速消耗,是CHO工程细胞增殖和目的蛋白表达的限制性底物。以游离氨基酸、游离氨基酸合并大豆蛋白水解物补充氨基酸消耗可分别使细胞生长密度提高50%、100%,目的蛋白表达增加60%、125%,培养时程延长44%、66%,同时葡萄糖比消耗率、乳酸比生成率降低,谷氨酰胺的利用效率提高。
- 唐治华应跃斌江海燕黄敏芬罗家立陈枢青
- 关键词：氨基酸代谢
- 金葡菌肠毒素SEC2的纯化与活性研究
- 金黄色葡萄球茵肠毒素SEC2是超抗原家族的主要成员之一,已被证明为一临床药物的主要有效成分,对于肿瘤的免疫治疗有着良好的应用前景;以其为抗原而获得的单克隆抗体在食品、卫生检验领域也存在广阔的应用空间．本研究通过将产毒培养...
- 应跃斌潘映秋张伟陈枢青
- 关键词：金黄色葡萄球菌超抗原肠毒素纯化层析
- 文献传递
