周罡
- 作品数：5 被引量：5H指数：1
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 大眼鰤鲈鱼真皮肿瘤病毒(WDSV)辅助基因orfA和orfC多抗的制备及初步应用被引量：1
- 2012年
- 【目的】制备大眼鰤鲈鱼真皮肿瘤病毒(WDSV)辅助基因orfA和orfC的多克隆抗体,并用其检测酵母和肿瘤细胞中目的蛋白的表达。【方法】以WDSV基因组序列为模板,PCR扩增WDSVorfA和orfC基因,分别构建其原核表达载体,转化Rosseta(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达并纯化重组蛋白后,采用皮下多点注射结合耳静脉加强免疫的方法免疫新西兰白兔,制备抗orfA和抗orfC的多克隆抗体,用Western blot法检测抗体的特异性。用制备的多克隆抗体检测orfA和orfC融合蛋白在酵母和HeLa299、SPC-A-1肿瘤细胞中的表达。【结果】PCR扩增获得了WDSVorfA和orfC基因。成功构建了orfA和orfC基因的原核表达载体并进行了诱导表达,orfA和orfC重组融合蛋白以包涵体形式存在;采用皮下注射结合耳静脉加强免疫有效地提高了抗体效价,成功制备得到了兔抗orfA和兔抗orfC血清,抗体效价达1∶8 000～1∶10 000;通过Western blot法,利用上述抗血清分别检测到了原核表达的目的蛋白及酵母和肿瘤细胞中表达的目的蛋白。【结论】制备得到的抗orfA和抗orfC多克隆抗体具有很好的特异性,能够用于原核表达、酵母和肿瘤细胞中表达的目的蛋白的Western blot检测。
- 李铎徐坤王亮亮周罡麻丽霞张智英
- 口服重组酵母(ApoB100肽段)对小鼠产生特异性抗体的诱导作用
- 2014年
- 【目的】开发一种针对低密度脂蛋白成分ApoB100的新型重组酵母疫苗,为动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)的防治提供一种思路。【方法】利用PCR得到包含编码ApoB100的3 136-3 155位氨基酸残基的目的片段,将其克隆到酵母表达载体JMB88-HA-OVA-MCS上,构建JMB88-HA-OVA-hApoB载体,用硫酸铜诱导表达后获得HA-OVA-hApoB融合蛋白。采用口服的方法对昆明小白鼠免疫成功表达HA-OVA-hApoB蛋白的酵母细胞12周,每周1次,每次1×108个酵母细胞,免疫结束后4周采血,用Western blot检测小鼠是否产生特异性抗体。【结果】PCR扩增获得了859bp的人ApoB100基因。成功构建了JMB88-HA-OVA-hApoB载体。口服免疫12周后,HA-OVA-hApoB免疫组小鼠的血清中含有特异性ApoB100抗体。【结论】灌服表达人ApoB100肽段融合蛋白的重组酿酒酵母能诱导小鼠的免疫反应,使其产生特异性抗体。
- 麻丽霞张婷婷张优优周罡张智英
- 关键词：载脂蛋白B口服免疫
- 大眼狮鲈鱼皮肤肿瘤病毒(WDSV)逆转录病毒周期蛋白(OrfA)相互作用蛋白的酵母双杂交筛选被引量：5
- 2012年
- 大眼狮鲈鱼皮肤肿瘤(WDS)在秋季发生春季萎缩的季节性生长特点与大眼狮鲈鱼皮肤肿瘤病毒(WDSV)辅助基因的表达有关.其中辅助基因orfA的表达产物OrfA蛋白可能是1个潜在的肿瘤相关因子,OrfA与细胞周期蛋白cyclin A和cyclin D同源,也被称为逆转录病毒周期蛋白(retroviral-cyclin).为了深入研究OrfA的作用和功能,我们构建了诱饵表达载体pGBKT7-orfA,采用酵母双杂交技术,从HeLa cDNA文库中筛选与其相互的蛋白因子.通过2轮高强度压力的筛选、β-半乳糖苷酶活性验证、回转验证以及测序分析,最终获得了1个与OrfA相互作用的转录因子E2F5.OrfA C端78个氨基酸的多肽或者缺失C端78个氨基酸的OrfA突变体均不能在酵母双杂交系统中与E2F5相互作用.这些发现为进一步研究OrfA在肿瘤萎缩中的功能奠定了基础.
- 徐坤王亮亮张婷婷周罡张志强张智英
- 关键词：酵母双杂交
- 口服免疫整合表达MSTN重组酵母促进新西兰兔体重增长和肌肉发育
- 酵母口服免疫是一种安全，且高效激发机体免疫反应的方法。本研究利用口服MSTN基因整合型酵母表达MSTN蛋白，配合酵母自身是一种天然佐剂和可以在肠道中递呈抗原给树突状细胞的能力，有效引发幼兔机体产生强烈的免疫反应，产生MS...
- 陈知龙周罡张婷婷张智英
- 关键词：新西兰兔酵母表达
- 文献传递
- 人工锌指蛋白文库的构建
- 2014年
- 【目的】以猪基因组为模板,扩增天然锌指,以此建立人工锌指蛋白文库,为猪基因组的定点操作及基因表达研究奠定基础。【方法】利用质粒JMB378和JMB440构建锌指文库骨架载体JMB378-ZF1-MCS,然后根据天然锌指蛋白接头序列的保守性,设计5条简并引物扩增猪基因组中的天然单锌指结构域,将其与JMB378-ZF1-MCS载体上的人工锌指ZF1中识别GGC的锌指蛋白连接,构建二锌指蛋白文库,通过酶切方式再将天然单锌指结构域插入到二锌指蛋白文库中,构建三锌指蛋白文库。测定锌指库容量及阳性率,并通过酶切和测序检测锌指库的多样性。【结果】构建了基于猪天然锌指模块的包含ZF1的三锌指蛋白文库,库容量达到1.5×106 CFU。该文库中含有一个人工锌指蛋白ZF1和2个天然型锌指蛋白,能够对基因组中所有以GGC起始的9bp靶序列进行筛选。【结论】构建了基于天然单锌指模块的三锌指蛋白文库,为构建新型锌指蛋白提供了一种可行的方法。
- 周罡张龙刘中天任充华麻丽霞张智英
- 关键词：锌指文库构建
