王亮亮
- 作品数：4 被引量：12H指数：2
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 不同绵羊品种膻味物质分离、鉴定和比较分析被引量：7
- 2011年
- 为进一步优化4-甲基辛酸和4-甲基壬酸的测定参数和比较不同地域不同绵羊膻味物质的差异,分别采集约6月龄蒙古羊、滩羊、小尾寒羊、同羊皮下脂肪样品,用气相色谱对其分析测定。采用同时蒸馏萃取方法,设定30、45、60、75、90、1051、20 min共7个梯度的蒸馏时间以及0.05、0.10、0.25、0.50、1.02、.0 mL 6个脂肪酸样品的加入量,来确定最佳蒸馏时间和最低脂肪酸添加量对同时蒸馏萃取灵敏度的影响。结果表明,蒸馏时间为90 min、最低脂肪酸加入量为0.5 mL时,4-甲基辛酸和4-甲基壬酸的回收率最高。4个绵羊品种中,小尾寒羊的4-甲基辛酸含量最高,显著高于蒙古羊和同羊(P<0.05);滩羊的4-甲基辛酸含量显著高于蒙古羊(P<0.05);小尾寒羊与滩羊、滩羊与同羊、同羊与蒙古羊的4-甲基辛酸含量差异不显著(P>0.05)。不同地域的绵羊品种对4-甲基壬酸含量的影响差异不显著(P>0.05)。说明,在采用同时蒸馏萃取-气相色谱方法分离测定4-甲基辛酸和4-甲基壬酸时,蒸馏时间为90 min、最低脂肪酸加入量为0.5 mL时,4-甲基辛酸和4-甲基壬酸的回收率效果最好,且不同地域绵羊品种膻味物质含量有一定差异,小尾寒羊脂肪组织中4-甲基辛酸的含量最高。
- 丁艳艳王亮亮韩卫杰陈玉林杨雨鑫
- 关键词：绵羊品种
- 大眼鰤鲈鱼真皮肿瘤病毒(WDSV)辅助基因orfA与orfC重组腺病毒的制备及应用
- 2012年
- 【目的】扩增大眼鰤鲈鱼真皮肿瘤病毒(WDSV)辅助基因orfA和orfC,制备orfA和orfC重组腺病毒,并感染Hela229和SPC-A-1细胞,以检测orfA和orfC对肿瘤细胞的影响。【方法】从pWDSV全长表达载体中扩增WDSV辅助基因orfA和orfC,构建orfA和orfC基因的重组腺病毒载体以及对照空载体,采用脂质体介导法转染HEK293细胞进行包装和扩增,用绿色荧光蛋白法测定重组腺病毒的滴度;将重组腺病毒转染肿瘤细胞Hela229和SPC-A-1,采用Weastern Blot方法检测基因orfA和orfC的表达情况,并用MTT法检测其对肿瘤细胞Hela229和SPC-A-1的影响。【结果】PCR扩增获得了891bp的orfA基因和360bp的orfC基因,成功构建了对照空载体pAdEasy-l-CK和含有orfA和orfC基因的腺病毒载体pAdEasy-l-orfA和pAdEasy-l-orfC,转染HEK293细胞并进行包装后获得了重组腺病毒Ad-CK、Ad-orfA和Ad-orfC,用Hela229细胞测得其滴度分别为5.67×109,2.00×109和7.33×108 GFU/mL。重组腺病毒对肿瘤细胞Hela229和SPC-A-1的生长具有抑制作用。【结论】初步证明了orfA和orfC基因对人类肿瘤细胞Hela229和SPC-A-1的生长具有抑制作用,为进一步研究WDSV辅助基因对人类肿瘤的影响以及肿瘤萎缩的分子机理奠定了基础。
- 张优优徐坤王亮亮张婷婷辛颖任充华闫强张智英
- 关键词：重组腺病毒肿瘤
- 大眼鰤鲈鱼真皮肿瘤病毒(WDSV)辅助基因orfA和orfC多抗的制备及初步应用被引量：1
- 2012年
- 【目的】制备大眼鰤鲈鱼真皮肿瘤病毒(WDSV)辅助基因orfA和orfC的多克隆抗体,并用其检测酵母和肿瘤细胞中目的蛋白的表达。【方法】以WDSV基因组序列为模板,PCR扩增WDSVorfA和orfC基因,分别构建其原核表达载体,转化Rosseta(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达并纯化重组蛋白后,采用皮下多点注射结合耳静脉加强免疫的方法免疫新西兰白兔,制备抗orfA和抗orfC的多克隆抗体,用Western blot法检测抗体的特异性。用制备的多克隆抗体检测orfA和orfC融合蛋白在酵母和HeLa299、SPC-A-1肿瘤细胞中的表达。【结果】PCR扩增获得了WDSVorfA和orfC基因。成功构建了orfA和orfC基因的原核表达载体并进行了诱导表达,orfA和orfC重组融合蛋白以包涵体形式存在;采用皮下注射结合耳静脉加强免疫有效地提高了抗体效价,成功制备得到了兔抗orfA和兔抗orfC血清,抗体效价达1∶8 000～1∶10 000;通过Western blot法,利用上述抗血清分别检测到了原核表达的目的蛋白及酵母和肿瘤细胞中表达的目的蛋白。【结论】制备得到的抗orfA和抗orfC多克隆抗体具有很好的特异性,能够用于原核表达、酵母和肿瘤细胞中表达的目的蛋白的Western blot检测。
- 李铎徐坤王亮亮周罡麻丽霞张智英
- 大眼狮鲈鱼皮肤肿瘤病毒(WDSV)逆转录病毒周期蛋白(OrfA)相互作用蛋白的酵母双杂交筛选被引量：5
- 2012年
- 大眼狮鲈鱼皮肤肿瘤(WDS)在秋季发生春季萎缩的季节性生长特点与大眼狮鲈鱼皮肤肿瘤病毒(WDSV)辅助基因的表达有关.其中辅助基因orfA的表达产物OrfA蛋白可能是1个潜在的肿瘤相关因子,OrfA与细胞周期蛋白cyclin A和cyclin D同源,也被称为逆转录病毒周期蛋白(retroviral-cyclin).为了深入研究OrfA的作用和功能,我们构建了诱饵表达载体pGBKT7-orfA,采用酵母双杂交技术,从HeLa cDNA文库中筛选与其相互的蛋白因子.通过2轮高强度压力的筛选、β-半乳糖苷酶活性验证、回转验证以及测序分析,最终获得了1个与OrfA相互作用的转录因子E2F5.OrfA C端78个氨基酸的多肽或者缺失C端78个氨基酸的OrfA突变体均不能在酵母双杂交系统中与E2F5相互作用.这些发现为进一步研究OrfA在肿瘤萎缩中的功能奠定了基础.
- 徐坤王亮亮张婷婷周罡张志强张智英
- 关键词：酵母双杂交
